微流控芯片液滴结合酶联免疫反应检测细胞表面蛋白EpCAM的研究

发布时间：2024-11-02 01:21

　　目的:流式细胞仪结合荧光标记抗体对细胞表面低丰度蛋白的检测不如人意。微流控芯片液滴与细胞尺寸相近,特别适合单细胞检测分析。本工作以微流控芯片液滴为技术平台,应用酶联放大原理,在单细胞水平上检测细胞表面蛋白的表达。方法:本实验属于方法学研究,将本文建立方法与已有方法进行分析比较,确定方法的可靠性。1、选择合适的标记酶与荧光底物,本实验选用碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP),荧光底物为荧光素二磷酸酯四铵盐(Fluorescein diphosphate,tetraammonium salt,FDP)。2、选择表达上皮细胞粘附分子(Epithelial cell adhesion molecule,Ep CAM)的A549细胞,用Anti-Ep CAM抗体(Biotin标记)标记,再用标记有碱性磷酸酶的链霉亲和素(Alkaline phosphatase-Streptavidin,ALP-SA)标记,将所得细胞悬液与荧光底物FDP溶液同时包入液滴,在荧光显微镜观察统计包含细胞且有荧光信号的液滴数与包裹细胞的液滴总数,计算表达Ep CAM的细胞比例。3、将A549细胞...

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1芯片设计示意图设计需注意：通道直径为80μm，液滴生成夹流区与弯曲通道直径下游直径为80μm。设计弯曲结构是为了增强液滴内部的混合，反应，这种混合需要液滴和侧向通道相接触，通道太宽液滴就触，无法起到增强液滴内部混合的效果。板制作洗玻璃基片。取干净基片于烧杯中，加入98....

图2成型的双水相通道芯片芯片内注入油相与水相反应液，调节注40μL/min。先打开油相排尽油相通道内空流区能稳定生成大小均匀的液滴时收集速的水相1与水相2溶液先在两水相相相交的夹流区生成液滴，因此得到的液滴，二者能独立在液滴内部进行反应。

图2成型的双水相通道芯片芯片内注入油相与水相反应液，调节注40μL/min。先打开油相排尽油相通道内空流区能稳定生成大小均匀的液滴时收集速的水相1与水相2溶液先在两水相相相交的夹流区生成液滴，因此得到的液滴，二者能独立在液滴内部进行反应。

图4HRP与TMB溶液反应物酶HRP溶液稀释103、104、105、106、107倍与相生成液滴，再进行反应的结果，见图5。图5HRP与TMB作为水相生成液滴后反应RP稀释103、106倍溶液生成液滴反应的结果置于B

本文编号：4008799