UCP2过表达对脓毒症心肌损伤线粒体动力学影响及心肌线粒体功能的保护

发布时间：2020-11-21 04:18

　　 目的:本实验通过构建大鼠脓毒症心肌损伤模型,探究心肌线粒体UCP2过表达对脓毒症心肌线粒体动力学(Drp1、Opal、Fis1蛋白表达水平)及线粒体功能的影响,从在体心肌线粒体水平探讨UCP2过表达对脓毒症心肌损伤潜在的保护机制。方法:40只SD雄性大鼠,按随机分为4组:Control组(假CLP组)、Sham组(假转染手术组)、AAV组(单纯腺相关病毒转染组)、UCP2组(UCP2过表达组)。通过盲肠结扎穿孔建立脓毒症心肌损伤大鼠模型,用超声心动图检测大鼠心脏功能、Elisa检测大鼠心肌损伤相关指标以鉴定脓毒症心肌损伤模型。用UCP2腺相关病毒感染SD大鼠心肌,Western blot检测心脏组织中UCP2的表达变化,荧光显微镜观察UCP2组转染情况。电镜观察心肌线粒体超微结构,DHE检测ROS的产生,ATP试剂盒检测ATP的产生。Western blot检测心肌组织中Drp1、Opa1、Fis1相关蛋白表达。结果:1.建立CLP模型后,LVAWd、LVAWs、LVPWd、LVPWs、LVEF、LVFS明显升高(P0.05)。LVIDd、LVIDs、LVESV、LVEDV明显降低(P0.05)。血清IL-6、TNF-α、CK、CTn-I、LDH水平明显上升(P0.05),且大鼠出现明显脓毒症症状,脓毒症心肌损伤模型建立成功。2.UCP2组UCP2蛋白水平明显高于其余三组(P0.05),且能观察到绿色荧光,UCP2过表达模型建立成功。3.UCP2组较Sham组和AAV组LVAWs、LVEF、LVFS显著降低(P0.05),LVIDs、LVESV上升(P0.05),血清IL-6、TNF-α、CK、CTn-I、LDH水平明显降低(P0.05),且线粒体超微结构明显改善,ROS产生显著减少(P0.05),ATP生成增加(P0.05)。4.Control组、Sham组、AAV组及UCP2组心肌组织样本中Opa1、Fis1蛋白表达水平无明显差异(P0.05)。建立CLP模型后,Sham组和AAV组Drp1蛋白表达水平较Control组显著上升(P0.05),但当UCP2过表达后,心肌组织中Drp1表达水平均较Sham组、AAV组降低(P0.05)。结论:1.UCP2过表达能在一定程度上改善脓毒症心肌收缩功能异常;2.UCP2过表达能改善脓毒症心肌损伤线粒体功能障碍。3.UCP2过表达使ROS生成减少,降低Drp1蛋白的表达,通过抑制线粒体分裂,进而调控线粒体动力学,改善线粒体功能,发挥心肌保护的作用。
【学位单位】：遵义医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R459.7
【部分图文】：

19图 2 CLP 建模后大鼠症状 A.CLP 模型建立后大鼠出现脓尿；B.CLP 模型建立后大鼠出现稀便；C.CLP 模型建立后大鼠眼鼻分泌物增多 2.2 大鼠 CLP 建模后腹腔情况解剖见 Control 组大鼠腹腔无异常 与 Control 组相比，Sham AAV 和 UCP2 组解剖见结扎部分盲肠呈紫黑色，肿胀，脆性增加，周围肠腔有脓性渗出，恶臭，肠管

立脓毒症模型后各组大鼠腹腔情况 与 Control 组比 Sham 组 AAV 组 UCP2 组大显变化 鼠心肌转染 UCP2 腺相关病毒射 UCP2 腺相关病毒 3 周后，冰冻切片，可在 UCP2 组观察到绿色荧光Western blot 检测四组大鼠心肌 UCP2 蛋白表达，Sham 组 AAV 组 UCP高于 Control 组τP<0.05υ，且 UCP2 组蛋白的表达量高于其余三组τP<0UCP2 过表达模型成功建立 结果见图 4B C BC

图 3 建立脓毒症模型后各组大鼠腹腔情况 与 Control 组比 Sham 组 AAV 组 UCP2 组大鼠腹腔出现明显变化 2.3 大鼠心肌转染 UCP2 腺相关病毒注射 UCP2 腺相关病毒 3 周后，冰冻切片，可在 UCP2 组观察到绿色荧光，见图4A Western blot 检测四组大鼠心肌 UCP2 蛋白表达，Sham 组 AAV 组 UCP2 蛋白表达量高于 Control 组τP<0.05υ，且 UCP2 组蛋白的表达量高于其余三组τP<0.05υ 说明 UCP2 过表达模型成功建立 结果见图 4B C BA
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本文编号：2892511