儿童EB病毒感染不同临床疾病类型免疫功能研究

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Chinese Journal of Practical Pediatrics Jun. 2013 Vol. 28 No. 6

短篇论著
文章编号： 1005 - 2224 （2013） 06 - 0464 - 03

儿童 EB 病毒感染不同临床疾病类型免疫功能研究
张 慧 a， 李

双杰 a， 袁远宏 b， 康
摘要： 目的

桢 a， 唐

莲 a， 谭艳芳 a
收集 2010 年 10 月至

2012 年 4 月湖南省儿童医院内科收治的 111 例 EBV 感染患儿， 按临床疾病类型分为４组： 普通传染性单核细胞增

了解 EB 病毒 （EBV） 感染患儿不同临床疾病类型与其免疫功能的关系。方法

（EBV-HLH） 组 19 例。同时选择正常儿童 32 例作为对照组。采用散射比浊法检测血清免疫球蛋白和补体， 采用 CAEBV 组 IgE 水平高于其余 4 组， 差异有统计学意义 （P＜0.01） ； EBV-HLH 组 IgA、 IgG 水平显著低于其余 4 组， 差 组 CD4+/CD8+较其余 3 组 EBV 感染患儿升高， 与对照组差异无统计学意义， B 细胞较普通 IM 组及重症 IM 组、 对照 组降低 （P＜0.05） 。结论 伤与机体免疫失衡有关， 可能尤其与 CD4+及 B 细胞降低显著相关。体液免疫降低的程度可能会提示疾病预后。 关键词： EB 病毒； 细胞免疫； 体液免疫； 儿童 中图分类号： Ｒ72 文献标志码： A Keywords: Epstein-Barr virus； cellular immunity； humoral immunity； children EB 病毒 （Epstain-Barr Virus， EBV） 感染的临床表现及

多症 （IM） 组 47 例； 重症 IM 组 35 例； 慢性活动性 EBV 感染 （CAEBV） 组 10 例； EBV 相关噬血淋巴组织细胞增多症

流式细胞仪检测法检测外周血外周血淋巴细胞分化抗原 CD4、 CD8、 CD4/CD8、 CD16+56 （NK） 表达率。结果 （1） 异有统计学意义 （P＜0.01） 。 （2） 普通 IM 组及重症 IM 组 CD8+比值较其他 3 组显著升高 （P＜0.01） ； EBV-HLH 组的 儿童 EBV 感染不同疾病类型与机体细胞免疫反应相关， EBV 引起的严重器官功能损

CAEBV 组、 EBV-HLH 组的 C3、 C4 水平明显低于其余３组， 且后者与其余３组差异有统计学意义 （P＜0.01） ； 总 T 细胞、 CD4+、 CD8+、 CD4+/CD8+、 NK 及 B 细胞均显著下降， 差异与其余 4 组比较有统计学意义 （P＜0.01） ； CAEBV

转归与 EBV-DNA 病毒量及机体免疫功能有关。有文献报 道， 血浆或血清中的游离 EBV-DNA 与器官损害程度、 疾病 种类、 疾病严重度及病死率呈正相关
［3-4］

据， 根据临床表现、 外周血象和血清学检查确诊［5］。伴多脏 一标准， 有研究认为伴有至少 2 个系统受累即可诊断为重

器功能损害的 IM 病例为重症 IM。目前对重症 IM 诊断无统 症 IM［6］。本文对患儿有以下临床特征时高度重视： （1） 持 著下降， 但未达到 EBV-HLH 标准； （3） 转氨酶显著异常， 尤 其是乳酸脱氢酶 （LDH） 显著增高； （4） 呼吸和吞咽困难， 并 发胸腔积液、 肺炎等； （5） 心电图异常， 心肌炎。 续或反复发作的 IM 表现， 即发热、 持续性肝功能损害、 多发 性淋巴结病、 肝脾肿大、 全血细胞减少、 视网膜炎、 间质性 肺炎、 牛痘样水疱及蚊虫过敏等症状持续 3 个月以上。 （2） EBV 感染及引起组织病理损害的证据如满足下述标准中 ②在感染组织或外周血中检测出 EBER-1 阳性细胞； ③外 的 1 条或 1 条以上： ①血清 EBV 抗体滴度异常增高， 包括抗 周血 PBMC 中 EBV-DNA 水平高于 102.5 拷贝/g DNA； ④受 EBV-DNA。 （3） 排除上述临床表现系由其他已知疾病所致 者。 VCA-IgG≥1∶640 或抗 EA-IgG≥1∶160， VCA/EA-IgA 阳性； 累组织中 EBV-EBERS 原位杂交或 EBV-LMP1 免疫组化染 色阳性； ⑤ Southern 杂 交 在 组 织 或 外 周 血 中 检 测 出 EBV 相关噬血淋巴组织细胞增多症 （EBV-HLH） 的诊 慢性活动性 EBV 感染 （CAEBV） 诊断标准［7-8］： （1） 有持 续高热 （＞1 周） ， 肝脾明显肿大； （2） 外周血象 2 系或 3 系显

