土壤微生物宏基因组文库中新型β-葡萄糖苷酶的挖掘与鉴定
发布时间：2021-06-14 19:35
近几年来新能源的开发一直是社会及科研学者们面临的主要问题之一,化石能源的日渐枯竭使得新能源的开发迫在眉睫。纤维素是地球上数量丰富的可再生资源之一,分解纤维素生成乙醇等生物能源也已在工业上得到应用。但目前能实际应用的酶数量少且酶学特性优异的酶不多,寻找并获得具有高稳定性、耐高温且活力高的新型降解纤维素的酶类具有重要的应用价值。而β-葡萄糖苷酶作为纤维素水解过程中最后一步,作用于寡糖链催化生成葡萄糖,是纤维素水解的限速步骤,β-葡萄糖苷酶目前已经被应用在食品、工业、医药以及农业等领域,其各方面的性能使其成为工业应用的潜力酶。依靠传统实验室培养方法,β-葡萄糖苷酶基因是通过筛选微生物纯培养菌株来获得,这种方法有其优势,但弊端也愈发明显。而生物信息学技术的兴起,利用基因组挖掘技术等,使得很多新型的功能基因酶呈爆发式的被挖掘出来。宏基因组学概念的普及,意味着基因组学的研究已开拓出新的领域。宏基因组即某一环境中的微生物菌落的所有基因组的组合。这里面包含了大量的不可培养微生物的遗传资源,为发现具有独特性质的新型功能酶类打开了 一个新的窗口。利用功能驱动的筛选方法可以高效、直观的筛选宏基因组文库中的功...
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
一lp一葡萄糖昔酶活性克隆筛选
于搪基水解酶第三家族（ＧＨＦ３）的。进而利用生物信息学Ｉ：具软件，从数据库ＮＣＢＩ??中搜索Ｐ－葡萄糖苷酶家族蛋白序列，利用ＭＥＧＡ５．１软件将ＪＷ５Ｇ３的蛋白序列与发现??了的其他Ｐ－葡萄糖苷酶家族蛋白序列一起构迚进化树（图２－３），从进化树结果得知，??｝Ｗ５ＧＪ确实属于第三家族，通过比对分析，ｙＡＷＧＪ存在一个Ｆｎ３－ｌｉｋｅ模块，这是发??现的糖苷水解酶第三家族的酶结构中所具有的（图２－４）。同时利用ＣｌｕＳｔａｌＸ２软件对??这些序列进行多序列比对，发现含有糖基水解酶第三家族典型的ＳＤＷ保＇、？氣??基酸序列，有保守活性位点Ａｓｐ残基（图２－５）。??１７??
图２－５?ｒ＿ＧＪ的多序列比对，其中星号为保守区域??Ｆｉｇ．?２－５?Ｍｕｌｔｉｐｌｅ－ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ?ｏｆ?ｏｆ?ＹＮＢＧ３，?Ｒｅｇｉｏｎｓ?ｏｆ?ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ?ｄｏｍａｉｎｓ?ａｒｅ?ｓｈｏｗｎ?ａｓ?ａｓｔｅｒｉｓｋｓ??１８??
【参考文献】：
期刊论文
[1]绿色木霉耐热β-葡萄糖苷酶分离纯化及酶学性质研究[J]. 彭利沙,张永祥,闫青,王翔,李军. 生物技术通报. 2016(09)
[2]高产β-葡萄糖苷酶工程菌株的构建及其在2,6-二甲氧基对苯醌发酵制备中的应用[J]. 易晓男,任清华,程炜,孙姜,齐斌,王立梅. 食品科学. 2017(08)
[3]一株产β-葡萄糖苷酶菌株的筛选及酶学性质研究[J]. 刘德海,郝益民,岳丹丹,马焕,权淑静,丁冉冉,陈国参. 中国酿造. 2013(06)
[4]β-葡萄糖苷酶的研究及应用进展[J]. 潘利华,罗建平. 食品科学. 2006(12)
[5]Purification and Partial Characterization of β-Glucosidase from Fresh Leaves of Tea Plants（Camellia sinensis（L.）O.Kuntze）[J]. Ye-Yun LI Chang-Jun JIANG Xiao-Chun WAN Zheng-Zhu ZHANG Da-Xiang LI Key Lahoratory of Tea Biochemistry and Biotechnology. Ministry of Education. Anhui Agricultural University, Hefei 230036, China. Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2005(06)
[6]一株嗜热毛壳菌β-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性[J]. 楚春雪,李多川,郭润芳. 菌物学报. 2004(03)
