酶促化学偶联构建胆固醇-g-聚胺酯载体介导p53基因递送的研究
发布时间：2020-12-09 20:47
在世界范围内,各国的肿瘤发病率和死亡率都呈现逐年上升的趋势,使之成为威胁人类健康和亟待解决的恶性疾病。近年来,在肿瘤疾病的研究中,利用基因载体来递送特殊基因并促进所需治疗性蛋白质表达的方法,成为人们关注的焦点,有望为未来肿瘤治疗提供新的安全有效的技术手段。基于上述考虑,在本论文中首先将N-甲基二乙醇胺,癸二酸二乙酯和ω-十五内酯通过脂肪酶催化聚合成阳离子聚胺酯,然后利用季铵化反应将疏水性N-（2-溴乙基）氨基甲酰基胆固醇接枝到其主链上,制备出新型两亲共聚物Chol-g-PMSC-PPDL。该载体材料能够与DNA进行良好的组装,形成稳定的纳米复合物,同时由于疏水性片段的引入,该载体表现出利于细胞摄取的特性并且有效地促进p53质粒的转染。我们以宫颈癌HeLa细胞（p53野生型）、人前列腺癌PC-3细胞（p53缺失型）为细胞模型,系统评价该载体介导p53基因递送、诱导肿瘤细胞增殖、迁移及浸润的效果与分子机制。递送48小时后,由于p53蛋白的大量表达,两种细胞系均产生明显的增殖抑制现象。同时,该纳米载体复合物（Chol-g-PMSC-PPDL/p53）能够通过外源基因的表达,增强HeLa细胞和...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
miRNA的作用机制siRNA：是一组长度为20-25个核苷酸的双链RNA，与mRNA作用机制类似，通过体外合成的siRNA进入细胞后与靶mRNA互补配对，使靶基因降解
图 1.2 siRNA 的作用机制1.2.2.3 核酶核酶是一种生物催化剂，是具有催化功能的 RNA 分子，它能够通过识别特定的序列来降解 mRNA。它们通过碱基互补配对原则特异性识别 mRNA，催化靶位点 mRNA 链中的磷酸二酯键断裂，选择性地剪切 mRNA 分子，从而阻断靶基因的表达。近几年，人们又合成了一些具有催化活性的 DNA，称作脱氧核酶。与原有的 RNA 核酶相比，这种双链的脱氧核酶更稳定，不易被 RNA 酶降解，同时它也更容易合成和修饰，产生的多种类似物能够更好的应用到基因治疗中[3]。1.2.3 p53 基因
图 1.3 p53 凋亡信号通路P53 蛋白为 p53 基因编码的产物，它的 N 端为酸性区，还有 1-80 位氨基酸残基，C 端为碱性区，含有 319-393 位氨基酸残基，正常的 p53 蛋白在细胞中易水解，半衰期为 20 分钟，突变的 p53 蛋白半衰期为 1.4-7 小时不等。研究显示，p53 蛋白能够改变线粒体途径中的 DNA 修复蛋白和促凋亡蛋白从而影响细胞的生长和凋亡等过程[8]，同时它还控制着细胞周期的启动。在健康的细胞中，若细胞受损又无法修复，则会向 p53 蛋白发送信号，p53 蛋白启动凋亡过程，使细胞通过凋亡途径死去；若 p53 蛋白缺失或有缺陷，丧失了原有的功能，则无法控制细胞，使其继续分裂，导致肿瘤的发生。2007 年，美国生物技术公司 Introgen 研发的 p53 基因药 Advexin 问世。Advexin 是以非整合性和非复制性腺病毒为载体递送 p53 基因，该药物主要针对难治性头颈部肿瘤的治疗。头颈部实体肿瘤多为 p53 表达缺陷型肿瘤，通过腺病毒的递送使癌症细胞内 p53 蛋白表达恢复到正常水平，抑制肿瘤生长达到治疗目
【参考文献】：
博士论文
[1]中国慢性病前瞻性研究队列恶性肿瘤发病与死亡分析[D]. 潘睿.南京医科大学 2017
[2]新型PEI衍生物材料的合成及在肿瘤基因递送中的应用研究[D]. 王艳波.吉林大学 2014
本文编号：2907450
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
miRNA的作用机制siRNA：是一组长度为20-25个核苷酸的双链RNA，与mRNA作用机制类似，通过体外合成的siRNA进入细胞后与靶mRNA互补配对，使靶基因降解
图 1.2 siRNA 的作用机制1.2.2.3 核酶核酶是一种生物催化剂，是具有催化功能的 RNA 分子，它能够通过识别特定的序列来降解 mRNA。它们通过碱基互补配对原则特异性识别 mRNA，催化靶位点 mRNA 链中的磷酸二酯键断裂，选择性地剪切 mRNA 分子，从而阻断靶基因的表达。近几年，人们又合成了一些具有催化活性的 DNA，称作脱氧核酶。与原有的 RNA 核酶相比，这种双链的脱氧核酶更稳定，不易被 RNA 酶降解，同时它也更容易合成和修饰，产生的多种类似物能够更好的应用到基因治疗中[3]。1.2.3 p53 基因
图 1.3 p53 凋亡信号通路P53 蛋白为 p53 基因编码的产物，它的 N 端为酸性区，还有 1-80 位氨基酸残基，C 端为碱性区，含有 319-393 位氨基酸残基，正常的 p53 蛋白在细胞中易水解，半衰期为 20 分钟，突变的 p53 蛋白半衰期为 1.4-7 小时不等。研究显示，p53 蛋白能够改变线粒体途径中的 DNA 修复蛋白和促凋亡蛋白从而影响细胞的生长和凋亡等过程[8]，同时它还控制着细胞周期的启动。在健康的细胞中，若细胞受损又无法修复，则会向 p53 蛋白发送信号，p53 蛋白启动凋亡过程，使细胞通过凋亡途径死去；若 p53 蛋白缺失或有缺陷，丧失了原有的功能，则无法控制细胞，使其继续分裂，导致肿瘤的发生。2007 年，美国生物技术公司 Introgen 研发的 p53 基因药 Advexin 问世。Advexin 是以非整合性和非复制性腺病毒为载体递送 p53 基因，该药物主要针对难治性头颈部肿瘤的治疗。头颈部实体肿瘤多为 p53 表达缺陷型肿瘤，通过腺病毒的递送使癌症细胞内 p53 蛋白表达恢复到正常水平，抑制肿瘤生长达到治疗目
【参考文献】：
博士论文
[1]中国慢性病前瞻性研究队列恶性肿瘤发病与死亡分析[D]. 潘睿.南京医科大学 2017
[2]新型PEI衍生物材料的合成及在肿瘤基因递送中的应用研究[D]. 王艳波.吉林大学 2014
本文编号：2907450
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