红细胞RhD膜蛋白提取与固相化方法的研究

发布时间：2021-01-16 09:12

　　目的提取红细胞RhD膜蛋白并将其固化至乳胶微球以获得固相化RhD蛋白靶分子。方法采集3份志愿者全血标本,分别使用Yared MA法提取浓缩红细胞、试剂盒法提取浓缩红细胞及血影细胞膜蛋白的方法提取标本红细胞RhD膜蛋白,通过蛋白质定量检测及免疫印迹试验评价不同方法的提取效果。将不同方法提取出的RhD蛋白固化至乳胶微球,并通过流式细胞仪分析其抗原活性。结果 RhD膜蛋白浓度（mg/m L）分别为（n=3）:0.24±0.04（Yared MA法提取浓缩红细胞）、4.82±0.09（试剂盒法提取浓缩红细胞）和4.31±0.39（试剂盒法提取血影细胞）与浓缩红细胞上的RhD膜蛋白浓度（mg/m L）。免疫印迹试验:Yared MA法从浓缩红细胞提取的RhD蛋白仅有1条RhD特异性条带;试剂盒法从浓缩红细胞提取的RhD蛋白无特异性条带,从血影细胞提取的RhD蛋白有2条RhD特异性条带。流式分析（n=3）:Yared MA法提取的浓缩红细胞样品与试剂盒法提取的血影细胞样品、浓缩红细胞样品的荧光强度分别为:98.00±12.53、92.67±10.69、50.00±13.89。结论 Yared MA... 

【文章来源】：中国输血杂志. 2017,30(09)北大核心

【文章页数】：3 页

【部分图文】：

不同方法提取(及同一方法提取不同红细胞)

1空白对照组;2YaredMA法提取浓缩红细胞ＲhD膜蛋白;3试剂盒法提取血影细胞ＲhD膜蛋白;4试剂盒法提取浓缩红细胞ＲhD膜蛋白图3不同方法(及同一方法提取不同红细胞)提取的ＲhD膜蛋白荧光强度强度比较(n=3)3讨论目前普遍认为ＲhD抗原是由多种红细胞膜成分，如Ｒh相关糖蛋白，共同组成的1种复合抗原［7］，但红细胞膜骨架成分却并不是影响Ｒh抗原活性的绝对因素，在无细胞膜骨架成分的标本中同样可检出Ｒh抗原活性［8］。在本实验中我们通过比较文献［5］建立的ＲhD膜蛋白提取方法与试剂盒提取膜蛋白的方法发现，YaredMA法蛋白提取浓度较低，约仅为试剂盒法提取膜蛋白浓度的1/20(图1);但免疫印迹检测结果显示试剂盒提取血影细胞的ＲhD蛋白纯度却不及YaredMA法提取浓缩红细胞:试剂盒法提取的血影细胞有2条明显的条带，虽然1条与YaredMA法相同位于约45kD的位置，然而另1条却位于约30kD处，可能是蛋白降解导致的结果(图2)。红细胞蛋白组成以血红蛋白为主(约占红细胞湿重的97%)［9］。试剂盒法提取浓缩红细胞膜ＲhD蛋白的过程与YaredMA法、试剂盒法提取血影细胞膜ＲhD蛋白不同，它没有去除血红蛋白的过程，血红蛋白完全保留在了提取液中。YaredMA法提取取浓缩红细胞膜ＲhD蛋白可完全去除血红蛋白的干扰，而试剂盒法提取血影细胞膜ＲhD蛋白则最多可去除86.33%的血红蛋白［6］。虽然试剂盒法提取血影细胞与浓缩红细胞膜蛋白浓度相近，但免疫印迹检测结果差别明显———在血红蛋白的干扰下浓缩红细胞膜蛋白提取液中无ＲhD特异性条带(图2)。由此可见提取红细胞膜蛋白去除血红蛋白的干扰是十分必要的。ＲhD膜蛋白固化至乳胶微球的流式检测显示:YaredMA法提取取浓缩红细胞膜ＲhD蛋白与试剂盒法提取血影细胞ＲhD膜蛋白的荧光强

【参考文献】：
期刊论文
[1]不同血影细胞制备方法质量评价体系的建立[J]. 吴凡,梁延连,苏宇清,周丹,李大成,张印则.  中国输血杂志. 2014(05)



本文编号：2980547