[7]136例新生儿坏死性小肠结肠炎临床分析[J]. 陈盛,何念海. 重庆医学. 2004(04)
[8]利用黑曲霉β-葡萄糖苷酶改善葡萄酒的风味[J]. 陈守文,陈九武,赵山. 中国酿造. 1999(03)
[9]茶叶香气释放机理研究──龙井茶炒制过程中β-葡萄糖苷酶和醇系香气的关系[J]. 屠幼英,童启庆,骆耀平,董尚胜,须海荣. 茶叶. 1999(01)
[10]云南土壤放线菌生态分布的研究[J]. 徐丽华,杨宇容,姜成林. 微生物学报. 1996(03)
本文编号：3230197
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
一lp一葡萄糖昔酶活性克隆筛选
于搪基水解酶第三家族（ＧＨＦ３）的。进而利用生物信息学Ｉ：具软件，从数据库ＮＣＢＩ??中搜索Ｐ－葡萄糖苷酶家族蛋白序列，利用ＭＥＧＡ５．１软件将ＪＷ５Ｇ３的蛋白序列与发现??了的其他Ｐ－葡萄糖苷酶家族蛋白序列一起构迚进化树（图２－３），从进化树结果得知，??｝Ｗ５ＧＪ确实属于第三家族，通过比对分析，ｙＡＷＧＪ存在一个Ｆｎ３－ｌｉｋｅ模块，这是发??现的糖苷水解酶第三家族的酶结构中所具有的（图２－４）。同时利用ＣｌｕＳｔａｌＸ２软件对??这些序列进行多序列比对，发现含有糖基水解酶第三家族典型的ＳＤＷ保＇、？氣??基酸序列，有保守活性位点Ａｓｐ残基（图２－５）。??１７??
图２－５?ｒ＿ＧＪ的多序列比对，其中星号为保守区域??Ｆｉｇ．?２－５?Ｍｕｌｔｉｐｌｅ－ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ?ｏｆ?ｏｆ?ＹＮＢＧ３，?Ｒｅｇｉｏｎｓ?ｏｆ?ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ?ｄｏｍａｉｎｓ?ａｒｅ?ｓｈｏｗｎ?ａｓ?ａｓｔｅｒｉｓｋｓ??１８??
【参考文献】：
期刊论文
[1]绿色木霉耐热β-葡萄糖苷酶分离纯化及酶学性质研究[J]. 彭利沙,张永祥,闫青,王翔,李军. 生物技术通报. 2016(09)
[2]高产β-葡萄糖苷酶工程菌株的构建及其在2,6-二甲氧基对苯醌发酵制备中的应用[J]. 易晓男,任清华,程炜,孙姜,齐斌,王立梅. 食品科学. 2017(08)
[3]一株产β-葡萄糖苷酶菌株的筛选及酶学性质研究[J]. 刘德海,郝益民,岳丹丹,马焕,权淑静,丁冉冉,陈国参. 中国酿造. 2013(06)
[4]β-葡萄糖苷酶的研究及应用进展[J]. 潘利华,罗建平. 食品科学. 2006(12)
[5]Purification and Partial Characterization of β-Glucosidase from Fresh Leaves of Tea Plants（Camellia sinensis（L.）O.Kuntze）[J]. Ye-Yun LI Chang-Jun JIANG Xiao-Chun WAN Zheng-Zhu ZHANG Da-Xiang LI Key Lahoratory of Tea Biochemistry and Biotechnology. Ministry of Education. Anhui Agricultural University, Hefei 230036, China. Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2005(06)
[6]一株嗜热毛壳菌β-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性[J]. 楚春雪,李多川,郭润芳. 菌物学报. 2004(03)
[7]136例新生儿坏死性小肠结肠炎临床分析[J]. 陈盛,何念海. 重庆医学. 2004(04)
[8]利用黑曲霉β-葡萄糖苷酶改善葡萄酒的风味[J]. 陈守文,陈九武,赵山. 中国酿造. 1999(03)
[9]茶叶香气释放机理研究──龙井茶炒制过程中β-葡萄糖苷酶和醇系香气的关系[J]. 屠幼英,童启庆,骆耀平,董尚胜,须海荣. 茶叶. 1999(01)
[10]云南土壤放线菌生态分布的研究[J]. 徐丽华,杨宇容,姜成林. 微生物学报. 1996(03)
本文编号：3230197
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