尿中二氨基二苯基甲烷液质联用测定方法研究

发布时间：2018-03-22 04:29

本文选题：尿　切入点：二苯基甲烷二异氰酸酯(MDI)　出处：《中国疾病预防控制中心》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：二苯基甲烷二异氰酸酯(diphenylmethane diisocyanate,MDI)是目前世界上生产量最大、工业用途最广的异氰酸酯,广泛应用于汽车制造、冰箱制造、土木建筑、家私家具、鞋类、织物、机电、医疗等诸多领域。MDI有致敏作用,容易引发支气管哮喘,是职业性哮喘的主要致病因素,长期低剂量接触容易引起肺功能损伤,对免疫系统产生影响,具有一定的生殖发育毒性和遗传毒性。研究表明,MDI代谢过程形成的谷胱甘肽结合物、葡萄糖醛酸结合物、蛋白质等加合物经体内水解后转化成二氨基二苯基甲烷(methylenedianiline,MDA),随尿液排出体外;尿中MDA的含量与空气中MDI的浓度有相关性,尿中MDA的含量可反映出人体近期MDI的暴露情况。德国科学研究联合会(DFG)制订了 MDI生物耐受限值(BAT)为班末尿中MDA浓度为10μg/L。英国健康与安全执行局(HSE)给出的MDI生物监测指导值(MGBV)为班末尿中MDA为11μmoL/moL肌酐。我国尚未制定MDI的生物接触限值(BEL)。本研究采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术,对尿中MDA的检测方法进行研究,为MDI的暴露评估、暴露人群的健康风险评估以及MDI生物接触限值的制定提供技术支持。本研究采用液相色谱-串联质谱法对尿中MDA进行测定,对仪器测定条件、样品前处理方法、定量方法等进行实验,按照《职业卫生标准制定指南生物材料中化学物质测定方法》(GBZ/T210.5-2008)的要求,对方法的线性范围、检出限、准确度、精密度、干扰情况等方法性能指标进行研究,采用建立的检测方法进行了现场应用,主要研究结果如下:质谱条件:离子化模式:电喷雾电离正离子模式(ESI+);质谱扫描方式:多反应监测(MRM);[M+H]+离子质荷比为199.1,定性离子(m/z)165.1,定量离子(m/z)106.1;碰撞气(CAD):9psi;气帘气(CUR):40psi;离子喷雾电压(IS):5500V;雾化干燥气温度(TEM):650℃,雾化气(GS1):65psi,辅助气(GS2):65psi;射入电压(EP):10V;碰撞室射出电压(CXP):14 V;去簇电压(DP):90V;碰撞能(CE):35eV。液相色谱条件:色谱柱:Shim-pack XR-ODS(75mm×2.0mm,2.2μm),柱温:40℃,进样体积:5μL,流动相:A0.5mmoL/L乙酸铵+0.01%乙酸水溶液/B乙腈,流速:0.4mL/min,梯度洗脱程序:0～0.5min,10%B,0.5～1.5min,10%～50%B,1.5～3.0min,50%B,3.0～3.5min,50%～90%B,3.5～4.5min,90%B,4.5～4.6min,90%～10%B,4.6～7min,10%B。样品前处理方法:尿样采用盐酸或硫酸水解,乙腈液液萃取。(1)盐酸溶液水解:1mL尿样加入6moL/L盐酸溶液0.5mL,100°C水浴16h后放至室温,加入5moL/L氢氧化钠溶液0.8mL,混匀放至室温,加入0.5g氯化钠,2mL乙腈,振摇萃取5min,5000转/min离心5min,取乙腈层经0.22μm尼龙有机滤膜过滤后测定。(2)硫酸溶液水解:1mL尿样加入6moL/L硫酸溶液0.5mL,100℃水浴16h后放至室温,加入10moL/L氢氧化钠溶液0.8mL,混匀放至室温,加入0.5g氯化钠,2mL乙腈,振摇萃取5min,5000转/min离心5min,取乙腈层经0.22μm尼龙有机滤膜过滤后测定。方法性能指标:(1)盐酸溶液水解方法性能指标:本方法采用标准曲线外标法定量,MDA的含量在0.05μg/L～20.00μg/L范围内线性良好,相关系数r0.999,方法最低检出浓度为0.02μg/L,最低定量浓度为0.05μg/L。正常人尿加标回收率在105.5%～109.7%之间,日内相对标准偏差在4.1%～～4.4%之间,日间相对标准偏差在4.66%～5.9%之间。接触者尿加标回收率在88.7%～110.1%之间。在选定的实验条件下,现场可能共存的干扰物以及样品中的基体成分不干扰测定。(2)硫酸溶液水解方法性能指标:本方法采用标准曲线外标法定量,MDA的含量在0.05μg/L～20.00μg/L范围内线性良好,相关系数r＞0.999。方法的最低检出浓度为0.02μg/L,最低定量浓度为0.05μg/L。正常人尿加标回收率在95.9%～99.4%之间,日内相对标准偏差在3.0%～7.0%之间,日间相对标准偏差在2.7%～7.3%之间。接触者尿加标回收率在91.0%～103.4%之间。在选定的实验条件下,现场可能共存的干扰物以及样品中的基体成分不干扰测定。尿样保存条件:(1)尿样按1%比例加入盐酸,4℃下可保存一周,-35℃下可保存14天。(2)尿样按0.5%比例加入硫酸,-35℃～4℃下可保存14天。采用建立的方法对某使用热塑性MDI弹性体的精密塑胶制品厂的MDI接触工人和对照人群尿中MDA的含量进行检测。4名MDI接触工人共15份尿样中MDA的质量浓度为0.06μg/L～2.03μg/L;6名疑似接触工人共15份尿样中MDA的质量浓度为0.02μg/L～0.22μg/L;33份对照组尿样中MDA质量浓度为0.03μg/L～0.30μg/L。采用建立的方法对36份正常人尿中MDA含量进行测定,正常人群尿样中MDA质量浓度为0.02μg/L～0.37μg/L。工人尿样中MDA的浓度与其实际接触情况相符。本研究建立了尿液中MDA的液相色谱-串联质谱测定方法,方法的各项性能指标满足《职业卫生标准制定指南生物材料中化学物质测定方法》(GBZ/T210.5-2008)的要求。通过现场应用表明该方法适用于MDI职业接触人群和正常人群尿中MDA的测定。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：中国疾病预防控制中心
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R446.12;O657.63

【参考文献】