异基因造血干细胞移植后患者外周血差异表达miRNA与口腔cGVHD关系的研究

发布时间：2020-07-22 15:27

【摘要】：背景:口腔慢性移植物抗宿主病(Oral chronic graft versus host disease,cGVHD)是一种异基因造血干细胞移植(allogenetic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)后的常见并发症,是影响患者移植后长期生存质量的因素之一。但目前口腔cGVHD病因尚不明确。非编码微小RNA(micro RNA,mi RNA)可通过调节相关靶基因的表达,从而调控各种免疫细胞的产生、增殖、发育以及免疫应答。目前mi RNA已被发现可作为多种疾病发生发展及预后的生物学标志。目的:通过分析口腔cGVHD与无口腔cGVHD患者外周循环血mi RNA的表达差异,通过生物信息学分析与验证,初步分析mi RNA在口腔cGVHD发生发展中可能的调控作用。方法:1.回顾分析94例HLA全相合的异基因干细胞移植患者病史资料,探讨口腔cGVHD的临床特点及其发生与患者性别、预处理方案ATG使用情况等患者性别、女供男移植、移植物来源、回输单个核细胞数等临床指标的相关性。2.口腔cGVHD、无口腔cGVHD、健康对照各8例取外周静脉血,构建mi RNAs文库,采用Illumina Hiseq 2500平台进行测序,分析mi RNAs差异表达,通过Go term和KEGG等生物信息学技术分析探索与口腔cGVHD发生有关的信号通路。3.采用定量实时荧光定量PCR(quantitative real time PCR,q RT-PCR)检测15例口腔cGVHD、15例无口腔cGVHD、15例健康对照外周静脉血mi RNA-505-5p、mi RNA-769-5p表达情况,通过Go term和KEGG等生物信息学分析其靶基因及作用信号通路。4.采用q RT-PCR检测口腔cGVHD和无口腔cGVHD各15例外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中Smad2(Drosophila mothers against decapentaplegic protein 2)表达水平,采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组血浆中Smad2蛋白含量。结果:1.在94例HLA全相合的异基因干细胞移植患者中,46.8%出现口腔cGVHD。移植后300天内未发生口腔cGVHD的患者在其后发生口腔cGVHD的可能性较低。口腔cGVHD表征多样,除了特征性的网状白色条纹样病损,口干、溃疡/糜烂是最常见的口腔表征,出现比例分别为63.63%与50%。这些病损可单独伴随网状白色条纹样病出现或多种同时出现。口腔cGVHD组患者口腔表征评分为3.81±2.06,VAS评分为3.31±2.13,两者呈正相关。未发现患者性别、预处理方案ATG使用情况、女供男移植、移植物来源、回输单个核细胞数等临床指标与口腔cGVHD的发生存在相关性。2.口腔cGVHD与无口腔cGVHD组比较发现,在两组中均有表达mi RNA为549个,具有显著性差异为72个,包括上调表达32个,下调表达40个;口腔cGVHD组与健康对照组比较发现,在两组中均有表达mi RNA为547个,具有显著性差异为327个,包括上调表达164个,下调表达163;无口腔cGVHD组与健康对照组比较发现,在两组中均有表达mi RNA为546个,具有显著性差异为245个,包括上调表达160个,下调表达85个;三组比较发现三组中均有表达mi RNA为518个,显著差异191个。mi RNAs靶基因主要集中在生化过程中的转录环节、细胞组分中的膜蛋白及分子功能中的蛋白结合。差异基因主要集中在癌相关通路、调节磷脂酰肌醇3—激酶/蛋白激酶B(Phosphatidylinositol 3-Protein kinase B,PI3K-Akt)等信号通路。3.非口腔cGVHD患者外周血循环mi RNA-769-5p、mi RNA-505-5p表达最高,口腔cGVHD患者次之,健康对照最低。通过ROC分析mi RNA-769-5p、mi RNA-505-5p在口腔cGVHD诊断上具有一定价值,通过生物信息学方法分析得知口腔cGVHD发生可能与PI3K-Akt信号通路,TGF-β/Smad信号通路相关。4.口腔cGVHD组患者血浆中Smad2蛋白及PBMC中Smad2 m RNA表达较无口腔cGVHD组增高。外周血Smad2 m RNA表达与mi RNA-769-5p呈负相关。结论:1、口腔cGVHD是allo-HSCT后的常见并发症,常发生于移植后300天内。口腔cGVHD表征多样,除了特征性的网状白色条纹样病损,口干、溃疡/糜烂是最常见的口腔cGVHD表征。尚未发现患者性别、预处理方案ATG使用情况等患者性别、女供男移植、移植物来源、回输单个核细胞数等临床指标与口腔cGVHD的发生存在相关性。2、口腔cGVHD、非口腔cGVHD、健康对照之间外周血循环mi RNA存在差异性表达。mi RNA可能通过影响PI3K-Akt、TGF-β/Smad等信号通路参与口腔cGVHD的发生,mi RNA-769-5p、mi RNA-505-5p在口腔cGVHD诊断上具有一定价值。3、外周循环血内的高表达的Smad2可能与口腔cGVHD发生有关。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R457.7;R781.5
【图文】：

图 1-1 VAS 疼痛评分标准Fig 1-1 Scoring criteria of VASVAS：即视觉模拟评分法。在纸上画一条长约 10 cm 的横线，横线的一端为 0，表示无痛；另一端为 10，表示重度疼痛；中间部分表示不同程度的疼痛。唾液量记录：嘱患者静坐，头前倾略低，5 分钟内向 5ml 无菌离心管内缓缓吐入非刺激性全唾，记录患者唾液量。1.2.4 统计学处理采用 SPSS16.0 统计软件进行数据分析。采用卡方检验分析供受者情况（患者性别、预处理方案 ATG 使用情况等患者性别、女供男移植、移植物来源、回输单个核细胞数等）对口腔 cGVHD 的影响，患者年龄、回输单个核细胞数与口腔表征及疼痛评分计分采用 Spearman 等级相关法，多因素分

口腔表征为口干、溃疡糜烂，其它常见病损类型为红斑样病损及黏膜萎缩。各种口腔表征可单独存在或合并存在。典型口腔表征如图（1-3）：图1-3A 某口腔cGVHD患者口腔表征情况Figure 1-3A Oral manifestation of an oral cGVHD patient口腔 cGVHD 患者口腔内黏膜组织出现网状白色条纹样病损，可波及唇、舌、颊、上腭、牙龈，同时部分部位（双颊、后牙区前庭沟等）出现可合并出现黏膜溃疡糜烂。图1-3B口腔cGVHD常见口腔表征Figure 1-3B Oral manifestations among oral cGVHD patientsB-1 舌背粘膜同时出现网状白色条纹样病损、黏膜萎缩、溃疡、假膜。 B-2 右颊部黏膜出现网状白色条纹样病损、溃疡、假膜。B-3 牙龈出现红斑样病损。B-4 舌背粘膜出现黏膜萎缩。

腔表征可单独存在或合并存在。典型口腔表征如图（1-3）：图1-3A 某口腔cGVHD患者口腔表征情况Figure 1-3A Oral manifestation of an oral cGVHD patient腔 cGVHD 患者口腔内黏膜组织出现网状白色条纹样病损，可波及唇、舌、颊、龈，同时部分部位（双颊、后牙区前庭沟等）出现可合并出现黏膜溃疡糜烂。

【参考文献】

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8 杨浚l

本文编号：2766008