炎症预激活骨髓间充质干细胞旁分泌对急性辐射小肠损伤炎症反应的作用与机制研究

发布时间：2020-10-20 08:22

　　 急性辐射小肠损伤(radiation-induced intestinal injury,RⅢ)常见于腹腔、盆腔恶性肿瘤放射治疗患者,高达90%-95%的患者可发生不同程度的急性辐射小肠损伤,临床上可出现频繁呕吐、腹泻及便血等症状,重症患者可出现脓毒血症、贫血、消瘦等表现,严重影响患者生存质量及放射治疗的进一步应用。目前急性辐射小肠损伤的发病机制未完全明确,临床上尚缺乏有效的治疗手段。因此,需深入探讨急性辐射小肠损伤的发病机制以寻找更有效的治疗方法。目前研究认为急性辐射小肠损伤的病理生理机制是肠道炎症级联反应的激活。近年研究显示骨髓间充质干细胞具有强大的免疫调节和抗炎能力,而前期实验发现,炎症预激活骨髓间充质干细胞条件培养基可促进急性辐射小肠损伤结构和功能的修复,但其对急性辐射小肠损伤炎症反应的作用与机制目前尚未明确。本实验将观察炎症预激活骨髓间充质干细胞条件培养基对急性辐射小肠损伤炎症反应的影响,并初步探讨其作用机制。方法第一章炎症预激活骨髓间充质干细胞旁分泌对急性辐射小肠损伤炎症反应的作用研究1.骨髓间充质干细胞的分离、培养和鉴定。2.间充质干细胞条件培养基的制备:分别制备辐射炎症预激活骨髓间充质干细胞条件培养基(MSC-CMIEC-6(IR)及正常状态间充质干细胞条件培养基(MSC-CMIEC-6(NOR))。3.随机将SD大鼠分为正常对照组(n=10)、单纯辐射损伤组(IR+DMEM-F12组)(n=20)、辐射损伤+正常状态间充质干细胞条件培养基治疗组(IR+MSC-CMIEC-6(NOR)组(n=20)、辐射损伤+辐射炎症预激活骨髓间充质干细胞条件培养基治疗组(IR+MSC-CMIEC-6(IR)组(n=20),使用尾静脉联合腹腔给药。于辐射后第3天取材评价各组小肠组织病理学变化;同时分别取小肠组织及血清检测各炎症因子水平(n=10/group)。Kaplan-Meier方法对辐射后各组大鼠进行生存分析(n=10/group)。第二章炎症预激活骨髓间充质干细胞条件培养基调节急性辐射小肠损伤炎症反应的作用机制研究1.检测MSC-CMIEC-6(IR)和MSC-CMIEC-6(NOR)上清液中肿瘤坏死因子激活基因6蛋白、白细胞介素10、转化生长因子β1和吲噪胺2,3-双加氧酶的水平。2.辐射后第3天取各组小肠肠系膜淋巴结组织用流式细胞仪检测CD4+Foxp3+Treg细胞数量百分比(n=10/group)。结果1.辐射炎症预激活骨髓间充质干细胞条件培养基可显著改善大鼠急性辐射小肠损伤后小肠上皮绒毛及隐窝结构,大鼠的生存时间显著延长(P0.05)。2.辐射炎症预激活骨髓间充质干细胞条件培养基能显著降低大鼠急'性辐射小肠损伤后小肠组织中前炎症因子白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平,同时显著升高抗炎因子白细胞介素10 水平(P0.05);同样,可显著降低急性辐射小肠大鼠损伤血清中前炎因子Activin A、白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平,同时显著升高抗炎因子白细胞介素10 水平(P0.05)。3.与正常状态骨髓间充质干细胞条件培养基相比,辐射炎症预激活骨髓间充质干细胞条件培养基中的肿瘤坏死因子激活基因6蛋白、白细胞介素10、转化生长因子β1和吲哚胺2,3-双加氧酶的水平明显升高(P0.05)。4.辐射炎症预激活骨髓间充质干细胞条件培养基能显著增加辐射后第3天大鼠小肠肠系膜淋巴结中CD4+Foxp3+Treg细胞数量百分比(P0.05)。结论1.辐射炎症预激活骨髓间充质干细胞条件培养基能显著抑制大鼠急性辐射小肠损伤后在全身水平及小肠黏膜的炎症反应,参与炎症反应的免疫调节,促进小肠黏膜损伤的修复,延长大鼠的生存时间。2.辐射炎症预激活骨髓间充质干细胞条件培养基调节大鼠急性辐射小肠损伤炎症反应的作用机制可能包括:(1)辐射炎症预激活骨髓间充质干细胞通过分泌抗炎因子直接参与炎症反应过程,调节前炎因子/抗炎因子的平衡;(2)辐射炎症预激活骨髓间充质干细胞可分泌免疫调节因子促进小肠肠系膜淋巴结中T淋巴细胞向CD4+Foxp3+Treg细胞的转化,上调CD4+Foxp3+Treg细胞的比例,抑制急性辐射小肠损伤的炎症反应。
【学位单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R730.55
【部分图文】：

