基于CRISPR-Cas9系统的HSV-1基因治疗载体的快速构建

发布时间：2018-10-26 19:25

【摘要】：基因改造的1型单纯疱疹病毒(HSV-1)载体在肿瘤溶瘤病毒治疗及基因转导中具有广泛的应用前景。本研究报道一种基于CRISPR-Cas9系统的高效快速的重组HSV-1载体构建方法。首先,双顺反表达靶点g DNA和Cas9核酸酶的基因编辑质粒与同源重组模板质粒共转染Vero细胞后,用亲本株感染细胞;然后,Cas9对胞内病毒基因组定点切割,诱导外源基因同源重组,修复至病毒基因组指定位点。通过PCR、Western印迹、免疫荧光等方法证明,相比于传统自发同源重组的构建方法,该方法能显著提升病毒重组率(4.1%vs 1.1%)。同时,本研究建立了一种新的单克隆病毒纯化方案,简化了阳性病毒筛选步骤。本研究结果提供了一种高效快速的重组HSV-1构建方法,这对于HSV-1相关基因治疗及其病理机制研究将具有重要意义。
[Abstract]:The modified herpes simplex virus (HSV-1) vector has been widely used in the treatment and gene transduction of tumor oncolytic virus. This paper reports an efficient and fast construction method of recombinant HSV-1 vector based on CRISPR-Cas9 system. Firstly, the gene editing plasmid of double cis-reverse expression target g DNA and Cas9 nuclease was co-transfected with homologous recombinant template plasmid into Vero cells and infected with parent strain. Then Cas9 cleans the genome of the virus and induces the homologous recombination of the foreign gene to the designated site of the virus genome. At the same time, a new method of monoclonal virus purification was established to simplify the screening of positive viruses. The results of this study provide an efficient and rapid method for construction of recombinant HSV-1, which will be of great significance for the study of HSV-1 related gene therapy and its pathological mechanism.
【作者单位】： 昆明医科大学第二附属医院中心实验室;
【基金】：云南省应用基础研究(昆医联合专项)(No.2015FA006,2015FB055,2017FE468)~~
【分类号】：Q78;R450

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本文编号：2296719