耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌耐药机制研究

发布时间：2017-05-31 13:08

  本文关键词：耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌耐药机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的探讨耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌(Carbapenem-Resistant Enterobacteriaceae,CRE)耐药机制,为临床合理应用抗菌药物提供理论指导,为耐药菌株的控制提供科学依据。方法1.筛选吉林大学第一医院检验科2012~2014年分离出的CRE菌株。2.使用纸片琼脂扩散法、MIC法检测CRE菌株对抗菌药物的耐药性,分析其耐药谱。3.应用改良Hodge试验及Carba NP试验共同筛查CRE菌株产碳青霉烯酶的情况,比较两种方法结果。4.利用聚合酶链反应(PCR)技术检测CRE菌株的23种耐药基因,分析每株CRE菌株所携带的耐药基因种类。5.利用实时荧光定量PCR技术检测CRE菌株外膜蛋白m RNA含量,分析外膜蛋白的表达。6.查阅患者病例,分析CRE菌株产生的影响因素。结果1.12株CRE菌株包括:产酸克雷伯菌1株、肺炎克雷伯菌4株、大肠埃希菌1株、弗劳地枸橼酸杆菌1株、摩根摩根菌1株、阴沟肠杆菌4株。除1株阴沟肠杆菌外,其他CRE菌株均来自患者无菌体液。2.12株CRE对哌拉西林、头孢呋辛、头孢他啶、头孢曲松、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率为100%;复方新诺明的耐药率为83%;亚胺培南、美罗培南的耐药率均为75%;左氧氟沙星、环丙沙星的耐药率均为58%;哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星的耐药率分别为33%、17%。3.改良Hodge实验阳性8株:1株产酸克雷伯菌、3株肺炎克雷伯菌、4株阴沟肠杆菌。4.Carba NP试验阳性菌株9株:1株产酸克雷伯菌、4株肺炎克雷伯菌、4株阴沟肠杆菌。5.细菌基因组耐药基因PCR结果:对12株CRE菌株进行23种耐药基因检测,扩增出blaIMP-1、blaIMP-2、blaCTX-M-1、blaCTX-M-2、blaCTX-M-9、blaSHV、blaACC、blaDHA、blaqnr B、blaqnr S等10种耐药基因。每株CRE菌株携带2~6种耐药基因。6.实时荧光定量PCR结果显示,3株肺炎克雷伯菌的Omp K36基因相对表达量明显下降,而2株阴沟肠杆菌Omp F、Omp C基因相对表达量同时下降,另外2株阴沟肠杆菌仅表现为Omp C基因相对表达下降。7.12株CRE菌株均分离自住院患者,分别为外科8株、ICU科1株、感染科1株、神经内科1株、小儿呼吸科1株。患者住院时间8~65天,除2例外其余患者均进行过开放性操作,除9号患者外,所有患者入院以来均进行过抗菌药物治疗。结论1.12株CRE菌株对各类抗菌药物的耐药率较高。2.Carba NP试验具有准确度高、检测速度快的优点,应为临床实验室首选检测碳青霉烯酶的手段。3.CRE菌株可同时携带碳青霉烯酶B类(blaIMP-1、blaIMP-2)、ESBLs(blaCTX-M-1、blaCTX-M-2、blaCTX-M-9、blaSHV)、Amp C酶(blaACC、blaDHA)、喹诺酮类(blaqnr S、blaqnr B)等耐药基因。4.耐碳青霉烯类抗菌药物的肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌存在外膜蛋白表达缺失的情况。
【关键词】：肠杆菌科细菌 耐药机制 碳青霉烯酶 外膜蛋白
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R446.5
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 英文缩略词表9-13
• 第1章 绪论13-14
• 第2章 综述14-20
• 2.1 CRE菌株产生碳青霉烯酶14-17
• 2.2 CRE菌株外膜蛋白表达缺失17-18
• 2.3 细菌外排泵高表达18
• 2.4 抗菌药物作用靶位的改变18-20
• 第3章 材料与方法20-32
• 3.1 实验菌株20
• 3.2 实验仪器20-21
• 3.3 实验耗材21
• 3.4 实验试剂21-22
• 3.5 主要实验试剂配制22
• 3.6 菌株鉴定与抗菌药物体外敏感试验22-23
• 3.7 碳青霉烯酶检测23-27
• 3.8 ESBLs基因检测27
• 3.9 AmpC酶基因检测27-28
• 3.10 喹诺酮类抗菌药物耐药基因检测28
• 3.11 外膜蛋白基因表达水平检测28-31
• 3.12 病例回顾分析31-32
• 第4章 结果32-45
• 4.1 CRE菌株鉴定结果32
• 4.2 药敏试验结果32-36
• 4.3 碳青霉烯酶检测结果36-37
• 4.4 耐药基因PCR结果37-41
• 4.5 外膜蛋白实时荧光定量PCR结果41-43
• 4.6 病例回顾分析结果43-45
• 第5章 讨论45-49
• 5.1 CRE菌株耐药性分析45
• 5.2 碳青霉烯酶检测结果分析45-46
• 5.3 各类耐药基因检测结果分析46-47
• 5.4 外膜蛋白表达结果分析47-48
• 5.5 CRE菌株产生影响因素48
• 5.6 展望与不足48-49
• 第6章 结论49-50
• 参考文献50-55
• 在读期间所获科研成果55-57
• 致谢57

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