X-连锁严重联合免疫缺陷病的植入前遗传学诊断

发布时间：2020-07-21 14:46

【摘要】：【目的】采用多重置换扩增建立一种可靠、准确的植入前遗传学诊断方法,应用于X-连锁严重联合免疫缺陷病(X-SCID)的植入前遗传学诊断(PGD)。【方法】选择5个位于致病基因IL-2受体γ链(IL2RG)基因两侧的短串联重复序列(STR)位点对X-SCID家系进行单体型分析,采用多重置换扩增(MDA)对单细胞进行全基因组扩增,对扩增产物采用在家系分析中具有多态性的STR位点进行单体型分析,结合位点Amel进行性别诊断,STR位点均采用单重荧光PCR,同时对IL2RG基因exon5进行测序分析。【结果】对家系分析中,共有3个STR位点具有多态性。对10个单淋巴细胞及10个单卵裂球进行了预实验:MDA扩增成功率为100%,对致病基因IL2RG exon5的行基因测序的检测效率为100%;对于3个有多态性的STR位点和AMEL,PCR扩增效率为96.3%(77/80),等位基因脱扣率(ADO)为11.5%(7/61)。对该家系进行了一个周期的PGD,对7个胚胎进行了诊断,其中2个为正常胚胎,移植后获得双胎妊娠,早产活产一个健康男婴及一个健康女婴。【结论】采用多重置换扩增结合致病基因特异性扩增测序检测及单体型分析在单细胞水平对X-连锁严重联合免疫缺陷病进行检测,两者相结合可避免污染、等位基因脱扣等导致的误诊,提高了PGD诊断效率。
【图文】：

MgCl2，0.2mmol/LdNTP，正反向引物各0.2μmol/L，3μL的1/100稀释的MDA产物或外周血DNA，1UinthesinglecelllevelofX-linkedseverecombinedimmunodeficiencydiseasewereperformed.TheprotocolcanavoidmisdiagnosiscausedbycontaminationandADO,andimprovethediagnosticefficiencyofPGD.Keywords:X-linkedseverecombinedimmunodeficiency;preimplantationgeneticdiagnosis(PGD);multipledisplacementamplification(MDA);shorttandemrepeat(STR);haplotypeanalysis［JSUNYatsenUniv（MedSci），2017，38（6）：956-960］图1X-SCID家系系谱图Fig.1PedigreeanalysisfortheX-SCIDfamilyI∶1I∶2II∶1II∶2II∶3II∶4III∶4III∶2III∶3III∶1956

引物序列Table1PrimersequencesusedforanalysisLocusDXS339DXS106DXS453DXS227DXS991AMELIL2RGexon5Forward（5’-3’）FAM-ATGAAATAGCCCAGTACTCCFAM-CCTGTACTCCTAGGTATTTGTFAM-GCCCCTACCTTGGCTAGTTAFAM-GTCAGAATAGAAGGCTCCACCFAM-TAGCTAAAAATGTATGAGTAFAM-CCCTGGGCTCTGTAAAGAATAGTGAGTAGCACAGATGACACTGGTGGBackward（5’-3’）TCTGCTATAACCACACCATCAGAGAGCCAAATCAAGAATGCAACCTCAGCTTATACCCAAGCCTACCTCCTCAGTGCCTCTTAATAGTGTTTTCCTAAGGGATCAGAGCTTAAACTGGGAAGCTGTAGAAAGGCTGGGGTGTTGG图2X-连锁严重联合免疫缺陷病家系单体型分析Fig.2HaplotypeanalysisfortheX-SCIDfamilyDXS10686DXS453173DXS991280102108177163280284DXS106102DXS453177DXS991280maternalaffectedhaplotypematernalnormalhaplotypepaternalnormalhaplotype吴海涛，等.X-连锁严重联合免疫缺陷病的植入前遗传学诊断957

。3讨论X-连锁严重联合免疫缺陷病的致病基因IL2RG定位于X染色体q13.1，含有8个外显子，全长4145个碱基对。目前国际上已经报道了264种IL2RG突变引起的SCID［13-14］。本例患儿的IL2RG突变位于第5个外显子处，736位碱基G突变为T，此种突变类型国内已有报道［15］。该病例女方被证实为携带者，男方为正常，女方的姐姐也是携带者。由于X-SCID是X-连锁隐性遗传性疾病，若女方为携带者，其生育的女性子代中一半为携带者一半为正常，生育的男性子代中一半为患者一半为正常。既往采用性别诊断行PGD，往往选择图3IL2RGexon5测序图Fig.3SequencingpictureofIL2RGexon5A：Farther（normal：G）B：Mother（carrier：GandT）C：proband（affected：T）ET：embryotransfer表2临床植入前遗传学诊断结果Table2ClinicalPGDresultsSiteDSX106DSX453DSX991AMEIIL2RGDiagnosiscarrierOutcomeE186102173177280280102G/TcarrierE2108163284102108GnormalETE3102177280102108TaffectedE486102173177280280102G/TcarrierE586102ADO177280280102108G/TcarrierE686108173ADOADO284102GnormalETE786102173177280280102108G/Tcarrier958

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