3-MA对放射性脑损伤小胶质细胞活化、自噬及神经元细胞凋亡的影响

发布时间：2020-05-18 12:14

【摘要】：目的制备辐射诱导大鼠脑损伤(RBI)模型,给予3-甲基腺嘌呤侧脑室注射,进行水迷宫实验,观察小胶质细胞自噬及小胶质细胞活性的变化,并且观察辐射后神经元凋亡变化。旨在探讨辐射性脑损伤小胶质细胞自噬对认知功能障碍的影响。方法取36只体质量为180-200g的Sprague Dawle大鼠,进行4天的Morris水迷宫训练。训练完成后随机分为Sham组、Model组及3-MA(3-Methyladenine,3-MA)组。其中,Model组及3-MA组经腹麻醉,固定大鼠,在20Gy的X线下性全脑照射,照射完成,Model组通过侧脑室注射NaCl 5μL,3-MA组侧脑室注射3-甲基腺嘌呤600nmol(0.9%NaCl稀释至终体积5μL)。继续饲养8周,Morris水迷宫进行学习、记忆能力测评。断头取脑,HE染色观察大鼠同侧海马组织病理变化。免疫组化法分别检测同侧海马区NeuN阳性神经元和Iba-1阳性小胶质细胞的形态和数量变化;免疫印迹法观察NeuN和Iba-1蛋白以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的变化情况。Iba-1及LC3双重荧光染色评定小胶质细胞自噬的改变。TUNEL染色法检测海马区细胞凋亡情况。ELISA检测TNF-α、IL-6水平评估海马区炎症反应。结果1 Morris水迷宫:与Sham组相比,Model组大鼠水迷宫定位航行实验及空间探索实验表现不佳,而3-MA组较Model组有所改善,差异有统计学意义(P0.05)。2 HE染色:与Sham组相比,Model组可见较明显的核固缩,锥体束结构紊乱。而3-MA组较Model组变化较轻。3 IHC染色:(1)NeuN:Model组正常神经元数量明显减少;3-MA组正常神经元较Model组增多,差异有统计学意义(P0.01)。(2)Iba-1:RBI后8周,Model组活化的小胶质细胞明显增多;3-MA组活化的小胶质细胞较Model组减少,差异有统计学意义(P0.05)。4 Iba-1/LC3 IF染色:Sham组有一些LC3阳性细胞,表明正常脑组织小胶质细胞自噬活性。RBI后8周,Model组LC3表达明显上调,3-MA组LC3表达较Model组下调。差异有统计学意义(P0.05)。5 Western blot:与Sham组相比,Model组Iba-1、Bax、Arg-1表达明显上调,与Model组相比,3-MA组Iba-1、Bax、Arg-1表达有所下降,差异有统计学意义(P0.05)。相比Sham组,Model组NeuN、Bcl-2表达明显下调,与Model组相比,3-MA组NeuN、Bcl-2表达有所上调,差异有统计学意义(P0.05)。与Model组相比3-MA组Arg-1表达明显上调。6TUNEL染色:与Sham组相比,Model组细胞凋亡明显上调,与Model组相比,3-MA组凋亡细胞明显减少,差异有统计学意义(P0.05)。7 ELISA检测:RBI后8周,各组大鼠炎症变化虽有趋势,但并无统计学差异。结论1 3-MA可明显改善辐射后大鼠的神经损伤和认知障碍。2 3-MA可减少Iba-1的表达,抑制小胶质细胞自噬水平及小胶质细胞活性。3 3-MA可促进小胶质细胞向M2型转化,促进神经损伤的修复。图11幅;表11个;参46篇。
【图文】：

HE染色,同侧,大鼠,次数

注：与 Sham 组比较 △P＜0.05，△△P＜0.01；与 Model 组比较*P＜0. 05，**P＜0. 01结果显示：各组大鼠数据分析，Model 组大鼠穿越平台次数最少，Sham 组次数最多，Model 组与 Sham 组及 3-MA 组之间均有统计学差异（P<0.05）。结果表明：RBI 后，，Model 大鼠穿越平台次数明显减少，表现出一定的空间记忆障碍。相较于 Model 组，3-MA 组大鼠穿越次数明显增多，空间记忆能力有一定程度的恢复。1.2.2 RBI 后大鼠海马区组织 HE 染色结果RBI 后对大鼠脑组织进行 HE 染色，显微镜观察海马区病理结构变化（图 2）Model 12 4.00 1.60△3-MA 12 5.25 1.06△△**

同侧,核固缩,锥体束,放射性损伤

第 1 章实验研究结果显示：与 Sham 组相比，Model 组可见较明显的核固缩，锥体束结构紊乱。相较于 Model 组，3-MA 组变化较轻。结果表明：放射性损伤后，大鼠的海马区受到较明显的破坏，神经细胞出现核固缩，3-MA 能缓解这一损伤。1.2.3 同侧海马区 TUNEL 染色通过对海马组织 TUNEL 检测观察海马区神经元凋亡情况（图 3 表 3）。
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R730.55

【参考文献】