脓毒症合并ALI的分子标志物筛选

发布时间：2017-09-22 04:15

  本文关键词：脓毒症合并ALI的分子标志物筛选

  更多相关文章： 脓毒症合并ALI miRNA TLR4 IL-34 IL-36

【摘要】：目的：脓毒症合并急性肺损伤(ALI)的早期诊断及有效的治疗对疾病预后非常重要,但目前人们对该疾病的相关分子标志物及机理认识还十分有限。本研究应用基因芯片技术,高通量检测外周血miRNA,研究脓毒症合并ALI具有差异表达的miRNA,进行筛选,讨论这些miRNA能否可以应用于脓毒症合并ALI的诊断和预测；同时,研究脓毒症合并ALI外周血中TLR4及IL-34、IL-36的表达变化、三者间是否具有相关性,以及其与疾病严重程度的相关性,为脓毒症合并ALI的机制研究提供理论基础,为临床脓毒症合并ALI的预测提供新的研究思路。方法：收集内蒙古包钢医院院呼吸与危重症医学科收治的脓毒症合并ALI患者和健康体检者的外周血液标本(正常组共11例,脓毒症合并ALI组共18例)。Trizol法提取标本(外周血)的总RNA,使用紫外分光光度仪(Nanodrop1000)测定出总RNA的质量,筛选出符合实验标准的血液样品(正常组6例,脓毒症合并ALI组3例)。使用miRNA完全标记和Hyb工具包的试剂盒来进行基因芯片杂交,用Agilent Feature Extraction软件对杂交图片进行分析,用GeneSpring软件处理分析并筛选出脓毒症合并ALI组和正常对照组之间有明显差异表达的miRNA (以P值0.05和FC (abs)值2为条件),用DAVID工具对靶基因相关的功能进行预测。2%EDTA抗凝剂的试管采集外周静脉血(正常组5例,脓毒症合并ALI组15例),离心取上清,用于ELISA法检测TLR4、IL-34、IL-36。结果：1.Agilent芯片高通量检测发现脓毒症合并ALI中共有320个miRNA存在差异表达,miRNA在脓毒症合并ALI组中上调的有138个,下调的有182个；包括7个10倍以上的上调基因：miRNA-619-5p、miRNA-6881-3p. miRNA-449b-3p、miRNA-3657、miRNA-4254、miRNA-34b-3p和miRNA-1287-5p;3个10倍以上的下调基因：miRNA-362-5p、miRNA-892b和miRNA-625-5p。这止匕miRNA目关的预测靶基因数量庞大,经筛选获得了大约有3500个共有的靶基因；靶基因功能分析结果显示,主要与调控生物膜离子通道有关。2.脓毒症合并ALI的外周血中TLR4、IL-34、IL-36均显著提高,具有统计学意义(P0.01)。3.经Pearson才目关分析,IL-34浓度与TLR4浓度呈正相关,IL-36浓度与TLR4浓度不相关,IL-34浓度与IL-36浓度呈正相关。结论和意义：脓毒症合并ALI中共有320个miRNA存在差异表达,此中包含上调138个,下调182个；这些miRNA共有的靶基因大约有3500个,主要与调控生物膜离子通道有关。脓毒症合并ALI的外周血中TLR4-IL、34.IL-36均显著提高；IL-34浓度与TLR4浓度呈正相关,IL-36浓度与TLR4浓度不相关,IL-34浓度与IL-36浓度呈正相关。在脓毒症合并ALI炎症反应中IL-34可能对TLR4及下游炎症因子的表达有影响,IL-34、IL-36在调控炎症因子的表达中协同作用。这对脓毒症合并ALI机制研究提供了新的思路,对诊断、评估、治疗脓毒症合并ALI具有一定的生物学意义。
【关键词】：脓毒症合并ALI miRNA TLR4 IL-34 IL-36
【学位授予单位】：内蒙古大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R459.7;R563.8
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 缩略词表11-12
• 引言12-14
• 综述：脓毒症相关性肺损伤的作用机制及研究进展14-18
• 第一章 研究材料与方法18-25
• 1.1 病例样本18-19
• 1.1.1 一般资料18
• 1.1.2 入选标准18
• 1.1.3 排除标准18-19
• 1.2 miRNA芯片分析19-23
• 1.2.1 芯片分析试验仪器设备19
• 1.2.2 芯片分析试验主要试剂19-20
• 1.2.3 芯片分析样本收集20
• 1.2.4 芯片检测步骤及分析20-23
• 1.3 TLR4、IL-34、IL-36的ELISA研究方法23-25
• 1.3.1 ELISA试验仪器设备23
• 1.3.2 ELISA试验主要试剂23
• 1.3.3 ELISA样本收集23-24
• 1.3.4 ELISA检测步骤24-25
• 1.4 统计学方法25
• 第二章 研究结果25-36
• 2.1 miRNA芯片分析结果25-29
• 2.1.1 芯片样品的选择25-27
• 2.1.2 差异性表达miRNA的散点图27
• 2.1.3 差异表达的miRNA分析27-28
• 2.1.4 相关靶基因及其功能28-29
• 2.2 外周血中TLR4及炎症因子测定及相关性分析29-36
• 2.2.1 ELISA法测定TLR4、IL-34、IL-36含量29-33
• 2.2.2 TLR4与IL-34、IL-36的相关性分析33-35
• 2.2.3 TLR4、IL-34、IL-36在诊断脓毒症合并ALI中的特异性及敏感性分析35-36
• 第三章 结论和讨论36-39
• 参考文献39-43
• 致谢43-44
• 攻读学位期间发表的学术论文目录44

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