在脓毒症状态下血浆四连接素水平及其与组织表达的关系

发布时间：2020-03-25 04:32

【摘要】：背景脓毒症是机体对感染的反应失调而导致危及生命的器官功能障碍。脓毒症的本质是由病原微生物引起的,伴有其他有害刺激因素参与的对机体造成严重损害的过度炎症反应。脓毒症是因宿主对感染的反应失调导致的,这种反应失调不仅反应在促炎和抗炎反应失调,免疫失衡,还表现为凝血功能紊乱。在脓毒症发病过程中凝血、纤溶、炎症相互影响,导致抗凝物质减少,凝血活化,血小板活化和内皮细胞功能障碍,使组织型纤溶酶原激活物(Tissue plasminogen activetor,tPA)产生减少、纤溶抑制物增多,因此脓毒症弥漫性血管内凝血(Disseminated intravascular coagulation,DIC)时纤溶受到抑制。四连接素(tetranectin,TN)对纤溶酶原的Kringie4区有特殊的亲和性,能够与纤溶酶原结合激活纤溶酶原转变为纤溶酶,促进溶血。因此我们目前推测TN参与了脓毒症凝血功能紊乱的发病过程。目的通过Western Blotting实验检测TN在正常人、肺炎患者、脓毒症患者血浆中的表达水平;检测TN在正常小鼠血浆、肾脏、肺脏、肝脏、脾脏、心脏、脑组织匀浆液中的表达水平;检测TN在盲肠结扎穿孔法(The cecal ligation and perforation,CLP)脓毒症小鼠模型血浆、肺脏组织匀浆液中的表达水平。有望为脓毒症的诊断与治疗提供有价值的依据。研究方法1.研究对象的选择:采用前瞻性、随机、临床对照研究(RCT)方法,选择2016-09-22至2016-12-02在河南大学淮河医院体检科的正常人;2016-09-22至2016-12-02在河南大学淮河医院呼吸与危重症科的肺炎患者和脓毒症患者;正常小鼠;CLP脓毒症小鼠模型。2.研究分组:(1)体检科正常人:正常人5例作为对照组,其中男5例,女0例;年龄42~80岁平均年龄在58.4±2.9岁。(2)肺炎患者:选取肺炎患者6例,其中男6例,女0例;年龄40~80岁,平均年龄在59.6±4.6岁。(3)脓毒症患者:选取脓毒症患者8例;其中男8例,女0例;年龄45-80岁,平均年龄60±7.9岁;脓毒症患者SOFA评分1~6分3例,7~12分3例,13~18分1例,19~24分1例。(4)选择BALB/c雄性,7-8周正常小鼠1只;CLP脓毒症小鼠模型21只。3.排除标准3.1脓毒症患者排除标准:(1)年龄18岁;(2)妊娠及哺乳期妇女;(3)有免疫系统疾病者;(4)HIV阳性者;(5)肝脏或肾脏功能衰竭者;(6)入住RICU48小时者;(7)前6个月内接受化疗者;(8)目前或前3个月接受糖皮质激素或其他免疫调节剂、免疫抑制剂治疗者。3.2肺炎患者排除标准:(1)肺结核;(2)肺部肿瘤;(3)非感染性肺间质性疾病;(4)肺嗜酸性粒细胞浸润症。(5)肺血管炎;(6)肺不张;(7)肺水肿;(8)肺栓塞。4.入选标准:(1)社区获得性肺炎指南(2016版)(2)脓毒症指南3.0(2016版)5.实验标本:(1)正常人血浆标本;(2)肺炎患者血浆标本;(3)脓毒症患者血浆标本;(3)正常小鼠血浆、肺脏、肝脏、心脏、脾脏、肾脏、脑组织标本。(4)0h、2h、6h、12h、24h、48h、72hCLP脓毒症小鼠模型的血浆、肺脏组织标本。6.实验目的:通过Western Blotting实验检测TN在实验标本中的表达水平。7.最后数据分析采用均数±标准差(sx?)表示,在不同时间点取不同组的样品数据,用SPSS 22.0等软件对结果进行统计分析,单因素方差分析,重复测量方差分析,P0.05被认为有统计学意义。结果1.TN在人血浆中的表达水平结果示:正常人最高,肺炎患者次之,脓毒症患者最低,(P0.05有统计学意义)。2.TN在正常小鼠脏器中的表达水平结果示:TN在肺脏组织匀浆液中的表达水平较肝脏、肾脏、脾脏、心脏、脑组织匀浆液中的表达水平明显高。3.TN在CLP脓毒症小鼠模型肺脏组织匀浆液中表达水平结果示:在0h、2h表达水平有升高,在6h、12h的表达水平逐渐下降,在24h、48h、72h时表达水平逐渐升高。4.TN在CLP脓毒症小鼠模型血浆中的表达水平结果示:在0h、2h、6h的表达水平逐渐降低,12h较24h的表达水平高,24h、48h、72h的表达水平逐渐升高。结论1.TN在脓毒症患者血浆中的表达水平下降。2.TN在正常小鼠脏器中,肺脏组织匀浆液中表达水平最高。3.TN在CLP脓毒症小鼠模型肺脏组织匀浆液中24h、48h、72h的表达水平与血浆标本中的表达水平基本一致。4.TN在CLP脓毒症小鼠模型血浆中24h、48h、72h的表达水平逐渐升高推测是肺脏合成导致的。
【图文】：

肺脏,肾脏,血浆,肝脏

图 3-2(a): TN 在正常小鼠的血浆、肺脏、心脏、肾脏、肝脏、脾脏、脑组中 Western Blotting 结果的表达。图 3-2(b)：TN 在肺脏组织匀浆液中的表达水平最高。

小鼠模型,脓毒症,表达水平,血浆

图 3-4(a)：TN 在 CLP 脓毒症小鼠模型血浆中 Western Blotting 结果的表达。图 3-4(b)：TN 在 CLP 脓毒症小鼠模型血浆中的表达水平示：在 0h、2h、6h 表平逐渐下降，，12h 较 24h 表达水平高，在 24h、48h、72h 表达水平又逐渐升高。
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R459.7

【参考文献】