基于脲酶的两种检测赭曲霉毒素A的高灵敏酶联免疫吸附法
发布时间：2023-07-25 03:45
赭曲霉毒素(Ochratoxin)是由青霉菌属(Penicillium)和曲霉菌属的霉菌产生的有毒的次级代谢产物,在全球范围内严重威胁着农产品的安全。其中赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)因毒性最大、农作物污染程度最深、分布最广、与人类健康关系最密切而广为人知。传统的检测手段,如基于仪器建立的高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)、液相质谱联用法(Liquid Chromatography-electrospray Mass Spectrometry,LC-MS)因存在仪器成本高、操作流程繁琐、需专业受训人员等而限制其推广应用。传统的酶联免疫吸附测定法(Enzyme–linked Immunosorbent Assay,ELISA)是经典的检测方法,具有操作简便,成本低廉,能满足高通量筛查的优点,但也因检测灵敏度低,无法实现对痕量物质定量检测;且其显色物质四甲基联苯胺(tetramethylbenzidine,TMB),因其显色单一,裸眼辨识度差,无法实现定性检测。因此,能实现高灵敏和裸眼判读的新型ELIS...
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
缩略语表
第一章 前言
1.1 赭曲霉毒素的研究进展
1.1.1 赭曲霉毒素的来源及毒性
1.1.2 赭曲霉毒素A的理化性质
1.1.3 赭曲霉毒素A临床症状及机理
1.1.4 OTA的卫生限量标准
1.1.5 OTA的检测方法
1.1.5.1 高效液相色谱法
1.1.5.2 薄层色谱法
1.1.5.3 胶体金免疫层析技术
1.1.5.4 酶联免疫吸附测定法
1.2 脲酶理化性质概述
1.3 基于脲酶介导的pH响应ELISA的概述
1.3.1 pH响应ELISA技术原理
1.3.2 pH响应ELISA技术特点及应用
1.4 基于脲酶介导的等离子共振ELISA(p–ELISA)的概述
1.4.1 表面等离子共振
1.4.2 常见调控的金纳米粒子SPR的方法
1.4.2.1 生长法
1.4.2.2 聚集法
1.4.2.3 刻蚀法
1.4.2.4 金属化法
1.4.3 pELISA检测方法的特点和应用
第二章 基于脲酶介导pH响应ELISA的建立及应用
2.1 前言
2.2 材料与仪器
2.2.1 试剂及材料
2.2.2 仪器设备
2.2.3 试剂的配制
2.3 实验方法
2.3.1 pH响应ELISA可行性实验的验证
2.3.2 Urease与OTA偶联物的合成、表征及BCP的配制
2.3.2.1 赭曲霉毒素人工抗原合成
2.3.2.2 溴甲酚紫显色液的配制
2.3.3 pH响应ELISA的操作步骤
2.3.4 pH响应ELISA实验条件的优化
2.3.4.1 棋盘法优化酶标抗原和抗体的用量
2.3.4.2 免疫学反应中pH值的优化
2.3.4.3 免疫学反应甲醇浓度的优化
2.3.4.4 底物浓度的优化
2.3.4.5 底物反应温度的优化
2.3.4.6 酶催化反应时间的优化
2.3.5 pH响应ELISA检测性能分析
2.3.5.1 实验的灵敏度和特异性的评价
2.3.5.2 与传统的HRP-ELISA方法学的比较
2.3.5.3 pH响应ELISA实际样本检测性能评价
2.4 结果与讨论
2.4.1 概念验证
2.4.2 Urease与OTA偶联物的表征
2.4.3 优化pH响应ELISA参数
2.4.3.1 棋盘法优化抗原、抗体的用量
2.4.3.2 优化影响免疫学反应的其他条件
2.4.4 pH响应ELISA检测性能分析
2.4.4.1 实验的灵敏度和特异性评价
2.4.4.2 与传统的HRP-ELISA方法学的比较
2.4.4.3 pH响应ELISA准确度与精密度评价
2.5 本章小结
第三章 基于脲酶介导pELISA的建立及应用
3.1 前言
3.2 材料与仪器
3.2.1 试剂及材料
3.2.2 仪器设备
3.3 实验方法
3.3.1 pELISA可行性验证实验
3.3.2 OTA与Urease偶联物的制备及表征
3.3.3 金纳米花的合成及表征
3.3.4 pELISA的操作步骤
3.3.5 实验相关参数的优化
3.3.5.1 棋盘法优化酶标抗原和抗体的用量
3.3.5.2 免疫学反应其他条件的优化
3.3.6 pELISA检测性能分析
3.3.6.1 实验的灵敏度的评价
3.3.6.2 与传统的HRP-ELISA方法学的比较
3.3.6.3 实验特异性评价
3.3.6.4 pELISA实际样本检测性能评价
3.4 结果与讨论
3.4.1 实验可行性验证
3.4.2 Urease@OTA偶联物的制备及表征
3.4.3 pELISA中各参数的优化
