沙门氏菌和大肠杆菌耐药性及耐药基因的研究

发布时间：2017-10-01 21:20

  本文关键词：沙门氏菌和大肠杆菌耐药性及耐药基因的研究

  更多相关文章： 沙门氏菌 大肠杆菌 血清型 耐药性 耐药基因

【摘要】：沙门氏菌和致病性大肠杆菌是重要的致病菌,由于抗生素大规模不合理的使用,使沙门氏菌和大肠杆菌出现了严重的多重耐药性,导致大部分现有药物无效。由质粒介导的耐药基因可以传递给其他动物和人类,不但给养殖业造成了严重的经济损失,同时也带来了食品安全问题和人类健康问题。因此,了解沙门氏菌和大肠杆菌的耐药规律及耐药基因,明确其耐药机制,不但为兽医临床用药、兽药管理提供科学依据,同时也为研究机构研制新型抗菌药物奠定理论基础。本文采用国标法对沙门氏菌和大肠杆菌进行分离鉴定,用肉汤微量稀释法检测了12种抗菌药物的耐药性以及PCR法检测了耐药基因携带和转移等情况,同时还对沙门氏菌和对应样品分离的大肠杆菌的基因型、耐药表型和耐药基因进行比较。得出以下主要结论：1.从400份样品中共分离到大肠杆菌293株,分离率为73.3%,其中猪源136株,鸡源157株；从334份样品中共检出沙门氏菌38株,其中检出率最高的是辽宁某地病死猪内脏,为26.5%,其次是安徽屠宰场和北京农贸市场,分别为11.0%和7.0%。2.对38株沙门氏菌进行血清型检测,共得到8种类型,分别为Salmonella derby (44.7%)、Salmonella enteritidis (26.3%)、Salmonella rissen(10.5%)、Salmonella typhimurium (7.9%)、Salmonella litchfield(2.6%)、Salmonella lansing (2.6%)、Salmonella daytona (2.6%)、 Salmonella tennessee (2.6%)。使用PvuⅡ酶和EcoRⅠ酶分别对沙门氏菌和对应样品分离的大肠杆菌酶切分型,可以看出大肠杆菌的基因型明显多于沙门氏菌,而同种血清型的沙门氏菌存在多种高度同源的基因型,来源相同的不同血清型的沙门氏菌也会出现较高的基因同源性。3.本试验所分离的大肠杆菌和沙门氏菌对12种常用抗菌药物的耐药程度不同,猪源和鸡源大肠杆菌对某些药物的耐药性也存在差异,沙门氏菌和对应样品分离的大肠杆菌的耐药趋势相同。通过与欧盟EUCAST标准比较,发现我国大肠杆菌和沙门氏菌对耐药严重药物的MIC分布均有明显右移现象,说明我国细菌耐药现象比欧洲严重的多。总体来说,沙门氏菌和大肠杆菌对磺胺类、四环素类、氨基糖苷类和氯霉素类耐药比较严重,对p-内酰胺类和氟喹诺酮类较为敏感。多重耐药现象严重,80%以上的大肠杆菌和全部的沙门氏菌均为多重耐药菌株,以7重、8重和9重耐药菌株为主。4.对沙门氏菌和对应样品分离的大肠杆菌进行耐药基因的PCR检测,结果显示：沙门氏菌和大肠杆菌中均没有扩增到cmy、oxa、shv和tetM基因。β-内酰胺类耐药的20株沙门氏菌和19株大肠杆菌对tem基因的携带率分别为75.0%和68.4%；磺胺类耐药的30株沙门氏菌和32株大肠杆菌对sull、sul2、sul3基因的检出率分别为43.3%和31.1%、33.3%和28.1%、16.7%和18.7%；四环素类耐药的38株沙门氏菌和38株大肠杆菌对tetA基因的携带率分别为76.3%、81.6%；氨基糖苷类耐药的29株沙门氏菌和27株大肠杆菌对aadA、aac(6')-Ib-cr基因携带率分别为34.5%和40.7%、41.4%和33.3%；氯霉素类耐药的30株沙门氏菌和24株大肠杆菌对floR基因的携带率分别为83.3%和87.5%。5.DNA解旋酶和拓扑异构酶Ⅳ基因突变是革兰氏阴性菌对氟喹诺酮类抗菌药物产生耐药性的重要机制。15株沙门氏菌中有7株(46.7%)发生gyrA基因的Ser83Ala位点突变,2株(13.3%)为gyrA基因的Asp87Asn位点突变,4株(26.7%)同时存在Ser83Ala和Asp87Asn位点突变,2株(13.3%)同时出现gyrA基因的Ser83Ala突变和parC基因的Ser80Arg突变。17株大肠杆菌中有9株(52.9%)发生gyrA基因的Ser83Ala位点突变,5株(29.4%)为gyrA基因的Asp87Asn位点突变,3株(17.6%)同时存在Ser83Ala和Asp87Asn位点突变。6.通过floR基因的转化接合试验证明,质粒介导的耐药基因可在沙门氏菌和大肠杆菌之间转移,接合后的受体菌获得了供体沙门氏菌的耐药基因,表现出与供体菌相同的耐药表型。
【关键词】：沙门氏菌 大肠杆菌 血清型 耐药性 耐药基因
【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R446.5
【目录】：

