纳米金标记共振光散射法均相测定神经元特异性烯醇化酶
【图文】：
的光散射信号改变可建立一种均相免疫检测NSE的新方法。2.1吸收光谱分别考察了体系的吸收光谱和共振光散射光谱特性。在金标记anti-NSE溶液中加入不同质量浓度的NSE获得了NSE的免疫金复合物。当NSE质量浓度分别为0，5，10，20ng/mL时，其体系的最大吸收峰分别为521，524，530，537nm，NSE免疫金体系的最大吸收波长随NSE质量浓度的增加出现了红移(图1)。据研究表明，纳米金的吸收峰随其纳米颗粒粒径的增大红移［14］，由此可知，在NSE与金标记anti-NSE发生免疫反应后，纳米金发生了凝集形成了粒径更大的微粒。图1NSE免疫金复合物的吸收光谱图Fig.1AbsorptionspectraofimmunogoldcompoundsforNSE2.2共振光散射光谱胶体金、金标记anti-NSE溶液在620nm处具有共振光散射峰，但散射光信号值很校当anti-NSE和NSE发生免疫反应后，当未加入PEG时，NSE的免疫金复合物散射光信号仅发生微弱的增强。当加入高浓度PEG溶液后，NSE的免疫金复合物体系在470nm，620nm处出现了明显的共振光散射峰，620nm处的散射强度值显著增强·1199·
逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄分析试验室第36卷(图2)。据文献报道，纳米金具有表面等离子共振耦合效应，聚集态的纳米金颗粒相比分散态的纳米金会产生较强的散射光信号［15］。由此可知，在高浓度的PEG作用下，NSE免疫金复合物进一步凝集形成了粒径更大的微粒。若将聚集纳米金颗粒的散射光信号用于NSE检测，可显著提高方法的灵敏度，，该体系选择了在620nm处测定共振光散射强度。图2NSE免疫金复合物的共振光散射光谱图Fig.2ＲesonancelightscatteringspectraofimmunogoldcompoundsforNSE2.3实验条件优化2.3.1金标记anti-NSE制备条件优化如实验步骤所述，加入0.1mol/LHCl或0.1mol/LK2CO3溶液调节胶体金的pH为6.0～10.0。当胶体金的pH在6.0～7.5时，胶体金呈现紫色，纳米金发生了较为明显的聚集且I620nm较大。当胶体金的pH在8.0～10.0时，金标记anti-NSE能够在10%KCl溶液的作用下维持酒红色，且I620nm趋于稳定。实验选择pH9.0。移取0.50mL胶体金并采用0.1mol/LK2CO3溶液调节至pH9.0，再分别加入0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0μgNSE抗体制备金标记anti-NSE。当anti-NSE用量为4.0～9.0μg时，金标记anti-NSE在10%KCl溶液的作用下仍为酒红色，未发生明显的聚集而呈现紫色，且I620nm趋于稳定。故选择在0.50mL胶体金中加入5.0μganti-NSE制备金标记anti-NSE光谱探针，即1.00mL胶体金的NSE抗体用量为10.0μg。2.3.2NSE免疫金复合物生成条件的优化考察了柠檬酸-Na2HPO4和KH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液对NSE免疫金体系的影响，NSE免疫金反应体系在以上两种缓冲溶液中均反应较好，但与KH2PO
【作者单位】： 菏泽医学专科学校中心实验室;山东菏泽市立医院检验科;
【基金】：山东省高等学校科技计划项目(J11LB01)资助
【分类号】：O657.3;R446.6
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