遗传性异常纤维蛋白原血症家系的致病基因鉴定及临床表型研究

发布时间：2020-08-06 19:27

【摘要】：背景与目的遗传性异常纤维蛋白原血症(Congenital dysfibrinogenemia,CD)是由编码纤维蛋白原基因发生突变而引起纤维蛋白原结构和功能异常的遗传性疾病。该病一般为常染色体显性遗传或共显性遗传,少数为常染色体隐性遗传。CD患者临床表现异质性显著,大部分患者无任何临床表现,部分患者表现为血栓或出血,极少数患者表现为出血与血栓并存,部分女性患者可表现为月经过多、反复流产及胎盘早剥等症状。典型的CD实验室检查可发现凝血酶时间(TT)延长,Clauss法纤维蛋白原显著降低,而PT-演算法或免疫法纤维蛋白原浓度在正常范围内。但也有极少数患者的实验室检查结果与上述不一致。曾有学者报道CD患者的TT可在正常范围,甚至低于正常范围。因此,需要对CD进行实验室检查与基因突变分析以明确突变位点,为产前诊断与优生优育提供信息来源,通过临床表型分析判断其预后并对治疗进行指导。方法(1)收集四例CD先证者及家系成员的血液标本、病例资料并做好家系调查,绘制系谱图。(2)提取外周血白细胞DNA,设计并合成特异性引物,采用PCR扩增编码纤维蛋白原基因的所有外显子及其侧翼序列,通过测序仪检测扩增目的片段的核苷酸序列,与NCBI基因数据库内标准序列进行比对,查找先证者的基因突变类型,再对家系其他成员进行相关基因突变位点的筛查。(3)提取及纯化先证者及其家系成员的血浆纤维蛋白原,通过Western blot分析纤维蛋白原肽链的相对分子量及相对表达量,以明确纤维蛋白原缺陷类型;通过基质辅助激光解析飞行时间质谱仪分析,确定血浆中是否存在突变肽段。(4)对四例先证者及正常对照血浆纤维蛋白原的聚集进行动态监测,以了解CD患者的纤维蛋白原聚集功能。(5)通过扫描电子显微镜观察纤维蛋白凝块中的网络结构及纤维直径。(6)运用血栓弹力图仪监测先证者的凝血功能,并预测先证者发生出血或血栓的风险。(7)对比分析四例先证者及其家系成员与近10年有相同突变位点的其他先证者的临床表现。结果(1)经基因突变分析,先证者Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ的FGG基因第8号外显子发生C.902GA错义突变,导致P.Arg275His(缺乏信号肽)杂合突变;先证者ⅡFGA基因第2号外显子发生C.104GA错义突变,导致P.Arg16His(缺乏信号肽)杂合突变。(2)Western blot分析这四例先证者相对应的纤维蛋白原Aα或γ链,未发现其迁移率及相对表达量发生改变;通过质谱分析发现这四例先证者纤维蛋白原均含有正常肽段与突变肽段,符合杂合突变。(3)四例先证者的纤维蛋白原聚集均发生明显改变,在聚集曲线上的停滞期延长,其最大的OD值均低于正常对照。(4)扫描电子显微镜下观察四例先证者的纤维蛋白凝块结构,先证者Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ的纤维网络结构疏松,孔径增大,纤维排列不规则且粗细不均,纤维丝末端卷曲成团,先证者Ⅱ的纤维网络结构比较致密,网络孔径较小,纤维粗细较一致,纤维节点较正常对照多。(5)血栓弹力图显示先证者Ⅰ和Ⅲ的Angle值减小,其相应的k值增大,MA值降低;先证者Ⅱ和Ⅳ的血栓弹力图结果在正常范围内。(6)四例先症者及发生相同位点突变的家系成员均无任何临床表现。结论(1)基因分析明确先证者Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ发生Arg275His突变,先症者Ⅱ发生Arg16His突变,均为纤维蛋白原的突变热点,与其他报道一致。(2)血栓弹力图显示先证者Ⅰ和Ⅲ的Angle值减小,其相应的k值增大,MA值降低,表示其纤维蛋白原功能低下,但残存的正常纤维蛋白原仍具备止血功能;先证者Ⅱ和Ⅳ的血栓弹力图结果在正常范围内。这四例先证者均无出血或血栓风险。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R596;R440
【图文】：

系谱图,家系,男性

图1.家系Ⅰ的系谱图Figure 1. pedigree of familyⅠ男性，正常女性，男性杂合子，女性杂合表 1. 家系Ⅰ先证者及其他成员的凝血检时间(s) 纤维蛋白原(g/l) 凝APTT PTClauss法PT-演算法Ⅷ Ⅸ

系谱图,家系,男性,凝血时间

图 2.家系Ⅱ的系谱图Figure 2. pedigree of familyⅡ常男性，正常女性，男性杂合子，女性杂表 2. 家系Ⅱ先证者及其他成员的凝血时间(s) 纤维蛋白原(g/l) 凝APTT PTClauss法PT-演算法Ⅷ Ⅸ

系谱图,家系,杂合子,男性

家系Ⅲ的系谱图

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