• 摘要10-12
• Abstract12-14
• 第一章 前言14-23
• 1.1 沙门氏菌和大肠杆菌简介14
• 1.2 沙门氏菌病和大肠杆菌病的危害14-15
• 1.3 沙门氏菌血清型15-16
• 1.4 沙门氏菌和大肠杆菌的耐药现状16-17
• 1.4.1 沙门氏菌耐药现状17
• 1.4.2 大肠杆菌耐药现状17
• 1.5 沙门氏菌和大肠杆菌的耐药机制17-19
• 1.5.1 β-内酰胺类耐药机制17-18
• 1.5.2 氨基糖苷类耐药机制18
• 1.5.3 氟喹诺酮类耐药机制18-19
• 1.5.4 磺胺类耐药机制19
• 1.5.5 氯霉素类耐药机制19
• 1.5.6 四环素类耐药机制19
• 1.6 沙门氏菌和大肠杆菌的耐药基因19-20
• 1.6.1 沙门氏菌耐药基因20
• 1.6.2 大肠杆菌耐药基因20
• 1.7 沙门氏菌病和大肠杆菌病的预防措施20-21
• 1.8 研究意义与内容21-23
• 1.8.1 研究意义21-22
• 1.8.2 研究内容22-23
• 第二章 沙门氏菌和大肠杆菌的分离鉴定23-29
• 2.1 材料23
• 2.1.1 样品23
• 2.1.2 标准菌株23
• 2.1.3 培养基和试剂23
• 2.1.4 主要仪器23
• 2.2 方法23-26
• 2.2.1 样品采集23-24
• 2.2.2 大肠杆菌分离鉴定24-25
• 2.2.3 沙门氏菌分离鉴定25-26
• 2.2.4 菌株保存26
• 2.3 结果与分析26-28
• 2.3.1 大肠杆菌分离率26-27
• 2.3.2 沙门氏菌分离率27
• 2.3.3 生化鉴定及PCR鉴定结果27-28
• 2.4 讨论28-29
• 第三章 沙门氏菌和大肠杆菌血清型与基因型分析29-35
• 3.1 材料29
• 3.1.1 培养基和试剂29
• 3.1.2 主要仪器29
• 3.2 方法29-31
• 3.2.1 沙门氏菌血清型鉴定29-30
• 3.2.2 沙门氏菌和大肠杆菌基因型及进化树分析30-31
• 3.3 结果与分析31-32
• 3.3.1 沙门氏菌血清型鉴定结果31
• 3.3.2 沙门氏菌和大肠杆菌基因型及进化树结果31-32
• 3.4 讨论32-35
• 第四章 沙门氏菌和大肠杆菌的药敏分析35-42
• 4.1 材料35
• 4.1.1 培养基和试剂35
• 4.1.2 主要仪器35
• 4.2 方法35
• 4.3 结果与分析35-41
• 4.3.1 大肠杆菌的耐药表型35-37
• 4.3.2 沙门氏菌的耐药表型37-38
• 4.3.3 沙门氏菌和大肠杆菌的MIC分布38-40
• 4.3.4 多重耐药性40-41
• 4.4 讨论41-42
• 第五章 沙门氏菌和大肠杆菌耐药基因的研究42-55
• 5.1 材料42
• 5.1.1 主要试剂42
• 5.1.2 主要仪器42
• 5.2 方法42-46
• 5.2.1 耐药基因检测42-44
• 5.2.2 氟喹诺酮类基因突变分析44-46
• 5.2.3 转化接合试验46
• 5.3 结果与分析46-54
• 5.3.1 耐药基因携带率46-50
• 5.3.2 氟喹诺酮类基因突变结果50-53
• 5.3.3 转化接合结果53-54
• 5.4 讨论54-55
• 第六章 结论55-57
• 参考文献57-61
• 附录61-63
• 致谢63-64
• 攻读学位期间发表学术论文64

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 徐军;克丙申;齐法莲;陈英剑;罗南萍;;核酸序列测定技术分析HBV耐药基因与亚型鉴定[J];放射免疫学杂志;2007年02期

2 夏成静;陆学东;黄烈;刘键;杨来智;王琼;;MRFQ SYBR Green I-PCR结合融解曲线快速检测产ESBLs菌耐药基因[J];中国热带医学;2009年02期

3 张征;孙静娜;武艳;;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的红霉素耐药基因和杀白细胞基因的检测[J];广东医学;2009年07期

4 黄革;周晓红;蒋文玲;李运雄;荣卡彬;罗宪玲;赵莹;;多重PCR快速检测金黄色葡萄球菌中氨基糖苷类抗生素耐药基因及其临床应用[J];中国感染与化疗杂志;2009年04期