能变化可提示疾病转归及预后。本文对 EBV 感染患儿不 同临床疾病类型及其免疫功能的关系进行了研究， 现报告 如下。 1 资料与方法 临床资料 病例来自 2010 年 10 月至 2012 年 4 月湖

， 机体细胞免疫功

1. 1

南省儿童医院内科收治的 111 例 EBV 感染患儿， 其中男 62 EBV 感染的不同临床类型将 111 例患儿分为以下 4 组： 普 通传染性单核细胞增多症 （IM） 组 47 例； 重症 IM 组 35 例； 慢 省儿童医院儿保科体检的 32 例正常儿童为对照组， 其中男 临床资料比较， 差异均无统计学意义。

例， 女 49 例。年龄 8 个月至 15 岁， 中位年龄 4.03 岁。根据 性活动性 EBV 感染 （CAEBV） 组 10 例； EBV 相关噬血淋巴 组织细胞增多症 （EBV-HLH） 组 19 例。另选择同期在湖南 21 例， 女 11 例； 年龄 2～14 岁。这５组患儿的性别、 年龄等 IM 诊断标准： 以第 7 版 《实用儿科学》 的诊断标准为依

沙 410007

作者单位： 湖南省儿童医院 a 肝病中心； b 急救中心， 湖南 长

电子信箱： zhanghui_17@yahoo.com.cn

断： （1）HLH 诊断标准［9］依据 HLH-2004 方案， 即符合以下 8 项中的 5 项可诊断 HLH： ①发热， ②脾脏增大， ③外周血

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至少两系减少 （血红蛋白＜90 g/L、 血小板＜100 × 109/L、 中
9

性粒细胞＜110 × 10 /L） ； ④高甘油三酯血症和 （或） 低纤维 蛋白原血症， ⑤骨髓、 脾脏或淋巴结中有噬血现象， ⑥NK 细 胞活力降低或缺乏， ⑦血清铁蛋白≥500 mg/L， ⑧可溶性 为具备了 EBV 感染证据： ①血清学抗体检测提示原发性急 原位杂交和 Southern 杂交等在患者血清、 骨髓、 淋巴结等受 累组织检测 EBV 为阳性。 1. 2 1. 2. 1 方法 分组 CD25 （SIL-2R） ≥2400 U/mＬ。 （2） 对有下列 2 项之一者认 性 EBV 感染或活动性感染； ②分子生物学方法包括 PCR、

和 CD3-FITC／CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC，再 加 入 100 μ L 抗凝静脉血充分混匀， 共标记 30 min， 加固定剂 30 10～20 min， 加 PBS 缓 冲 液 补 充 ， 用 流 式 细 胞 仪 计 数 10 μL 固定 5 min 后， 加入红细胞溶解液 1 mL 充分溶解红细胞 000～15 000 个淋巴细胞。血清免疫球蛋白和补体测定采

用散射比浊法。免疫球蛋白测定试剂盒购自西门子医学

诊断产品 （上海） 有限公司， Multi TEST CD3-FITC／CD16+ CD45-PerCP/CD4-APC 购自美国 DB 公司。 1. 3 统计学处理 分析， P＜0.05 为差异有统计学意义。 2 结果 2. 1 组、 EBV-HLH 组 C3、 C4 水平低于其余３组， 且 C4 与其余３ IgG 水平显著低于其余４组患儿， 差异有统计学意义 （P＜ 0.01） 。见表 1。 血清免疫球蛋白和补体检测结果的比较 应用统计软件 SPSS17.0 对数据进行统

