C/EBPβ通过DDIT4/TSC2/mTOR和Trib3/Parkin/α-syn信号通路参与METH诱导的神经毒性
发布时间：2020-12-13 01:20
研究背景:甲基苯丙胺Methamphetamine（METH）,是一种广泛滥用的非法精神药物。我们以前的研究表明,CCAAT增强子结合蛋白β（C/EBPβ）是一个重要的调节因子,参与了 METH诱导的神经元自噬和凋亡。然而,这一过程的具体分子机制仍不清楚。以往的研究表明,DDIT4、Trib3、α-syn参与了 METH诱导的神经毒性。于是我们猜测C/EBPββ参与了 METH诱导的DDIT4介导的自噬和Trib3介导的凋亡。方法:第一章第一节建立时间梯度和浓度梯度的METH中毒体外模型,通过Western Blot观察随着METH给药时间和浓度增加,TSC2、pTSC2等蛋白的表达量情况。第一章第二节构建DDIT4特异性小干扰RNA,下调DDIT4表达后,Western Blot检测pTSC2和mTOR自噬通路相关蛋白的表达。第一章第三节构建抑制C/EBPβ表达的特异性小干扰RNA,Western Blot检测经Si-C/EBPβ处理后,DDIT4、pTSC2及mTOR自噬通路相关蛋白的表达。第二章第一节构建抑制α-syn表达的小干扰,Western Blot检测经Si-α-syn处...
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１：?ＭＥＴＨ处理ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞，ｐ－ＴＳＣ２（ｓｅｒｌ３７８）／ＴＳＣ２的蛋白表达增加??（Ａ、Ｂ：蛋白表达情况，Ｃ、Ｄ：统计学分析．又士?ＳＤ，ｎ＝３／ｇｒｏｕｐ，、５．（：〇付１＊〇１〇６１１５广口＜０．０５）??
认为ＤＤＩＴ４抑制可以有效降低ＭＥＴＨ诱导的ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞中ｐ－ＴＳＣ２??增加。给予ＭＥＴＨ处理后，ｐ－ｍＴＯＲ／ｍＴＯＲ的表达量明显降低，而ＤＤＩＴ４敲低??后，能够升高ｐ－ｍＴＯＲ／ｍＴＯＲ的表达量（图２：?Ａ、Ｄ）。ＭＥＴＨ＋?ＳｉＤＤＩＴ４＃?１组和??ＳｉＤＤＩＴ４＃?２组的Ｐ－ｍＴＯＲ／?ｍＴＯＲ表达量与ＭＥＴＨ＋ｓｉＮＣ组比分别升高了??４１．３４％和４５．７％；同样，ＭＥＴＨ处理后，自噬相关蛋白Ｂｅｃｌｉｎ－１和ＬＣ３－Ｉ／ＩＩ的??表达升高，ＤＤＩＴ４敲低后，能够逆转自噬的升高趋势（图２：?Ａ、Ｅ）。Ｂｅｃｌｉｎ－１分??别减低了?３２．２３％和５１．７２％，而ＬＣ３分别降低了?３０．４２％和４９．９４％，说明抑制ＤＤＩＴ４??可以抑制ＭＥＴＨ诱导的ｐ－ＴＳＣ２／ｍＴＯＲ通路介导的自噬。??Ａ?Ｂ?Ｃ?ｈ?ｐ－ｒｎ????ｒ°；?ｉ丄ｆ?垂??ｐ－ＴＳＣ２（ｓｅｒ１３６７）?ｍ．ｇｗ—勵?＇ｉｉ?ｉｌｌｌ?＾－｜｜｜｜??ＭＥ＇ｍ?？?－?？?＋?？?＋?ＭＥＴＨ?．．．?＋?？?＋??＾〇＾２４４８＞?丨一祕?辦?｜?＾?ＣｔｒｌｓｉＲＮＡ?，?．?．?＋?．?．?Ｃｔｒｌ＾ＲＮＡ????ｓｉＤＤＩＴ４＃１?．?ｓｉＤＤＩＴ４＃１?．?＋?？■?＋?．??ｍＴ〇Ｒ?２８９Ｋ〇ａ?ｓｊＤＤ（Ｔ４＃２?？?？?？?－?．?？?ｓｉＤＤＩＴ４＃２??Ｂ？ｃｌｉｎ－１?綱１＾?ＷｋＤａ?〇?——ｉ??＿＊?Ｅ?．?■Ｂ＾ｌｉｎ－Ｉ?ｐ－