3.4.3.1 棋盘法优化酶标抗原、抗体的用量
3.4.3.2 免疫学反应其他条件的优化
3.4.4 pELISA检测性能分析
3.4.4.1 常规HRP-ELISA与pELISA的灵敏度评价
3.4.4.2 pELISA的特异性评价
3.4.4.3 pELISA实际样本检测性能评价
3.5 本章小结
第四章 结论与展望
4.1 结论
4.1.1 pH响应ELISA的建立以及应用
4.1.2 pELISA的建立以及应用
4.2 展望
致谢
参考文献
附录1 试剂材料
附录2 仪器设备
个人介绍
攻读学位期间的研究成果
彩图
本文编号：3837098
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
缩略语表
第一章 前言
1.1 赭曲霉毒素的研究进展
1.1.1 赭曲霉毒素的来源及毒性
1.1.2 赭曲霉毒素A的理化性质
1.1.3 赭曲霉毒素A临床症状及机理
1.1.4 OTA的卫生限量标准
1.1.5 OTA的检测方法
1.1.5.1 高效液相色谱法
1.1.5.2 薄层色谱法
1.1.5.3 胶体金免疫层析技术
1.1.5.4 酶联免疫吸附测定法
1.2 脲酶理化性质概述
1.3 基于脲酶介导的pH响应ELISA的概述
1.3.1 pH响应ELISA技术原理
1.3.2 pH响应ELISA技术特点及应用
1.4 基于脲酶介导的等离子共振ELISA(p–ELISA)的概述
1.4.1 表面等离子共振
1.4.2 常见调控的金纳米粒子SPR的方法
1.4.2.1 生长法
1.4.2.2 聚集法
1.4.2.3 刻蚀法
1.4.2.4 金属化法
1.4.3 pELISA检测方法的特点和应用
第二章 基于脲酶介导pH响应ELISA的建立及应用
2.1 前言
2.2 材料与仪器
2.2.1 试剂及材料
2.2.2 仪器设备
2.2.3 试剂的配制
2.3 实验方法
2.3.1 pH响应ELISA可行性实验的验证
2.3.2 Urease与OTA偶联物的合成、表征及BCP的配制
2.3.2.1 赭曲霉毒素人工抗原合成
2.3.2.2 溴甲酚紫显色液的配制
2.3.3 pH响应ELISA的操作步骤
2.3.4 pH响应ELISA实验条件的优化
2.3.4.1 棋盘法优化酶标抗原和抗体的用量
2.3.4.2 免疫学反应中pH值的优化
2.3.4.3 免疫学反应甲醇浓度的优化
2.3.4.4 底物浓度的优化
2.3.4.5 底物反应温度的优化
2.3.4.6 酶催化反应时间的优化
2.3.5 pH响应ELISA检测性能分析
2.3.5.1 实验的灵敏度和特异性的评价
2.3.5.2 与传统的HRP-ELISA方法学的比较
2.3.5.3 pH响应ELISA实际样本检测性能评价
2.4 结果与讨论
2.4.1 概念验证
2.4.2 Urease与OTA偶联物的表征
2.4.3 优化pH响应ELISA参数
2.4.3.1 棋盘法优化抗原、抗体的用量
2.4.3.2 优化影响免疫学反应的其他条件
2.4.4 pH响应ELISA检测性能分析
2.4.4.1 实验的灵敏度和特异性评价
2.4.4.2 与传统的HRP-ELISA方法学的比较
2.4.4.3 pH响应ELISA准确度与精密度评价
2.5 本章小结
第三章 基于脲酶介导pELISA的建立及应用
3.1 前言
3.2 材料与仪器
3.2.1 试剂及材料
3.2.2 仪器设备
3.3 实验方法
3.3.1 pELISA可行性验证实验
3.3.2 OTA与Urease偶联物的制备及表征
3.3.3 金纳米花的合成及表征
3.3.4 pELISA的操作步骤
3.3.5 实验相关参数的优化
3.3.5.1 棋盘法优化酶标抗原和抗体的用量
3.3.5.2 免疫学反应其他条件的优化
3.3.6 pELISA检测性能分析
3.3.6.1 实验的灵敏度的评价
3.3.6.2 与传统的HRP-ELISA方法学的比较
3.3.6.3 实验特异性评价
3.3.6.4 pELISA实际样本检测性能评价
3.4 结果与讨论
3.4.1 实验可行性验证
3.4.2 Urease@OTA偶联物的制备及表征
3.4.3 pELISA中各参数的优化
3.4.3.1 棋盘法优化酶标抗原、抗体的用量
3.4.3.2 免疫学反应其他条件的优化
3.4.4 pELISA检测性能分析
3.4.4.1 常规HRP-ELISA与pELISA的灵敏度评价
3.4.4.2 pELISA的特异性评价
3.4.4.3 pELISA实际样本检测性能评价
3.5 本章小结
第四章 结论与展望
4.1 结论
4.1.1 pH响应ELISA的建立以及应用
4.1.2 pELISA的建立以及应用
4.2 展望
致谢
参考文献
附录1 试剂材料
附录2 仪器设备
个人介绍
攻读学位期间的研究成果
彩图
本文编号：3837098
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