CD56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC 和 CD3-FITC／CD8-PE/ 计分析， 计量资料以均数±标准差表示， 数据处理采用方差

EBV 感染患儿均于入院 3 d 内抽取 EBV 抗体， 进行肝肾功 能、 心肌酶、 免疫全套 （血清免疫球蛋白和补体） 、 淋巴细胞 免疫功能、 EBV-DNA 定量等项检查； 对入选的正常儿童， 均在征得其家长同意后进行血清免疫球蛋白和补体及淋 巴细胞免疫功能检查。 1. 2. 2 指标测定 采用德国 PARTEC 流式细胞仪和全自

采用前瞻性临床病例研究方法， 对入选

CAEBV

动蛋白分析仪。外周血 T、 B 细胞亚群和 NK 细胞检测采用 EDTA-K2 抗凝，， 在每支试管中加入 10 μL 的四标记单克隆 表1
普通 IM 组 （47 例） 重症 IM 组 （35 例） CAEBV 组 （10 例） 对照组 （32 例） EBV-HLH 组 （19 例）

组的差异有统计学意义 （P＜0.01） ； CAEBV 组 IgE 水平高于

流式细胞仪检测法， 检测方法： 取 外 周 静 脉 血 1 mL 抗 体 CD3-FITC/CD16 + CD56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC
IgG IgA IgM

其余 4 组， 差异有统计学意义 （P＜0.01） ； EBV-HLH 组 IgA、

不同临床疾病类型 EBV 感染患儿及对照组免疫球蛋白和补体的检测 （g/L）
0.47 ± 0.58 0.45 ± 0.34 0.49 ± 0.78 0.61 ± 1.25 0.84 ± 0.62 1.02 ± 0.50 0.69 ± 0.93 0.85 ± 0.57 2.52 ± 4.03 5.46 ± 3.57 2.18 ± 3.96 2.33 ± 4.06 IgE 0.93 ± 0.34 0.67 ± 0.52 0.84 ± 0.28 0.86 ± 0.32 C3

5.38 ± 3.82 5.19 ± 3.07 5.29 ± 2.98 6.12 ± 2.52

0.31 ± 0.25 0.18 ± 0.56 0.21 ± 0.15 0.19 ± 0.35

C4

2.71 ± 2.63

0.27 ± 1.02

0.54 ± 0.52

2.10 ± 4.18

0.39 ± 0.47

0.13 ± 0.17

2. 2

（P＜0.01） ； EBV-HLH 组总 T 细胞， CD4 、 CD8 、 CD4 /CD8 、
+ + + +

普通 IM 组及重症 IM 组 CD8+ 比值较其他 3 组显著升高

外周血 T、 B 细胞亚群和 NK 细胞检测结果的比较

义 （P＜0.01） ； CAEBV 组 CD4 + 轻度升高， 但无统计学意义， CD4 +/CD8 + 较其余 EBV 患儿升高， 与对照组相比差异无统 见表 2。 计学意义； B 细胞较 IM 患儿及对照组明显降低 （P＜0.05） 。

NK 及 B 细胞均显著下降， 差异与其余 4 组比较有统计学意 表2
普通 IM 组 （47 例） 重症 IM 组 （35 例） CAEBV 组 （10 例） 对照组 （32 例） EBV-HLH 组 （19 例） 总 T 细胞 （%） CD4+细胞 （%） 47.58 ± 9.26 40.27 ± 7.58

不同临床疾病类型 EBV 感染患儿及对照组外周血 T、 B 细胞亚群和 NK 细胞检测
CD8+细胞 （%） 34.54 ± 7.61 32.41 ± 8.20 1.97 ± 3.42 2.15 ± 2.17 CD4+/CD8+ 12.21 ± 8.62 9.08 ± 5.87 8.17 ± 6.31 NK 细胞 （%）

