腹膜透析相关性腹膜炎病原菌的精准诊断

发布时间：2020-12-12 03:05

　　目的:1.了解腹膜透析相关性腹膜炎（Peritoneal dialysis-associated peritonitis,PDAP）的病原菌分布。2.应用微滴式数字PCR（Droplet Digital PCR,ddPCR）检测腹膜透析相关性腹膜炎的致病菌,旨在探讨微滴式数字PCR在检测PDAP中的临床应用价值方法:本实验研究方法分为两个部分。第一部分:回顾性分析2009年1月至2016年9月我院腹透中心发生的318例次腹膜透析相关性腹膜炎,对病原学种类进行分析。第二部分:1.根据回顾性分析我院腹透中心近8年发生的318例次腹膜透析相关性腹膜炎的病原菌分布情况,找出最常见的4种病原菌,分别为表皮葡萄球菌,金黄色葡萄球菌,大肠杆菌,粪肠球菌。2.根据相关参考文献设计4种实验菌种的特异引物探针。提取标准菌株DNA后,通过PCR验证引物可以扩增目的片段。3.收集30例腹膜炎患者的腹透液标本,分为两份,一份行传统细菌培养,另一份置于-80°C冰箱保存,用于后续数字PCR检测。标准菌株DNA提取液为阳性对照,无菌双蒸水（ddH2O）为阴性对照。结果:第一部分:腹透液培养阳性185例次,培养阳性率... 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

【文章页数】：41 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

各细菌总平均构成比

c d图 2 PCR扩增产物琼脂糖电泳结果注：图a.b.c.d：分别为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、粪肠球菌的标准菌株PCR扩增产物条带及产物大小。3.3 标本数字 PCR 检验结果3.3.1 数字PCR的阳性+阴性对照实验结果用 4 种标准菌株（金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、粪肠球菌）的DNA做阳性对照，无菌ddH2O做阴性对照。如图 3 所示，四种细菌特异性引物探针均能通过数字pcr检验其所对应的病原菌。

C图 3 阳性+阴性对照的数字PCR的一维散点图注：图中红线代表阈值，阈值以上的蓝色区域代表阳性微滴，提示反应阳性，阈值以下的灰色区域代表阴性微滴，提示反应阴性。图a：G12 表示表皮葡萄球菌标准菌株DNA，H12 表示ddH2O；图b：G10 表示粪肠球菌标准菌株DNA，H10 表示ddH2O；图c：A12 表示金黄色葡萄球菌标准菌株DNA，B12 表示大肠杆菌标准菌株DNA，C12、D12 均表示ddH2O。3.3.2 细菌培养阳性标本的数字PCR实验结果细菌培养阳性标本 13 例均用四种探针引物做数字PCR检验，4 种细菌的特异性探针引物数字PCR检测结果均与传统细菌培养结果相同。详见图 4。

【参考文献】：
期刊论文
[1]微滴式数字PCR对肉制品中羊肉和猪肉定量分析[J]. 陈晨,张岩,李永波,李鹏,李永艳,张涛,张薇,周巍,张志胜.  现代食品科技. 2018(01)
[2]腹膜透析相关性腹膜炎患者感染病原菌特点分析[J]. 赵馥,杨金国,糜彩霞,陈逸菲,余福海.  中华医院感染学杂志. 2017(18)
[3]热带地区腹膜透析相关性腹膜炎致病菌及耐药性临床分析[J]. 林叶,陈文,庄乙君.  华南国防医学杂志. 2017(05)
[4]腹膜透析相关性腹膜炎病原菌及其危险因素[J]. 王静,吕晶,李文冬,辛小龙.  中国感染控制杂志. 2016(10)
[5]腹膜透析相关性腹膜炎的致病菌及其易感因素分析[J]. 赵丽娟,孙世仁,杨君,周美兰,许国双.  中华肾病研究电子杂志. 2016(03)
[6]多重实时PCR检测腹膜透析相关性腹膜炎致病菌的应用分析[J]. 燕雯雯,沈继录,李晓峰,吴永贵.  安徽医科大学学报. 2016(05)
[7]102例次腹膜透析相关性腹膜炎的致病菌谱和耐药性分析[J]. 陈越,侯伟伟,崔春黎,李江涛,张昆,余晨.  上海医学. 2016(03)
[8]腹膜透析性腹膜炎的病原菌分布与耐药分析[J]. 宋江勤,孙治华,韩利蓉,欧阳娟,刘兵.  中华临床实验室管理电子杂志. 2016(01)
[9]腹膜透析相关腹膜炎临床及病原分析[J]. 张云芳,汤嘉敏,国建,化宝军,林燕群,李红艳.  中华肾脏病杂志. 2015 (07)
[10]132例腹膜透析相关性腹膜炎病原菌及其耐药性分析[J]. 赵珉,戴宏,沈继录,张伯科,吴永贵,卢文,徐星铭.  中国感染与化疗杂志. 2015(03)

硕士论文
[1]87例腹膜透析相关性腹膜炎分析及病原菌研究[D]. 龚友才.昆明医科大学 2016
[2]多重实时PCR检测腹膜透析相关性腹膜炎致病菌的应用分析[D]. 燕雯雯.安徽医科大学 2016
[3]腹膜透析相关性腹膜炎致病菌PCR检测和传统培养对比分析[D]. 王婵媛.安徽医科大学 2015



本文编号：2911736