季铵化DoGo脂质分子的合成及其转染效率的研究
发布时间：2020-12-28 06:27
基因治疗所要解决的首要问题是如何将目的基因有效导入病变部位细胞,并使其安全、高效地表达。由于非病毒载体的毒性小,安全性高,较容易制备,能够携带更大的DNA等优点而具有非常广阔的应用前景。在众多类非病毒载体中,阳离子脂质体是一类应用非常广泛的非病毒载体。本论文以Boc-L-谷氨酸与油胺进行酰胺反应与脱保护反应生成的DoGo1为基本原料,在DoGo1的亲水头部进行酰胺反应、脱保护反应以及季铵化反应生成两种阳离子脂质分子DoGo31和Do Go211。本文通过质谱（MS）和氢谱（1HNMR）的表征方法确定化合物的分子量与结构。本文通过激光粒度与电动电势确定化合物的均匀性与带电情况以及确定化合物是否能够用于转染实验。通过琼脂糖凝胶电泳实验、细胞毒性实验以及细胞转染实验探究了化合物的生物活性,并与本实验室合成出的高递送效率的脂质分子进行实验对照,实验结果表明,本论文合成的化合物与不同的辅助脂质混合有不同的转染效果。综合而言,本文以本实验合成出的高效率的脂质分子DoGo4的结构为基础,在其伯胺的氨基上进行季铵化修饰,合成出两种季铵盐位置不同的化合物,用MS与1
【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校
【文章页数】：94 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
阳离子脂质复合物介导的DNA转染和内吞作用
图 3.3 DoGo4（DOPC）、DoGo4（DOPE）、DoGo121（DOPC）、DoGo121（DOPE）、DoGo31（DOPC）、DoGo31（DOPE）对 HeLa 细胞的毒性实验结果Fig 3.3 Experimental results of cytotoxicity of DoGo4（DOPC）,DoGo4（DOPE）,DoGo121（DOPC）,DoGo121（DOPE）,DoGo31（DOPC）,DoGo31（DOPE）on HeLa cells图 3.3 是三种化合物（DoGo4、DoGo121、DoGo31）与两种辅助脂质（DOPC、DOPE）混合而成的六种脂质复合物在 HeLa 细胞上的细胞毒性实验结果图。由图可知，三种脂质化合物与辅助脂质 DOPE 混合成的脂质复合物相比于与辅助脂质 DOPC 混合成的脂质复合物的细胞毒性稍大，与 DOPE 混合的每个脂质化合物所呈现的细胞毒性是相当的，与 DOPC 混合的每个脂质化合物所呈现的细胞毒性也是相当的。六种脂质复合物随着其浓度的增加，细胞毒性也有所增加，但是细胞的存活率都是大于 60%，说明这六种脂质复合物在上述的浓度范围内是
图 3.6 DoGo4(DOPC)、DoGo4(DOPE)、DoGo121(DOPC)、DoGo121 (DOPE)、DoGo31(DOPC)、DoGo31 (DOPE)与 siGAPDH 混合在 HepG2 细胞上的基因沉默结果图Fig 3.6 Results of gene silencing on HepG2 cells by DoGo4 (DOPC), DoGo4 (DOPE),DoGo121(DOPC), DoGo121 (DOPE), DoGo31 (DOPC), DoGo31 (DOPE) complexed with siGAPDH图 3.6 是三种化合物（DoGo4、DoGo121、DoGo31）与两种辅助脂质（DOPC、DOPE）混合而成的六种脂质复合物在 HepG2 细胞上转染 siGAPDH 的基因沉默效率图。由图看出，与对照组相比，六种脂质复合物转染 siGAPDH 后，细胞内的 GAPDH 的 mRNA 的表达水平都有所下降。不同辅助脂质与 DoGo4、DoGo121混合而成的脂质复合物转染 siGAPDH 后，siGAPDH 的基因沉默相差不大，而不同中性辅助脂质与 DoGo31 混合所达到的基因沉默效率不同。且 DoGo31(DOPE)下调 mRNA 的能力可达 50%以上，而 DoGo31(DOPC)下调 mRNA 的能力相对较弱。这也说明辅助脂质对 DoGo31 有很大的影响。