78.62 ± 8.72

68.76 ± 10.42 71.49 ± 10.08 48.35 ± 9.20

70.23 ± 11.03

49.68 ± 8.32 48.56 ± 8.78

27.42 ± 10.01

18.84 ± 9.04 17.22 ± 6.81

11.31 ± 8.16

3.18 ± 1.89

11.85 ± 7.82

16.98 ± 9.21 9.13 ± 6.93

B 细胞 （%）

3.24 ± 1.27

1.73 ± 1.06

11.02 ± 9.70

3.81 ± 7.64

17.62 ± 8.71

8.92 ± 7.26

3

讨论 EB 病毒 （Epstain-Barr virus， EBV） 是一种双链 DNA 病

细胞增多症 （infectious mononucleosis， IM） 、 慢性活动性 EBV 感染 （chronic active Epstein-Barr virus infection， CAEBV） 及 lated EBV-HLH） ， 后两种疾病是较为严重的 EBV 感染相关疾
［2］

在儿童， 非肿瘤性 EBV 感染疾病主要包括传染性单核

毒， 属于疱疹病毒科， 亚科， 人感染 EBV 后建立终身潜伏感 毒， 与鼻咽癌、 淋巴瘤等多种肿瘤的发生密切相关 。
［1］

染， 人群感染率超过 90％。EBV 是一种重要的肿瘤相关病

EBV 相关噬血淋巴组织细胞增生症 （Epstein-Barr virus-re? hemophagocytic lymphohistiocytosis

syndrome，

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病， 预后不良。

感染时， EBV 首先在口咽部上皮细胞内增殖， 然后感染附 以造成全身性感染。外周血单个核细胞 （PBMC） 被用来检 测 EBV 载量， PBMC 中 EBV-DNA 水平有助于 CAEBV 的诊 断， EBV-DNA 水平与病情严重程度和预后有关。 巴细胞是 EBV 侵犯的靶细胞。EBV 感染 B 淋巴细胞， 被感 应［10］。机体免疫系统对 EBV 感染的控制作用主要通过细 EBV 是一种人类普遍易感的疱疹病毒， 患儿体内 B 淋

EBV 主要通过唾液传播， 也可经输血传染。原发 EBV

病机制， 持续异常免疫状态特别是 T 细胞亚群异常与临床 关。对 EBV 感染患儿利用外周血淋巴细胞分化抗原的测

EBV 感染后细胞免疫功能紊乱是各种疾病类型的发

近的 B 淋巴细胞， 受到感染的 B 淋巴细胞进入血液循环可

病情恶化有关。 EBV 感染引起的严重器官功能损伤与机 体免疫失衡有关， 可能尤其与 CD4 + 及 B 细胞降低显著相

定动态观察淋巴细胞亚群变化， 对于疾病发展及预后有重 要意义。以上研究为我们更深入地辨别 EBV 感染的不同 临床类型和寻找治疗 EBV 感染的有效方法提供了重要依 据。 参考文献：
［1］ 谢正德， 申昆玲. 重视儿童非肿瘤性 EB 病毒感染疾病的研 ［2］ 王群 ， 谢正德. 儿童 EB 病毒相关疾病的诊断标准和治疗原 ［3］ Teramura T， Tabata Y， Yagi T， et al. Quantitative analysis of 则 ［J］ . 实用儿科临床杂志， 2010， 25 （10） ： 706-708. 究 ［J］ . 首都医科大学学报， 2010， 31 （2） ： 213-216.

染的 B 细胞传递病毒抗原信息， 引起强烈的 T 细胞免疫反 胞免疫来实现， 目前认为 T 细胞免疫对控制 EBV 感染起决 定性作用。各种分化抗原中， CD3 是所有 T 细胞的表面标 上调机体的免疫功能， CD8 是细胞毒 T 细胞和抑制 T 细胞

志， CD4 则是辅助 T 细胞 （TH） 和效应 T 细胞的表面标志， TH 通过释放多种细胞因子辅助 B 细胞和效应 T 细胞活化， （Ts） 的表面标志， 抑制 T 细胞 （Ts） 通过释放抑制因子抑制 B 细胞和效应 T 细胞活化， 下调机体的免疫功能。如果患儿 存在免疫缺陷或免疫反应过于强烈， 都会引起严重的免疫 损伤， 从而导致慢性活动性感染、 器官功能衰竭等。

cell-free Epstein-Barr virus genomecopy number in patients Leuk Lymphoma， 2002， 43 （4）： 173-179.