（＊ｐ＜０．０５，?ｎ＝３），认为Ｃ／ＥＢＰＰ抑制可以有效降低ＭＥＴＨ诱导的ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细??胞中?ＤＤＩＴ４?增加。另外?ｐ－ＴＳＣ２（ｓｅｒｌ３７８）／ＴＳＣ２、Ｂｅｃｌｉｎ－１?和?ＬＣ３－Ｉ／ＩＩ?的表达量??在给予ＭＥＴＨ处理后也增加，在敲低Ｃ／ＥＢＰｐ后表达量下降（图３：?Ａ、Ｃ、Ｅ）。??Ｐ－ＴＳＣ２分别减低了?４０．７４％，和２４．７３％，而ｐ－ｍＴＯＲ／ｍＴＯＲ的表达量给予ＭＥＴＨ??处理后下降，在敲低Ｃ／ＥＢＰｐ后表达量升高（图３：?Ａ、Ｄ）。ＭＥＴＨ＋Ｓｉ－Ｃ／ＥＢＰ（３＃１??组和Ｓｉ－Ｃ／ＥＢＰＰ＃?２组的ｐ－ｍＴＯＲ／?ｍＴＯＲ表达量与ＭＥＴＨ＋ｓｉＮＣ组比分别升高了??８１．７３％和?７０．０３％，而?Ｂｅｃｌｉｎ－１?分别减低了?２０．３２％和?２０．７２％，而?ＬＣ３?分别降低??了?４１．２４％和４８．８６％?，说明抑制Ｃ／ＥＢＰｐ可以抑制ＭＥＴＨ诱导的??ＤＤＩＴ４／ｐ－ＴＳＣ２／ｍＴＯＲ通路介导的自噬。所有这些结果表明Ｃ／ＥＢＰＰ通过ＤＤＩＴ４／??ＴＳＣ２／ｍＴＯＲ信号通路在甲基苯丙胺诱导的神经细胞自噬中发挥了重要作用。??Ａ?Ｂ?■ＯＥＢＰＰ?＾―，?，＿Ｃ???＊?＿????１Ｉ?Ａ?Ｉ?＾??Ｃ＿?奢嫌?鱗條?ｉ?３ＳｋＤａ?｜?２＇?Ｉｆ?＿＿?Ｗ?３Ｉ?＿??－?ｆ
【参考文献】：
期刊论文
[1]甲基苯丙胺对相关脑区的神经毒性作用[J]. 李学锋,邱平明,金贺,刘明,王慧君. 解剖学杂志. 2007(01)
[2]转录因子C/EBP β的生物学功能[J]. 成军. 世界华人消化杂志. 2004(02)
本文编号：2913619
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１：?ＭＥＴＨ处理ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞，ｐ－ＴＳＣ２（ｓｅｒｌ３７８）／ＴＳＣ２的蛋白表达增加??（Ａ、Ｂ：蛋白表达情况，Ｃ、Ｄ：统计学分析．又士?ＳＤ，ｎ＝３／ｇｒｏｕｐ，、５．（：〇付１＊〇１〇６１１５广口＜０．０５）??
认为ＤＤＩＴ４抑制可以有效降低ＭＥＴＨ诱导的ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞中ｐ－ＴＳＣ２??增加。给予ＭＥＴＨ处理后，ｐ－ｍＴＯＲ／ｍＴＯＲ的表达量明显降低，而ＤＤＩＴ４敲低??后，能够升高ｐ－ｍＴＯＲ／ｍＴＯＲ的表达量（图２：?Ａ、Ｄ）。ＭＥＴＨ＋?ＳｉＤＤＩＴ４＃?１组和??ＳｉＤＤＩＴ４＃?２组的Ｐ－ｍＴＯＲ／?ｍＴＯＲ表达量与ＭＥＴＨ＋ｓｉＮＣ组比分别升高了??４１．３４％和４５．７％；同样，ＭＥＴＨ处理后，自噬相关蛋白Ｂｅｃｌｉｎ－１和ＬＣ３－Ｉ／ＩＩ的??表达升高，ＤＤＩＴ４敲低后，能够逆转自噬的升高趋势（图２：?Ａ、Ｅ）。Ｂｅｃｌｉｎ－１分??别减低了?３２．２３％和５１．７２％，而ＬＣ３分别降低了?３０．４２％和４９．９４％，说明抑制ＤＤＩＴ４??可以抑制ＭＥＴＨ诱导的ｐ－ＴＳＣ２／ｍＴＯＲ通路介导的自噬。??Ａ?Ｂ?Ｃ?ｈ?ｐ－ｒｎ????ｒ°；?ｉ丄ｆ?垂??ｐ－ＴＳＣ２（ｓｅｒ１３６７）?ｍ．ｇｗ—勵?＇ｉｉ?ｉｌｌｌ?＾－｜｜｜｜??ＭＥ＇ｍ?？?－?？?＋?？?＋?ＭＥＴＨ?．．．?＋?？?＋??＾〇＾２４４８＞?丨一祕?辦?｜?＾?ＣｔｒｌｓｉＲＮＡ?，?．?．?＋?．?．?Ｃｔｒｌ＾ＲＮＡ????ｓｉＤＤＩＴ４＃１?．?ｓｉＤＤＩＴ４＃１?．?＋?？■?＋?．??ｍＴ〇Ｒ?２８９Ｋ〇ａ?ｓｊＤＤ（Ｔ４＃２?？?？?？?－?．?？?ｓｉＤＤＩＴ４＃２??Ｂ？ｃｌｉｎ－１?綱１＾?ＷｋＤａ?〇?——ｉ??＿＊?Ｅ?．?■Ｂ＾ｌｉｎ－Ｉ?ｐ－
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【参考文献】：
期刊论文
[1]甲基苯丙胺对相关脑区的神经毒性作用[J]. 李学锋,邱平明,金贺,刘明,王慧君. 解剖学杂志. 2007(01)
[2]转录因子C/EBP β的生物学功能[J]. 成军. 世界华人消化杂志. 2004(02)
本文编号：2913619
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