吉首钾长石矿区土壤中固氮细菌的选育
发布时间：2020-12-25 23:22
我国作为农业生产大国,每年需消耗大量的工业氮肥,工业氮肥的使用会造成农产品品质下降、土壤板结、水体富营养化、生产成本增加等一系列问题,而微生物复合肥料能解决这些问题,所以,选育高效率的微生物固氮菌株对发展可持续绿色农业具有重要的意义。为了得到高效固氮菌,在吉首钾长石矿区采集土壤样品,采用纯培养方法从中分离、筛选得到具有较强固氮能力的细菌28株。对28株细菌进行形态学观察,生理生化鉴定,以及采用分子生物学手段进行16S r RNA序列分析,发现28株细菌别属于8个科,10个属,其中11株菌为根瘤菌属,6株菌为芽胞杆菌属,表明从钾长石矿区土壤中分离获得的固氮菌具有较好的多样性,根瘤菌为优势种群。分别从每个属中选取生长状况较好的菌株作为代表菌株,通过发酵和凯氏定氮法测定,发现各属代表菌株的固氮能力存在较大差异,根瘤菌和芽孢杆菌属代表菌株的固氮能力最强,其中根瘤菌代表菌株L13的96h发酵液氮含量达到10.71 mg/L,其次是芽孢杆菌代表菌株L10。为了能够更好的了解和掌握菌株L13和L10的生长特性,对菌株L13和L10生长的温度、p H、渗透压、不同碳源等因子对固氮能力的影响进行了比较。...
【文章来源】：吉首大学湖南省
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
各固氮菌发酵液中氮含量
2.3.3 固氮细菌的 16S rRNA 基于片段的 PCR 扩增琼脂糖电泳结果用16S rRNA基因的特异性引物从细菌基因组DNA中成功的扩增出大小约为1.6 kb的DNA片段，和预期的DNA片段大小一致。（如图2.2）图 2.2 细菌 16S rRNA 基因片段的 PCR 扩增Fig.2.2 PCR amplification of 16S rRNA gene fragments from bacterial strains2.3.4 固氮细菌的系统发育分析对28株固氮细菌的16S rDNA进行序列测定，将获得的序列通过BLAST程序与GenBank数据库中已报发道的16S rDNA序列进行相似性比对分析。结果表明，28株固氮细菌分别属于肠杆菌科、假单胞菌科、伯克菌科、叶杆菌科、布鲁菌科、根瘤菌科、芽胞杆菌科和类芽胞杆菌科8个科。分属伯克霍尔德属、肠杆菌属、剑菌属、芽胞杆菌属、叶杆菌属、Mitsuaria、假单胞属、类芽胞杆菌属、柠檬酸杆菌属等共10个属，表明钾长石矿区土壤中固氮菌种群具有多样性。其中11株（39.28%）在系统发育上与根瘤菌属（Rhizobium）关系密切，16S rDNA序列相似性高达98%~100%，为优势菌属。其次6株为芽胞杆菌属（Bacillus）。选取不同
3.3 结果与分析3.3.1 固氮细菌 L10 和 L13 的生长曲线两株固氮能力最高的L10、L13细菌的生长曲线（如图3.1）图 3.1 菌株 L10、L13 的生长曲线Fig 3.1 Growht curve of strain L10 of L13由图3.1可知，固氮菌株L10和L13的延滞期分别为0~12h和0~6h，对数生长期分别为12~72h和6~54h，稳定期分别为72~96h和54~96h。对比L10和L13我们可以发现两者的生长曲线存在差异，4个时期都不同，与L13相比，菌株L10的适应期稍长，而其对数期也较长，但是平稳期较短，较快的进入了衰亡期。表明相同情况下
【参考文献】：
期刊论文
[1]茶园土壤高活性固氮菌的筛选鉴定及接种效果初步研究[J]. 韩晓阳,李智,张丽霞,黄晓琴. 茶叶科学. 2014(05)
[2]间作大豆对甘蔗根际土壤细菌及固氮菌多样性的影响[J]. 彭东海,杨建波,李健,邢永秀,覃刘东,杨丽涛,李杨瑞. 植物生态学报. 2014(09)
[3]不同农作物根际自生固氮菌分离及固氮酶活性[J]. 李文凤,房翠翠,霍英芝. 江苏农业科学. 2014(07)
[4]四川核桃主产区根际土壤固氮细菌筛选及多样性研究[J]. 李姝江,朱天辉,崔晓亮. 土壤通报. 2014(01)
[5]重金属污染对土壤酶活性的影响[J]. 费杨,王晓丽. 安徽农业科学. 2014(01)
[6]自生固氮菌活化土壤无机磷研究[J]. 张亮,杨宇虹,李倩,吴叶宽,黄建国. 生态学报. 2013(07)
[7]一株自生固氮细菌的分离和鉴定[J]. 吴翔,甘炳成,贾定洪,蒋元继,唐杰,周洁. 西南农业学报. 2013(01)
[8]杉木根际固氮菌筛选及其溶磷性与分泌IAA特性研究[J]. 周德明,李蓉. 四川师范大学学报(自然科学版). 2012(04)
