Wheatwin1蛋白的表达及对黄曲霉生长和产毒的抑制作用研究
发布时间：2022-07-07 09:03
储粮危害真菌可造成粮食在储藏过程中的霉变甚至产生有毒代谢产物。当条件适宜时,以灰绿曲霉为主的干生性霉菌会在粮堆内开始生长,灰绿曲霉的生长代谢会进一步为其它霉菌如黄曲霉的生长创造出有利的条件。黄曲霉是粮食储藏过程中的主要危害真菌,其生长代谢会产生具有致癌致突变能力的黄曲霉毒素,黄曲霉毒素主要有B1、B2、G1、G2四种类型,一般在食品和粮食储藏中出现的都是黄曲霉毒素B1。本课题研究在提取了扬15小麦的全基因组后,用PCR技术对其属于病程相关蛋白第四家族（PR4）的wheatwin1基因进行了扩增并获得了长度为378bp的成熟编码序列。将wheatwin1基因与质粒pGEX4T-3分别用NotI酶和EcoRI酶进行双酶切并用T4DNA连接酶连接后转入大肠杆菌感受态细胞DH5α中进行克隆,获得了重组质粒T3-W1,然后将T3-W1转入大肠杆菌感受态细胞Origami B中进行表达并得到了以包涵体蛋白形式存在的融合蛋白GST-W1。将包涵体蛋白复性后用谷胱甘肽琼脂糖4B凝胶对GST-W1进行纯化,继续用Thrombin酶切后获得了wheatwin1。对wheatwin1的生物活性研究表明其具有...
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
1 前言
1.1 小麦储藏方法
1.1.1 高温密闭法
1.1.2 低温密闭法
1.1.3 缺氧贮藏法
1.1.4 化学药剂法
1.1.5 臭氧法
1.1.6 电子束照射法
1.2 小麦储藏中的真菌污染
1.3 黄曲霉的危害
1.4 黄曲霉毒素的危害
1.5 黄曲霉毒素的防治
1.6 病程相关蛋白
1.7 wheatwin1的介绍
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 小麦品种、菌种和质粒
2.1.2 实验中的主要仪器设备
2.1.3 实验中的主要试剂
2.2 实验方法
2.2.1 Wheatwin1基因的获得
2.2.2 重组质粒的构建
2.2.3 T3-W1的表达
2.2.4 复性纯化与酶活分析
2.2.5 W1对黄曲霉生长及产毒的影响
3 结果与讨论
3.1 Wheatwin1基因的获得
3.1.1 小麦基因组DNA的提取
3.1.2 Wheatwin1基因的PCR扩增与回收
3.1.3 讨论
3.2 重组质粒的构建
3.3 T3-W1的表达
3.3.1 T3-W1的表达
3.3.2 讨论
3.4 复性纯化与酶活分析
3.4.1 GST-W1的复性与W1的纯化
3.4.2 W1的RNA降解活性分析
3.4.3 讨论
3.5 W1对黄曲霉生长及产毒的影响
3.5.1 W1对黄曲霉孢子萌发和菌丝生长的影响
3.5.2 W1的荧光定位
3.5.3 W1对黄曲霉产毒的影响
3.5.4 W1对黄曲霉产毒关键基因的影响
3.5.5 讨论
4 结论
参考文献
致谢
个人简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄曲霉毒素检测技术的研究进展[J]. 孙冰洁,朱伟,张波. 热带医学杂志. 2017(09)
[2]基于监测过氧化氢酶活性对储藏玉米AFB1污染的早期预警[J]. 张耀磊,翟焕趁,张帅兵,蔡静平. 食品与机械. 2017(01)
[3]不同硬度红皮小麦的储藏霉变差异研究[J]. 李云霄,张帅兵,翟焕趁,蔡静平,胡元森. 河南工业大学学报(自然科学版). 2016(02)
[4]信号分子与叶锈菌诱导下小麦病程相关蛋白1基因的表达分析[J]. 栗小英,刘景坤,张艳俊,王海燕,刘大群. 江苏农业科学. 2015(09)
[5]植物病程相关蛋白的研究进展[J]. 李连华. 福建农业. 2015(02)
[6]气体分析法监测粮食储藏安全性的研究与应用进展[J]. 张燕燕,蔡静平,蒋澎,黄淑霞. 中国粮油学报. 2014(10)
[7]小麦的特点及贮藏方法[J]. 张果果. 农业开发与装备. 2014(02)
[8]茎瘤芥PR4基因的克隆与表达分析[J]. 裴晓兔,王中康,罗远莉,殷幼平. 应用与环境生物学报. 2013(06)
[9]病程相关蛋白质在水稻与白叶枯病菌互作过程中的表达[J]. 关明俐,窦世娟,李雪姣,贾霖,史佳楠,曾祥然,贾盟,郭美岑,刘丽娟,李莉云,刘国振. 中国农业科学. 2013(20)