【参考文献】：
期刊论文
[1]阳离子聚合物基因载体:进展与展望[J]. 张颖,周志平. 应用化工. 2018(01)
[2]基因治疗:现状与展望[J]. 王嫱,张琳,陈赛娟. 中国基础科学. 2017(04)
[3]麻醉面罩的体外细胞毒性试验研究[J]. 高勇,李强,赵小磊,张娟丽,周静. 中国医疗器械信息. 2016(17)
[4]非病毒载体在基因治疗中的研究进展[J]. 李婉迪,赵振民. 新乡医学院学报. 2016(08)
[5]用于基因转染的阳离子脂质体研究进展[J]. 曹咏梅. 化学试剂. 2015(06)
[6]阳离子聚合物纳米基因载体在内耳的应用进展[J]. 王方园,吴南,陈正一,杨仕明. 中华耳科学杂志. 2015(01)
[7]多肽介导的核酸药物递送系统研究进展[J]. 丁晓然,王升启. 药学进展. 2015(02)
[8]脂质体介导转染N2a细胞的优化方法[J]. 赵云鹤,王若楠,杨桂姣,陆利. 中国组织工程研究. 2014(29)
[9]siRNA反向转染人肺动脉平滑肌细胞的条件优化[J]. 赵垚,白振忠,苏效东,李斌,韩士瑞,冯仁杰. 广州医药. 2014(02)
[10]核磁共振波谱在分析化学领域应用的新进展[J]. 王桂芳,马廷灿,刘买利. 化学学报. 2012(19)
博士论文
[1]聚赖氨酸基非病毒载体的设计与制备[D]. 周德重.南开大学 2012
硕士论文
[1]激光诱导液相合成金属纳米复合材料及光学特性研究[D]. 王大猛.山东大学 2017
[2]超顺磁性纳米氧化铁的制备及性能研究[D]. 陈玉磊.西南科技大学 2016
[3]阳离子聚合物修饰的硅纳米线阵列在基因转染中的应用[D]. 潘静静.苏州大学 2016
[4]氯丙嗪与三氟拉嗪对肺癌的作用及机制研究[D]. 陈波.天津科技大学 2016
[5]葡萄糖阳离子脂质体基因载体的合成和性能研究[D]. 何成喜.湖南师范大学 2015
[6]基于POSS核的响应性基因载体的构建[D]. 杨艳宇.北京化工大学 2014
[7]猪成纤维细胞脂质体或电穿孔转染pEGFP-N1条件的优化[D]. 季索菲.安徽农业大学 2011
[8]Pluronic修饰的聚阳离子非病毒基因载体的构建、表征及体外转染效率评价[D]. 王翔.第二军医大学 2011
[9]水溶性壳聚糖功能化碳纳米管的研究[D]. 李英.北京化工大学 2010
[10]大强度离心运动对发育期大鼠骨骼肌纤维类型及MyoD、myogenin表达的影响[D]. 廖艳萍.湖南师范大学 2009
本文编号：2943286
【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校
【文章页数】：94 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
阳离子脂质复合物介导的DNA转染和内吞作用
图 3.3 DoGo4（DOPC）、DoGo4（DOPE）、DoGo121（DOPC）、DoGo121（DOPE）、DoGo31（DOPC）、DoGo31（DOPE）对 HeLa 细胞的毒性实验结果Fig 3.3 Experimental results of cytotoxicity of DoGo4（DOPC）,DoGo4（DOPE）,DoGo121（DOPC）,DoGo121（DOPE）,DoGo31（DOPC）,DoGo31（DOPE）on HeLa cells图 3.3 是三种化合物（DoGo4、DoGo121、DoGo31）与两种辅助脂质（DOPC、DOPE）混合而成的六种脂质复合物在 HeLa 细胞上的细胞毒性实验结果图。由图可知，三种脂质化合物与辅助脂质 DOPE 混合成的脂质复合物相比于与辅助脂质 DOPC 混合成的脂质复合物的细胞毒性稍大，与 DOPE 混合的每个脂质化合物所呈现的细胞毒性是相当的，与 DOPC 混合的每个脂质化合物所呈现的细胞毒性也是相当的。六种脂质复合物随着其浓度的增加，细胞毒性也有所增加，但是细胞的存活率都是大于 60%，说明这六种脂质复合物在上述的浓度范围内是