with EBV-associated hemophagocytic lymphohistiocytosis［J］ . ［4］ Yamashita N， Kimura H， Morishima T. Virological aspects of （6）： 239-246. Epstein-Barr virus infections［J］ . Acta Med Okayama， 2005， 59

EBV 感染后机体 T 细胞发生了强烈反应， 主要引起 TS 和 TC 细胞 （ CD8+细胞） 增加。CD8+细胞在急性 EBV 感染中的高 重症 IM 组 CD4+较普通 IM 组下降， 目前有研究认为， EBV 感 染患儿急性期存在的免疫功能紊乱可能还与 CD4 CD25
+

本研究中普通 IM 组和重症 IM 组 CD8+比值升高， 提示

［5］ 胡亚美， 江载芳. 诸福棠实用儿科学 ［M］ . 7 版. 北京： 人民卫 ［6］ 蒋娟， 于洁， 王晓莉， 等. 伴有多脏器功能损害的传染性单核 （12） ： 919-922. 生出版社， 2002： 821-825.

度活化和增殖状态， 有利于发挥清除病毒作用［11］。此外，
+

细胞增多症 51 例临床分析 ［J］ . 中国实用儿科杂志， 2007， 22

Treg 细胞降低引起的免疫失衡显著相关

［12］

在伴随严重器官功能损伤的情况下较为明显。
+

， CD4 细胞降低
+

［7］ Okano M， Kawa K， Kimura H， et al. Proposed guidelines for di? agnosing chronic active epstein-barr virus infection［J］ . Am J Hematol， 2005， 80： 64-69.

随着机体自身免疫调节上调 CD4 ， 逐渐恢复平衡进入恢复 期 （潜伏期） 或慢性感染期。 EBV 感染慢性活动性转变时 和 （或） B 细胞下降。 EBV 感染的 CTL 细胞和 NK 细胞去功 能化， 变成大颗粒淋巴细胞并异常增生， 产生高细胞因子 的发病机制。 伴随 CD4+上升， 原本升高的 CD8+下降， 同时伴随明显的 NK 血症及巨噬细胞活化， 造成广泛的组织损伤是 EBV-HLH EBV-HLH 组总 T 细胞、 CD4 、 CD8 、 CD4 /CD8 、 NK、 B
+ + + +

CAEBV 组 CD4+/CD8+基本正常， B 细胞比值降低， 提示

［8］ 申昆玲， 段红梅.重症 EB 病毒感染相关疾病的现状和诊治进 ［9］ Henter JI，Horne A，Aricó M，et al. HLH-2004： diagnostic sis ［J］ . Pediatr Blood Cancer， 2007， 48 （2） ： 124-131. 展 ［J］ . 小儿急救医学， 2005， 12 （5） ： 342.

and therapeutic guidelines for hemophagocytic lymphohistiocyto?

［10］ Precopio LM， Sullivan JL， Willard C， et a1.Differential kinetics and specificity of EBV—specilic CIM + and CD8 + T cells during primary infection ［J］ .Immunology， 2003， 170 （10） ： 2590-2598.

细胞均降低， 提示噬血淋巴组织细胞增多的发生与整个细

［11］ 许俐， 林书祥， 胡坚， 等. 急性和慢性 EB 病毒感染儿童外周 630-631.

胞免疫功能低下显著相关。 EBV 感染与机体体液免疫关 C3、 C4 的下降， 这是否说明体液免疫降低的程度可能可以 提示疾病的预后情况， 尚有待进一步研究。

血 CD8 + T 细胞活化差异比较 ［J］ . 天津医药， 2010， 7 （38） ：

系不明显， 研究发现 EBV-HLH 组伴有体液免疫 IgA、 IgG、

［12］ 岳玲， 封其华. EB 病毒感染儿童 CD4+CD25+变化及意义 ［J］ . 中国医学创新， 2011， 1 （8） ： 1-3.

2013 - 01 - 20 收稿 2013 - 03 - 05 修回 本文编辑： 郭继龙



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