陕西汉族育龄妇女细菌性阴道病的菌群研究
发布时间：2020-03-29 12:51
【摘要】：目的:细菌性阴道病(Bacterial Vaginosis,BV)是育龄妇女的常见病症,并伴有潜在的严重副作用,包括早产风险的增加。随着微生物组测序技术的进步,对BV复杂机制的研究有了新的进展,逐渐衍生出了一些新的诊断方法。本研究通过使用12K Flex Real-Time PCR技术和二代测序技术(Next Generation Sequencing,NGS)对17例中间型BV、26例细菌性阴道病患者和19例健康人群进行阴道菌群的检测与分析,对健康人群阴道内的优势菌种和BV患者的复杂菌群构成进行对比研究。本研究的主要目的是:一是明确BV患者的阴道内的病原菌;二是分析中间型BV、BV患者和健康人群的阴道菌群分布差异,以获得对阴道菌群分布更加全面的、准确的认识,为BV病因的探讨和混合感染的防治提供一定的科学依据。方法:以2017年8月到2017年12月期间由西安医学院第一附属医院的妇科专家诊室的BV患者和正常人为研究对象,取患者的阴道分泌物为实验样本,采用阴道微生态检测方法诊断BV。(1)采用QuantStudioTM 12K Flex Real-Time PCR检测技术对阴道菌群中常见的微生物进行物种鉴定;(2)基于V3-V4区的16S rDNA扩增子测序检测阴道菌群的细菌多样性。结果:(1)健康人群阴道内的菌群结构相对较为简单,物种丰富度低,而BV患者的菌群结构复杂,且物种丰富度远高于正常人。(2)PcoA分析显示中间型BV和BV患者在菌群的分布上差异不大,在属水平的热图分布中,这两组样本可以明确的区分开,同时健康组与BV组和中间型BV组之间可以清晰的区分开来。(3)健康组优势菌群主要以乳酸杆菌属(Lactobacillus)为主,而BV患者的优势菌群主要以加德纳菌属(Gardnerella)、普雷沃菌属(Prevotella)、纤毛菌属(Sneathia)、巨球型菌属(Megasphaera)、奇异菌属(Atopobium)、链球菌属(Streptococcus)、Prevotella_7、支原体属(Mycoplasma)为主。(4)QuantStudio~(TM) 12K Flex Real-Time PCR检测技术与NGS技术检测的优势菌群基本一致,且12K Flex Real-Time PCR检测技术可以鉴定到种。结论:QuantStudio ~(TM) 12K Flex Real-Time PCR检测技术与NGS技术这两种检测技术都有自身的优势。但是,12K Flex Real-Time PCR检测技术可以具体的鉴定到物种的水平。BV患者的阴道菌群有较高的物种多样性,菌群构成复杂,且优势菌群以厌氧菌为主;中间型BV与BV患者阴道菌群有显著性的差异,中间型BV的乳杆菌属比BV患者丰富度高;健康人群的阴道菌群物种丰富度低,菌群构成简单,主要以乳杆菌属为主。
【图文】：
1.2 QuantStudioTM 12K Flex Real-Time PCR System 检测技术的概述1.2.1 QuantStudioTM12K Flex Real-Time PCR System 检测技术QuantStudioTM12K Flex Real-Time PCR System 检测系统是由 Thermo FScientific 负责研发的，然后国家微检测中心进行仪器的订购，其大致操作流程图如 它采用了 Real-Time PCR 检测技术，可以满足临床阴道内病原微生物的检测，并且它用全新的工业设计和 OpenArrayTM微流体技术，可以达到极高的样本量和检测通量QuantStudio 12K Flex Real-Time PCR System 可以进行高通量荧光定量 PCR、数字 功能。此外，QuantStudio 12K Flex Real-Time PCR System 检测系统可以同时运行 OpenArray plate，一次可检测 96 个样本。该检测技术所应用到的探针和引物预先被包在 OpenArray plate 的每个小孔中，最大程度的降低了人为操作带来的失误和环境的染；每张芯片可发生 3072 个反应，，每次实验可允许 4 张芯片同时反应，总反应达 12个。