辐射后第５－７天之后为恢复期，隐窝的大小及绒毛的长度逐渐恢复，??７天后可维持稳态状态（图１）。Ｌｉｎａｒｄ等＂研宄也发现大鼠照射后的２４？７２ｈ其体内的白细胞??介素１Ｐ、白细胞介素６及白细胞介素８水平达到峰值，提示肠道炎症反应的高峰期为辐射后的??第１？３天。??０?Ｐｏｓｔ－Ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ??Ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ?１?２?３?４?７?ｄ??ｉｉｉｉｉｉ??图１麵射后小肠上皮组ＩＲ親学改变（ＨＥ染色）＊??＊Ｃｈａｎｇ－Ｋｙｕｎｇ?Ｋｉｍ?＆?Ｖｉｎｃｅｎｔ?Ｗ．?Ｙａｎｇ?＆?Ａｇｎｉｅｓｚｋａ?Ｂ．?Ｂｉａｌｋｏｗｓｋａ．?Ｔｈｅ?Ｒｏｌｅ?ｏｆ?Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ?Ｓｔｅｍ?Ｃｅｌｌｓ?ｉｎ?Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ??Ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ?Ｒａｄｉａｔｉｏｎ－Ｉｎｄｕｃｅｄ?Ｇｕｔ?Ｉｎｊｕｒｙ．?Ｃｕｒｒ?Ｓｔｅｍ?Ｃｅｌｌ?Ｒｅｐ?（２０１７）?３：３２０－３３２．??１．２急性福射小肠损伤的治疗研究??目前临床上对急性福射小肠损伤仍缺乏有效的治疗手段。临床上对急性辐射小肠损伤的??治疗措施主要以对症治疗及夕卜利手术治疗为主，同时辅以营养支持治疗，部分病人的症状可??得到缓解，但这些措施并不能有效治疗辐射引起的肠道黏膜损伤，仍有相当部分病人出现严??重并发症。近年来诸多研究应用细胞因子如干细胞因子（ｓｔｅｍ?ｃｅｌｌ?ｆａｃｔｏｒ，?ＳＣＦ）、细胞基质??衍生因子－１?（?ｓｔｒｏｍａｌ?ｃｅｌｌ?ｄｅｒｉｖｅｄ?ｆａｃｔｏｒ，ＳＤＦ－丨）、粒细胞集落刺激因子??（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ－ｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ?ｆａｃｔｏｒ

??？?ＭＳＣ－ＣＭｉｅｃ＇６（Ｎ０Ｒ）??料?＊＊?？?ＭＳＣ－ＣＭｉｅｃ＾＇Ｒ）??３００－１?｜?｜?４００－１?｜?Ｉ??ｉ２０?ｉ：??＂Ｌｉ?ｌＬ１??？?＊?拿？??６００－ｊ?ｌ?ｌ?１５０－ｉ?｜?｜??ｔ?４００Ｊ?■?３?ｉ〇〇－?Ｉ??〖ｊｉｌ?ｆ：Ｌｉ??图６?叫与ＭＳＣ－ＣＭＩＫ（聲０Ｒ）多种旁分泌因子含量的比较??注：与正常状态间充质干细胞条件培养基治疗组相比，福射炎症预激活骨髓间充质十侧泡条件培养基??中的肿瘤坏死因子激活基因６蛋白、白细胞介素１０、转化生长因子Ｐ１和的吲噪胺２，?３－双加氧酶水平??显著升高。＊＊：尸＜０．０５〇??Ｆｉｇｕｒｅ?６?Ｔｈｅ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆ?ｖａｒｉｏｕｓ?ｐａｒａｃｒｉｎｅ?ｆａｃｔｏｒｓ?ｉｎ?ｔｈｅ?ＭＳＣ－ＣＭ，ＥＣ＇６（Ｎ（＾Ｒ，?ｇｒｏｕｐ?ａｎｄ?ＭＳＣ－ＣＭｉｈｃ?＿６（ＮＣ）Ｒ）?ｇｒｏｕｐ．??Ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｗｉｔｈ?ｔｈｅ?ＭＳＣ－ＣＭ，Ｋ＂６（ＮＯＲ）?ｇｒｏｕｐ，?ｔｈｅ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ｔｕｍｏｒ?ｎｅｃｒｏｓｉｓ?ｆａｃｔｏｒ?ａｃｔｉｖａｔｏｒ?ｇｅｎｅ?６??ｐｒｏｔｅｉｎ，?Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ?１０，?ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ?ｇｒｏｗｔｈ?ｆａｃｔｏｒ?Ｐ?１?ａｎｄ?ｉｎｄｏｌｅａｍｉｎｅ?２，?３－ｄｉｏｘｙｇｐｎａｓｅ?（ＩＤＯ）?ｉｎ??ｗｅｒｅ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ?ｉｎｃｒｅａｓｅｄ?ｉｎ?ｔｈｅ?ＭＳＣ－ＣＭ
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本文编号：2848446