雌激素对失血性休克小鼠血管低反应性的作用与机制研究

发布时间：2018-12-31 08:13

【摘要】：失血性休克后,持续缺血以及不恰当的液体复苏均可引起过度的炎症反应、血管低反应性、血管高通透性、血液流变性异常、心肌收缩功能障碍,甚至引起器官损伤,发生多器官功能障碍综合征或多器官衰竭。其中,微血管对血管活性物质的反应性低下是引起顽固性低血压、休克难治的关键环节。研究发现,雌激素可提高实验动物失血性休克的耐受性,其作用机制涉及增强心肌收缩性、减轻线粒体损伤从而增加ATP生成、改善细胞能量代谢障碍、抑制氧化应激、减轻炎症反应、改善免疫功能,最终减轻失血性休克导致的器官损伤。但是,雌激素干预失血性休克的作用是否与改善血管反应性有关?研究较少。有研究表明,小G蛋白Rho A低表达与失血性休克后血管低反应性的发生密切相关。那么,雌激素改善失血性休克血管反应性的作用机制是否与Rho A有关?有待进一步研究。为此,本研究应用17β-雌二醇(E2)作为干预因素,观察E2对失血性休克小鼠活体肠粘膜血流量变化以及离体微血管反应性的作用,进一步应用相关工具药,观察Rho A-Rho激酶(ROCK)-肌球蛋白轻链激酶磷酸酶(MLCP)信号通路在E2提高休克小鼠血管反应性中的作用,探讨雌激素对失血性休克小鼠血管反应性的作用与机制。将36只SPF级C57BL/6健康雌鼠随机均分为卵巢去势组(OVX组,24只,进行卵巢结扎切除手术)、假去势组(OVI组,12只,不进行卵巢结扎切除手术,只切除卵巢周围少量脂肪组织)。一周后,OVX组12只接受E2处理(每晚8:00颈背部皮下给药,140μg·kg-1),余12只给予等量溶媒(Vehicle);OVI组给予等量Vehicle;持续1周。然后,分别将OVX+Vehicle组、OVX+E2组、OVI组分为休克组(Shock组,建立失血性休克模型:40±2 mm Hg维持1 h,液体复苏)、假手术组(Sham组)。这样,实验的总体分组情况为:Sham+OVX+Vehicle组、Shock+OVX+Vehicle组、Sham+OVX+E2组、Shock+OVX+E2组、Sham+OVI+Vehicle组、Shock+OVI+Vehicle组。各组动物在补液结束后4 h或相应时间点,行腹部手术,观察固定位置肠袢血流量变化。随后,留取血清,用于检测雌激素水平。留取固定位置的肠袢,手术显微镜下,分离二级微动脉,制备微血管环,挂于注有PSS液的四腔线性肌动仪灌流槽的浴槽中,持续冲入95%O2和5%CO2混合气体,待温度升至37℃,调零、标准化;观察微血管对梯度浓度去甲肾上腺素(NE)的反应性;然后,将来自各组小鼠的微血管环分别与Rho A-ROCK-MLCP信号通路的工具药U-46619、Y-27632、C3转移酶、岗田酸(OA)孵育或联合孵育,观察对梯度浓度NE的反应性。研究结果首先发现:小鼠去势后,血浆雌激素水平显著下降;雌激素治疗后,血浆雌激素水平显著升高。微血管反应性观察发现,Sham+OVX+E2组微血管对多个浓度NE的反应性显著高于Sham+OVI+Vehicle组、Sham+OVX+Vehicle组;Shock+OVI+Vehicle组、Shock+OVX+Vehicle组、Shock+OVX+E2组微血管对多个浓度NE的反应性分别显著低于Sham+OVI+Vehicle组、Sham+OVX+Vehicle组、Sham+OVX+E2组;Shock+OVI+Vehicle组微血管反应性显著高于Shock+OVX+Vehicle组(NE为1×10-7mol·L-1),Shock+OVX+E2组微血管对多个浓度NE的反应性显著高于Shock+OVI+Vehicle组、Shock+OVX+Vehicle组。Rho A激动剂U-46619显著提高了Sham+OVI+Vehicle组、Sham+OVX+Vehicle组、Sham+OVX+E2组小鼠微血管对多个浓度NE的反应性,MLCP抑制剂OA仅抑制了Sham+OVI+Vehicle组和Sham+OVX+Vehicle组微血管对3×10-5 mol·L-1NE的反应性,Rho A抑制剂C3转移酶以及ROCK抑制剂Y-27632降低了Sham+OVI+Vehicle组、Sham+OVX+Vehicle组微血管对多个浓度NE的反应性。U-46619显著提高了Shock+OVI+Vehicle组和Shock+OVX+Vehicle组小鼠微血管对多个浓度梯度NE的反应性,该作用被Y-27632废除;OA对Shock+OVI+Vehicle组、Shock+OVX+Vehicle组小鼠微血管对梯度NE的反应性无明显作用,OA与Y-27632联合用药显著降低了Shock+OVI+Vehicle组和Shock+OVX+Vehicle组微血管对多个浓度NE的反应性。Y-27632显著抑制了Shock+OVX+E2组小鼠微血管对各个浓度NE的反应性,该作用被U-46619显著抑制;C3转移酶对Shock+OVX+E2组小鼠微血管反应性无明显作用,与U-46619联合用药显著提高了Shock+OVX+E2组微血管对多个浓度NE的反应性。最后,研究结果显示,Shock+OVX+Vehicle组小鼠肠袢血流量显著低于Sham+OVX+Vehicle组,E2治疗(Shock+OVX+E2组)显著提高了肠袢血流量,显著高于Shock+OVX+Vehicle组。研究结果表明:失血性休克雌鼠的微血管反应性下降,卵巢去势进一步降低了失血性休克雌鼠的微血管反应性,雌激素治疗显著提高了小鼠微血管反应性,其机制与Rho A-ROCK-MLCP信号通路有关。
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【学位授予单位】：河北北方学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R459.7

【参考文献】