[10]黄曲霉毒素脱除方法研究进展[J]. 肖军霞,张岩,黄国清,姜文利,王世清. 食品安全质量检测学报. 2012(05)
博士论文
[1]水稻编码病程相关蛋白PR-4和葡聚糖酶基因的克隆与鉴定[D]. 朱廷恒.浙江大学 2003
硕士论文
[1]PR1、PR2和PR5基因参与小麦TcLr35成株抗叶锈病反应的表达分析[D]. 栗小英.河北农业大学 2015
[2]三种植物精油抑制玉米中黄曲霉生长及产毒研究[D]. 梁丹丹.中国农业科学院 2015
[3]2个小麦PR蛋白基因的抗叶锈病相关性分析[D]. 高琳.河北农业大学 2014
本文编号：3656135
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
1 前言
1.1 小麦储藏方法
1.1.1 高温密闭法
1.1.2 低温密闭法
1.1.3 缺氧贮藏法
1.1.4 化学药剂法
1.1.5 臭氧法
1.1.6 电子束照射法
1.2 小麦储藏中的真菌污染
1.3 黄曲霉的危害
1.4 黄曲霉毒素的危害
1.5 黄曲霉毒素的防治
1.6 病程相关蛋白
1.7 wheatwin1的介绍
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 小麦品种、菌种和质粒
2.1.2 实验中的主要仪器设备
2.1.3 实验中的主要试剂
2.2 实验方法
2.2.1 Wheatwin1基因的获得
2.2.2 重组质粒的构建
2.2.3 T3-W1的表达
2.2.4 复性纯化与酶活分析
2.2.5 W1对黄曲霉生长及产毒的影响
3 结果与讨论
3.1 Wheatwin1基因的获得
3.1.1 小麦基因组DNA的提取
3.1.2 Wheatwin1基因的PCR扩增与回收
3.1.3 讨论
3.2 重组质粒的构建
3.3 T3-W1的表达
3.3.1 T3-W1的表达
3.3.2 讨论
3.4 复性纯化与酶活分析
3.4.1 GST-W1的复性与W1的纯化
3.4.2 W1的RNA降解活性分析
3.4.3 讨论
3.5 W1对黄曲霉生长及产毒的影响
3.5.1 W1对黄曲霉孢子萌发和菌丝生长的影响
3.5.2 W1的荧光定位
3.5.3 W1对黄曲霉产毒的影响
3.5.4 W1对黄曲霉产毒关键基因的影响
3.5.5 讨论
4 结论
参考文献
致谢
个人简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄曲霉毒素检测技术的研究进展[J]. 孙冰洁,朱伟,张波. 热带医学杂志. 2017(09)
[2]基于监测过氧化氢酶活性对储藏玉米AFB1污染的早期预警[J]. 张耀磊,翟焕趁,张帅兵,蔡静平. 食品与机械. 2017(01)
[3]不同硬度红皮小麦的储藏霉变差异研究[J]. 李云霄,张帅兵,翟焕趁,蔡静平,胡元森. 河南工业大学学报(自然科学版). 2016(02)
[4]信号分子与叶锈菌诱导下小麦病程相关蛋白1基因的表达分析[J]. 栗小英,刘景坤,张艳俊,王海燕,刘大群. 江苏农业科学. 2015(09)
[5]植物病程相关蛋白的研究进展[J]. 李连华. 福建农业. 2015(02)
[6]气体分析法监测粮食储藏安全性的研究与应用进展[J]. 张燕燕,蔡静平,蒋澎,黄淑霞. 中国粮油学报. 2014(10)
[7]小麦的特点及贮藏方法[J]. 张果果. 农业开发与装备. 2014(02)
[8]茎瘤芥PR4基因的克隆与表达分析[J]. 裴晓兔,王中康,罗远莉,殷幼平. 应用与环境生物学报. 2013(06)
[9]病程相关蛋白质在水稻与白叶枯病菌互作过程中的表达[J]. 关明俐,窦世娟,李雪姣,贾霖,史佳楠,曾祥然,贾盟,郭美岑,刘丽娟,李莉云,刘国振. 中国农业科学. 2013(20)
[10]黄曲霉毒素脱除方法研究进展[J]. 肖军霞,张岩,黄国清,姜文利,王世清. 食品安全质量检测学报. 2012(05)
博士论文
[1]水稻编码病程相关蛋白PR-4和葡聚糖酶基因的克隆与鉴定[D]. 朱廷恒.浙江大学 2003
硕士论文
[1]PR1、PR2和PR5基因参与小麦TcLr35成株抗叶锈病反应的表达分析[D]. 栗小英.河北农业大学 2015
[2]三种植物精油抑制玉米中黄曲霉生长及产毒研究[D]. 梁丹丹.中国农业科学院 2015
[3]2个小麦PR蛋白基因的抗叶锈病相关性分析[D]. 高琳.河北农业大学 2014
本文编号：3656135
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