5 刘军军;张玮;王元兰;王星晨;魏建忠;孙裴;李郁;;沙门菌耐药基因多重PCR检测方法的建立[J];中国抗生素杂志;2013年11期

6 ;抗生素新耐药基因被捕获[J];中国临床康复;2003年09期

7 张燕;金先庆;赵珍珍;宿玉玺;;5种耐药基因在成人常见恶性肿瘤中的表达特点[J];重庆医科大学学报;2007年10期

8 ;耐药基因可从海洋细菌进入人体内细菌[J];医学研究杂志;2007年12期

9 胡庆丰;吕火祥;糜祖煌;沈蓓琼;;泛耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因研究[J];中华医院感染学杂志;2009年13期

10 陈茶;黄彬;蓝锴;庞雪云;糜祖煌;;多药耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺类耐药基因研究[J];中华医院感染学杂志;2009年15期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 孔繁德;陆承平;彭海滨;徐淑菲;陈琼;;多重PCR技术检测沙门菌两种四环素耐药基因[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年

2 石燕华;李昌崇;;肺炎链球菌对β-内酰胺类及大环内酯类抗生素耐药基因的研究进展[A];第六届江浙沪儿科学术会议暨儿科学基础与临床研究进展学术班论文汇编[C];2009年

3 金先庆;李映良;向丽;李长春;罗庆;梁绍燕;宿玉玺;郑改焕;;五种耐药基因在15种332例儿童恶性肿瘤组织中表达的特点及临床应用[A];中国抗癌协会第七届全国小儿肿瘤学术会议论文汇编[C];2007年

4 莫非;;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因及消毒剂耐药相关基因的检测[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年

5 王晶;韩丽霞;;耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药基因研究[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年

6 王凤玲;冯秀河;刘静;张竟宇;;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因及致病毒素基因的研究[A];第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议论文汇编[C];2009年

7 吕火祥;麇祖煌;胡庆丰;沈蓓琼;;泛耐药产酸克雷伯菌的耐药基因研究[A];2007年浙江省医学检验学学术年会论文汇编[C];2007年

8 雷永良;王晓光;陈秀英;;丽水市结核分枝杆菌分离株5种耐药基因突变特点分析[A];2011年浙江省医学会医学病毒学分会、医学微生物与免疫学分会学术年会论文汇编[C];2011年

9 李晨;;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性及耐药基因研究[A];中国医院协会第十四届全国医院感染管理学术年会资料汇编[C];2007年

10 胡红兵;熊宝华;夏维;王军;康世秀;;新生儿甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌血液感染分离株耐药基因研究[A];第六届全国抗菌药物临床药理学术会议论文集[C];2006年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 记者 徐志勇;深圳发现两个新型耐药基因[N];广东科技报;2007年

2 王其玲 李水根;抗生素新耐药基因被捕获[N];健康报;2003年

3 段军军　熊学莉;“探访”我国第一条肿瘤耐药基因[N];解放军报;2002年

4 本报记者 齐芳;人体肠道菌群耐药基因研究获新突破[N];光明日报;2013年

5 记者 鲍文娟邋通讯员 帅菲斐;深一医生全球率先发现两新耐药基因[N];广州日报;2007年

6 易运文;深圳医生全球首次发现耐药基因[N];光明日报;2007年

7 陈英云 乔蕤琳;我省专家首次确立控制耐药基因表达研究思路[N];黑龙江经济报;2010年

8 记者 陈枫;超级细菌蔓延?实为“耐药基因”![N];南方日报;2010年

9 记者 郭静 通讯员 郝黎 张丹娜;肺癌耐药基因找到了[N];广东科技报;2010年

10 张田勘;滥用抗生素让环境几度呻吟[N];中国绿色时报;2003年

中国博士学位论文全文数据库 前8条

1 李德喜;恶唑烷酮类耐药基因cfr和optrA在猪源MRSA和CoNS中流行及传播机制的研究[D];中国农业大学;2016年

2 鲁曦;低剂量抗生素刺激条件下耐药基因水平传播的机制研究[D];华南理工大学;2012年

3 鲁玉侠;食源微生物耐药基因水平传播抑制研究[D];华南理工大学;2010年

4 王晶;慢性阻塞性肺疾病急性加重多中心病原及耐药基因分子流行病学调查[D];中国人民解放军医学院;2014年

5 毛锦龙;Ⅱ-Ⅲ级星型细胞瘤体外诱导耐药细胞—干细胞基因及耐药基因研究[D];北京协和医学院;2010年

6 叶蕾;广州市水产养殖品中耐药共生菌分布及耐药基因传播机制的研究[D];华南理工大学;2012年

7 瞿婷婷;多重耐药肠球菌耐药基因筛选及传播机制研究[D];浙江大学;2007年

8 佟盼盼;鸡粪便菌耐药基因及其产ESBLs大肠杆菌耐药性的研究[D];吉林大学;2015年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 何红美;2014年石家庄地区围产期妇女B族链球菌的耐药性及其耐药基因的研究[D];河北医科大学;2015年

2 王佳Z，

本文编号：955732