熔解曲线技术在结核分枝杆菌耐药检测中的临床应用研究

发布时间：2020-11-01 15:34

　　 目的:评估高分辨熔解曲线(HRM)技术用于结核分枝杆菌对四类抗结核药物(异烟肼、利福平、氟喹诺酮类、二线注射类)耐药性检测的灵敏度和特异度;以Xpert-MTB/RIF为对照,比较Xpert-MTB/RIF和HRM技术用于结核分枝杆菌对利福平耐药性检测的诊断效能。方法:收集抗酸染色阳性的肺结核患者痰液标本300例,对标本进行抗酸染色涂片、分枝杆菌培养、Xpert-MTB/RIF检测、传统药物敏感试验,用磁珠法提取结核分枝杆菌DNA,并进行熔解曲线法四类抗结核药物的耐药性检测;以传统药敏试验结果为金标准,评估熔解曲线技术(HRM)用于结核分枝杆菌对四类抗结核药物耐药性检测的灵敏度和特异度;以Xpert-MTB/RIF为对照,比较Xpert-MTB/RIF和HRM技术用于结核分枝杆菌对利福平耐药性检测的诊断效能。结果:以传统药敏试验(比例法)为金标准,HRM利福平试剂盒耐药检测的灵敏度为100(4),特异度为79.6(4);异烟肼试剂盒耐药检测的灵敏度为60.7(4),特异度为85.8(4)。氟喹诺酮类试剂盒耐药检测的灵敏度为75.0(4),特异度为94.9(4);二线注射类试剂盒耐药检测的特异度99.0(4);熔解曲线四种检测试剂盒的特异度均可,但灵敏度差异较大。利福平熔解曲线耐药检测与Xpert MTB/RIF检测比较,两种方法的一致性85.0(4),熔解曲线利福平耐药性检测的灵敏度高于Xpert MTB/RIF,而特异度偏低。结论:在本研究条件下,HRM技术在结核分枝杆菌对异烟肼、利福平、氟喹诺酮类、二线注射类抗结核药物的耐药性检测中灵敏度相对较高、特异度强。HRM与Xpert MTB/RIF技术用于利福平耐药检测的一致性较高,但是以传统药敏为金标准,HRM灵敏度高而特异性偏低。
【学位单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R446.5
【部分图文】：

图 1 编号 09226 标本结核分枝杆菌复合群核酸检测阳性结果注：红色表示阳性对照，绿色表示阴性对照，蓝色表示待测样本图 2 编号 09250 标本结核分枝杆菌复合群核酸检测阴性结果注：红色表示阳性对照，绿色表示阴性对照，蓝色表示待测样本

图 2 编号 09250 标本结核分枝杆菌复合群核酸检测阴性结果注：红色表示阳性对照，绿色表示阴性对照，蓝色表示待测样本图 3 编号 09229 标本结核分枝杆菌复合群核酸检测样本抑制结果注：红色表示阳性对照，绿色表示阴性对照，蓝色表示待测样本图 1-3，FAM 通道为 MTB 基因的检测通道，该通道上编号 09226、09250、09229标本的阳性对照扩增信号均正常，表明扩增体系没有问题；编号 09226 标本有扩增信号，且 Ct 值小于 25，表明该标本有结核分支杆菌复合群存在；编号 09250 标本 Ct

23图 3 编号 09229 标本结核分枝杆菌复合群核酸检测样本抑制结果注：红色表示阳性对照，绿色表示阴性对照，蓝色表示待测样本图 1-3，FAM 通道为 MTB 基因的检测通道，该通道上编号 09226、09250、09229标本的阳性对照扩增信号均正常，表明扩增体系没有问题；编号 09226 标本有扩增信号，且 Ct 值小于 25，表明该标本有结核分支杆菌复合群存在；编号 09250 标本 Ct值大于 25，表明该标本没有 MTB 存在。HEX 通道代表内控基因的检测结果，从 1-3图中看到，编号 09226、09229 Ct 值均小于 26，而编号 09229 在 FAM 和 HEX 通道均无扩增，而阳性对照却正常扩增，表明该待测样本在扩增过程中发生了抑制。
【参考文献】

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本文编号：2865737