图 2.2 部分样本、阴性对照、阴道微生物扩增指控的扩增曲线Fig 2.2 Amplification curves of some samples, negative controls, and Vaginal MicrobiotaAmplification Control注：图中 A、B、C、D、E 分别是 Mix、Water，nuclease-free、无菌棉签拭子、TaqManR VaginalMicrobiota Amplification Control、样本 A7。2.4.4 BV 患者与正常人的病原菌检出分析BV 患者通过 OpenArray 检测，发现 BV 患者主要检出微生物从高到低依次是：阴道加德纳菌（Gardnerella vaginalis）、惰性乳酸杆菌（Lactobacillus iners）、阴道阿波托菌（Atopobium vaginae）、普雷沃双歧杆菌（Prevotella bivia）、解脲支原体（Ureaplasmaurealyticum）、人型支原体（Mycoplasma hominis）、BVAB2、巨型球菌Ⅰ（UnculturedMegasphera 1 ）；正常人群的主要检出微生物从高到低依次是：惰性乳酸杆菌（Lactobacillus iners）、卷曲乳酸杆菌（Lactobacillus crispatus）、解脲支原体（Ureaplasmaurealyticum）。
【学位授予单位】：西北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R711.31;R446.5
本文编号：2605995
【图文】：
1.2 QuantStudioTM 12K Flex Real-Time PCR System 检测技术的概述1.2.1 QuantStudioTM12K Flex Real-Time PCR System 检测技术QuantStudioTM12K Flex Real-Time PCR System 检测系统是由 Thermo FScientific 负责研发的，然后国家微检测中心进行仪器的订购，其大致操作流程图如 它采用了 Real-Time PCR 检测技术，可以满足临床阴道内病原微生物的检测，并且它用全新的工业设计和 OpenArrayTM微流体技术，可以达到极高的样本量和检测通量QuantStudio 12K Flex Real-Time PCR System 可以进行高通量荧光定量 PCR、数字 功能。此外，QuantStudio 12K Flex Real-Time PCR System 检测系统可以同时运行 OpenArray plate，一次可检测 96 个样本。该检测技术所应用到的探针和引物预先被包在 OpenArray plate 的每个小孔中，最大程度的降低了人为操作带来的失误和环境的染；每张芯片可发生 3072 个反应，，每次实验可允许 4 张芯片同时反应，总反应达 12个。
图 2.2 部分样本、阴性对照、阴道微生物扩增指控的扩增曲线Fig 2.2 Amplification curves of some samples, negative controls, and Vaginal MicrobiotaAmplification Control注：图中 A、B、C、D、E 分别是 Mix、Water，nuclease-free、无菌棉签拭子、TaqManR VaginalMicrobiota Amplification Control、样本 A7。2.4.4 BV 患者与正常人的病原菌检出分析BV 患者通过 OpenArray 检测，发现 BV 患者主要检出微生物从高到低依次是：阴道加德纳菌（Gardnerella vaginalis）、惰性乳酸杆菌（Lactobacillus iners）、阴道阿波托菌（Atopobium vaginae）、普雷沃双歧杆菌（Prevotella bivia）、解脲支原体（Ureaplasmaurealyticum）、人型支原体（Mycoplasma hominis）、BVAB2、巨型球菌Ⅰ（UnculturedMegasphera 1 ）；正常人群的主要检出微生物从高到低依次是：惰性乳酸杆菌（Lactobacillus iners）、卷曲乳酸杆菌（Lactobacillus crispatus）、解脲支原体（Ureaplasmaurealyticum）。
【学位授予单位】：西北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R711.31;R446.5
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 田泉;薛艳;李娜;安瑞芳;;4019例妇科门诊不同症状患者阴道微生态状况分析[J];中国微生态学杂志;2013年12期
本文编号：2605995
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