[9]接种自生固氮菌对玉米根际土壤酶活性和细菌群落功能多样性的影响[J]. 陈胜男,谷洁,付青霞,孙薇,钱勋,高华,秦清军. 植物营养与肥料学报. 2012(02)
[10]圆褐固氮菌、巨大芽孢杆菌复合菌肥的制作及应用效果[J]. 姜明. 安徽农业科学. 2010(28)
博士论文
[1]微生物肥料及其微生态效应研究[D]. 郭春景.东北林业大学 2004
硕士论文
[1]水稻根际促生菌的分离鉴定及其对水稻作用效果的研究[D]. 胡雪.华中农业大学 2010
[2]微生物肥料作用机理的初步研究[D]. 刘健.中国农业科学院 2000
本文编号：2938577
【文章来源】：吉首大学湖南省
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
各固氮菌发酵液中氮含量
2.3.3 固氮细菌的 16S rRNA 基于片段的 PCR 扩增琼脂糖电泳结果用16S rRNA基因的特异性引物从细菌基因组DNA中成功的扩增出大小约为1.6 kb的DNA片段，和预期的DNA片段大小一致。（如图2.2）图 2.2 细菌 16S rRNA 基因片段的 PCR 扩增Fig.2.2 PCR amplification of 16S rRNA gene fragments from bacterial strains2.3.4 固氮细菌的系统发育分析对28株固氮细菌的16S rDNA进行序列测定，将获得的序列通过BLAST程序与GenBank数据库中已报发道的16S rDNA序列进行相似性比对分析。结果表明，28株固氮细菌分别属于肠杆菌科、假单胞菌科、伯克菌科、叶杆菌科、布鲁菌科、根瘤菌科、芽胞杆菌科和类芽胞杆菌科8个科。分属伯克霍尔德属、肠杆菌属、剑菌属、芽胞杆菌属、叶杆菌属、Mitsuaria、假单胞属、类芽胞杆菌属、柠檬酸杆菌属等共10个属，表明钾长石矿区土壤中固氮菌种群具有多样性。其中11株（39.28%）在系统发育上与根瘤菌属（Rhizobium）关系密切，16S rDNA序列相似性高达98%~100%，为优势菌属。其次6株为芽胞杆菌属（Bacillus）。选取不同
3.3 结果与分析3.3.1 固氮细菌 L10 和 L13 的生长曲线两株固氮能力最高的L10、L13细菌的生长曲线（如图3.1）图 3.1 菌株 L10、L13 的生长曲线Fig 3.1 Growht curve of strain L10 of L13由图3.1可知，固氮菌株L10和L13的延滞期分别为0~12h和0~6h，对数生长期分别为12~72h和6~54h，稳定期分别为72~96h和54~96h。对比L10和L13我们可以发现两者的生长曲线存在差异，4个时期都不同，与L13相比，菌株L10的适应期稍长，而其对数期也较长，但是平稳期较短，较快的进入了衰亡期。表明相同情况下
【参考文献】：
期刊论文
[1]茶园土壤高活性固氮菌的筛选鉴定及接种效果初步研究[J]. 韩晓阳,李智,张丽霞,黄晓琴. 茶叶科学. 2014(05)
[2]间作大豆对甘蔗根际土壤细菌及固氮菌多样性的影响[J]. 彭东海,杨建波,李健,邢永秀,覃刘东,杨丽涛,李杨瑞. 植物生态学报. 2014(09)
[3]不同农作物根际自生固氮菌分离及固氮酶活性[J]. 李文凤,房翠翠,霍英芝. 江苏农业科学. 2014(07)
[4]四川核桃主产区根际土壤固氮细菌筛选及多样性研究[J]. 李姝江,朱天辉,崔晓亮. 土壤通报. 2014(01)
[5]重金属污染对土壤酶活性的影响[J]. 费杨,王晓丽. 安徽农业科学. 2014(01)
[6]自生固氮菌活化土壤无机磷研究[J]. 张亮,杨宇虹,李倩,吴叶宽,黄建国. 生态学报. 2013(07)
[7]一株自生固氮细菌的分离和鉴定[J]. 吴翔,甘炳成,贾定洪,蒋元继,唐杰,周洁. 西南农业学报. 2013(01)
[8]杉木根际固氮菌筛选及其溶磷性与分泌IAA特性研究[J]. 周德明,李蓉. 四川师范大学学报(自然科学版). 2012(04)
[9]接种自生固氮菌对玉米根际土壤酶活性和细菌群落功能多样性的影响[J]. 陈胜男,谷洁,付青霞,孙薇,钱勋,高华,秦清军. 植物营养与肥料学报. 2012(02)
[10]圆褐固氮菌、巨大芽孢杆菌复合菌肥的制作及应用效果[J]. 姜明. 安徽农业科学. 2010(28)
博士论文
[1]微生物肥料及其微生态效应研究[D]. 郭春景.东北林业大学 2004
硕士论文
[1]水稻根际促生菌的分离鉴定及其对水稻作用效果的研究[D]. 胡雪.华中农业大学 2010
[2]微生物肥料作用机理的初步研究[D]. 刘健.中国农业科学院 2000
本文编号：2938577
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