TREM-2在腹腔感染脓毒症的作用研究

发布时间：2017-09-11 08:21

  本文关键词：TREM-2在腹腔感染脓毒症的作用研究

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【摘要】：目的:探讨腹腔感染性脓毒症中TREM-2(髓样细胞触发受体)与Janus激酶-信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)通路的关系。方法:实验对象为雄性清洁级Wistar大鼠,体重304±11g。实验设计分为两部分:第一部分为腹腔感染性脓毒症大鼠模型的建立。将80只大鼠随机分为对照组(n=8)、假手术组(n=32)、模型组(CLP组,n=40),模型组采用盲肠结扎穿孔法[1](Cecal ligation and puncture,CLP)制备腹腔感染性脓毒症模型;对照组不作处理;假手术组仅麻醉和开关腹腔,不行手术处理。记录72h死亡情况,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清、腹引液白细胞介素(IL)-1、IL-4、IL-6、IL-10浓度变化。第二部分为应用JAK2抑制剂AG490和STAT抑制剂雷帕霉素(RPM)干预后,观察肝组织TREM-2表达情况:分为假手术组(n=24)、CLP组(n=48)、AG490组(n=48)和RPM组(n=48),后2组分别于CLP前0.5h皮下注射AG490 8 mg/kg、RPM 0.4mg/kg,各组于术后6、24、48、72h从内眦静脉取静脉血0.3ml后处死动物,留取血清、腹引液及肝组织标本备用。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清、腹引液白细胞介素(IL)-1、IL-4、IL-6、IL-10浓度变化;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织TREM-2m RNA的表达。结果:第一部分:对照组和假手术组大鼠随时间进展生命体征及腹部解剖无明显改变。CLP组大鼠术后72h腹部探查可见多脏器淤血、粘连,回肠组织明显肿胀,腹腔渗液增多伴恶臭等炎性改变。建模后72h,血液和腹引液中,CLP组IL-1、IL-6和IL-4、IL-10较对照组和假手术组均明显增加(P0.01),说明腹腔感染性脓毒症大鼠模型复制成功。第二部分:(1)与假手术组相比,CLP组血清炎症因子浓度6h即开始升高,72h达高峰(P0.01)。应用AG490后,血清炎症因子浓度6h即开始升高,72h达高峰,较CLP组相比无差异;RPM组IL-1、IL-4、IL-10的浓度6h最高,随时间逐渐降低,且显著低于相同时间点CLP组,而6h IL-6的浓度虽较CLP组无差异,但24h、48h、72h IL-6的浓度较CLP组显著降低(P0.01)。(2)与假手术组相比,CLP组腹引液炎症因子浓度6h即开始升高,72h达高峰(P0.01)。应用AG490后,腹引液炎症因子浓度6h即开始升高,72h达高峰,较CLP组相比无差异;RPM组,IL-4、IL-10 6h即达到峰值,随时间推进呈下降趋势,与相同时间点CLP组相比有明显统计学差异,而6h IL-1、IL-6的浓度虽较CLP组无差异,但24h、48h、72h IL-1、IL-6的浓度较CLP组显著降低(P0.01)。(3)RT-PCR检测发现,CLP组肝组织TREM-2 m RNA的表达随时间逐渐减低;AG490组肝组织TREM-2 m RNA的表达随时间延长呈降低趋势,较同时间点CLP组肝组织TREM-2 m RNA的表达无显著性差异;RPM组肝组织TREM-2 m RNA的表达虽在6h较CLP组TREM-2 m RNA的表达减少,但在24、48、72h显著高于同时间点CLP组TREM-2 m RNA的表达(P0.01)。结论:1.本实验证实腹腔感染性脓毒症时大鼠肝组织TREM-2表达显著降低,而血清及腹引液炎症因子明显升高,说明TREM-2对炎症反应的级联扩大有限制作用,TREM-2缺乏,导致这种限制作用减弱,炎症因子大量释放,加重脓毒症的进展。2.应用STAT抑制剂RPM后,TREM-2的表达明显增加,炎症因子释放减少,提示JAK/STAT通路可能阻碍了TREM-2的表达,抑制STAT能够上调TREM-2的表达,从而发挥其在调节炎症反应和免疫应答方面的作用,但具体机制有待进一步研究。
【关键词】：脓毒症 TREM-2 JAK/STAT AG490 RPM CLP
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R459.7
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 前言11-13
• 研究现状、成果11-12
• 研究目的、方法12-13
• 一、腹腔感染性脓毒症大鼠模型的建立13-20
• 1.1 对象和方法13-16
• 1.1.1 动物模型的制备与分组13
• 1.1.2 实验试剂及仪器13-14
• 1.1.3 标本收集14
• 1.1.4 观察指标14
• 1.1.5 检测方法14-16
• 1.1.6 统计学方法16
• 1.2 结果16-18
• 1.2.1 各组大鼠一般情况观察16-17
• 1.2.2 对照组、假手术组和CLP组三组血清炎症因子的比较17-18
• 1.2.3 对照组、假手术组和CLP组三组腹引液炎症因子的比较18
• 1.3 讨论18-19
• 1.4 小结19-20
• 二、TREM-2与JAK/STAT信号通路关系的研究20-39
• 2.1 对象和方法20-30
• 2.1.1 动物模型的制备与分组20
• 2.1.2 实验试剂及仪器20-22
• 2.1.3 标本收集22-23
• 2.1.4 观察指标23
• 2.1.5 检测方法23-30
• 2.1.6 统计学方法30
• 2.2 结果30-34
• 2.2.1 各组大鼠血清炎症因子的变化30-31
• 2.2.2 各组大鼠腹引液炎症因子的变化31-32
• 2.2.3 Real-time PCR检测肝组织TREM-2mRNA的表达32-33
• 2.2.4 Western Blot检测肝组织TREM-2蛋白的表达33-34
• 2.3 讨论34-38
• 2.3.1 JAK/STAT信号通路与脓毒症34-35
• 2.3.2 TREM-2与脓毒症35-36
• 2.3.3 TREM-2对炎症因子IL-1、IL-4、IL-6、IL-10的影响36-38
• 2.4 小结38-39
• 结论39-40
• 参考文献40-44
• 发表论文和参加科研情况说明44-45
• 综述 JAK/STAT、TREM-2与脓毒症关系研究进展45-54
• 综述参考文献51-54
• 致谢54-55
• 个人简介55

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 王合丽;吕大伦;;JAK/STAT通路在脓毒症中作用研究进展[J];长治医学院学报;2012年06期

2 陈驾君;白祥军;李仁杰;李占飞;;创伤脓毒症患者外周血Th17/Treg平衡变化及临床意义[J];中华创伤杂志;2012年10期

3 李淑芬;孙国瑛;周勇;周慧芳;段佳熙;管茶香;;TREM-2对小鼠肺成纤维细胞凋亡的影响[J];国际病理科学与临床杂志;2011年04期

4 蔺静,姚咏明;TREMs受体的研究新进展[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);2003年06期

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本文编号：829628