图 3.6 DoGo4(DOPC)、DoGo4(DOPE)、DoGo121(DOPC)、DoGo121 (DOPE)、DoGo31(DOPC)、DoGo31 (DOPE)与 siGAPDH 混合在 HepG2 细胞上的基因沉默结果图Fig 3.6 Results of gene silencing on HepG2 cells by DoGo4 (DOPC), DoGo4 (DOPE),DoGo121(DOPC), DoGo121 (DOPE), DoGo31 (DOPC), DoGo31 (DOPE) complexed with siGAPDH图 3.6 是三种化合物（DoGo4、DoGo121、DoGo31）与两种辅助脂质（DOPC、DOPE）混合而成的六种脂质复合物在 HepG2 细胞上转染 siGAPDH 的基因沉默效率图。由图看出，与对照组相比，六种脂质复合物转染 siGAPDH 后，细胞内的 GAPDH 的 mRNA 的表达水平都有所下降。不同辅助脂质与 DoGo4、DoGo121混合而成的脂质复合物转染 siGAPDH 后，siGAPDH 的基因沉默相差不大，而不同中性辅助脂质与 DoGo31 混合所达到的基因沉默效率不同。且 DoGo31(DOPE)下调 mRNA 的能力可达 50%以上，而 DoGo31(DOPC)下调 mRNA 的能力相对较弱。这也说明辅助脂质对 DoGo31 有很大的影响。
【参考文献】：
期刊论文
[1]阳离子聚合物基因载体:进展与展望[J]. 张颖,周志平. 应用化工. 2018(01)
[2]基因治疗:现状与展望[J]. 王嫱,张琳,陈赛娟. 中国基础科学. 2017(04)
[3]麻醉面罩的体外细胞毒性试验研究[J]. 高勇,李强,赵小磊,张娟丽,周静. 中国医疗器械信息. 2016(17)
[4]非病毒载体在基因治疗中的研究进展[J]. 李婉迪,赵振民. 新乡医学院学报. 2016(08)
[5]用于基因转染的阳离子脂质体研究进展[J]. 曹咏梅. 化学试剂. 2015(06)
[6]阳离子聚合物纳米基因载体在内耳的应用进展[J]. 王方园,吴南,陈正一,杨仕明. 中华耳科学杂志. 2015(01)
[7]多肽介导的核酸药物递送系统研究进展[J]. 丁晓然,王升启. 药学进展. 2015(02)
[8]脂质体介导转染N2a细胞的优化方法[J]. 赵云鹤,王若楠,杨桂姣,陆利. 中国组织工程研究. 2014(29)
[9]siRNA反向转染人肺动脉平滑肌细胞的条件优化[J]. 赵垚,白振忠,苏效东,李斌,韩士瑞,冯仁杰. 广州医药. 2014(02)
[10]核磁共振波谱在分析化学领域应用的新进展[J]. 王桂芳,马廷灿,刘买利. 化学学报. 2012(19)
博士论文
[1]聚赖氨酸基非病毒载体的设计与制备[D]. 周德重.南开大学 2012
硕士论文
[1]激光诱导液相合成金属纳米复合材料及光学特性研究[D]. 王大猛.山东大学 2017
[2]超顺磁性纳米氧化铁的制备及性能研究[D]. 陈玉磊.西南科技大学 2016
[3]阳离子聚合物修饰的硅纳米线阵列在基因转染中的应用[D]. 潘静静.苏州大学 2016
[4]氯丙嗪与三氟拉嗪对肺癌的作用及机制研究[D]. 陈波.天津科技大学 2016
[5]葡萄糖阳离子脂质体基因载体的合成和性能研究[D]. 何成喜.湖南师范大学 2015
[6]基于POSS核的响应性基因载体的构建[D]. 杨艳宇.北京化工大学 2014
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[10]大强度离心运动对发育期大鼠骨骼肌纤维类型及MyoD、myogenin表达的影响[D]. 廖艳萍.湖南师范大学 2009
本文编号：2943286
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