Latrophilin通过调控CSP7,OBPC01,CYP4BN1和CYP6BQ11参与赤拟谷盗的杀虫剂抵抗性
发布时间：2024-03-08 18:05
Latrophilin(LPH)属于G蛋白偶联受体(GPCR)家族中一个独特的分支,并且被称之为粘附性的GPCR,其首次鉴定作为黑寡妇蜘蛛毒液中有效成分神经毒素(α-latrotoxin,a-LTX)的潜在靶标。作为一种经典的GPCR,LPH在不同生物(人、小鼠和果蝇)体内参与调控多动症、躁郁症以及精神分裂症等多种精神疾病的发生。我们实验室最近研究显示在赤拟谷盗中通过RNAi技术对Tclph基因进行干扰不仅导致了部分幼虫形态缺陷,并且伴随生殖能力显著降低,这与其他小组的研究结果相一致。有趣地是,我们还首次发现在赤拟谷盗幼虫阶段敲减Tclph增加了其对抗胆碱杀虫剂(敌敌畏和克百威)的敏感性,暗示Tclph参与了杀虫剂的抵抗过程。然而,关于Tclph的下游分子调节机制目前还不清楚。因此,我们进一步利用转录组测序(RNA-seq)技术筛选Tclph下游抗性相关基因以阐明其信号转导通路,并且在赤拟谷盗体内对这些相关基因进行了功能分析并得到了以下结果。首先,RNA-seq结果显示在赤拟谷盗中干扰Tclph分别导致了两个杀虫剂转运相关基因(TcCSP7、TcOBPC01)以及两个杀虫剂代谢相关基因...
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩写词简表
第1章 绪论
1.1 蛛毒素受体Latrophilin研究现状
1.1.1 Latrophilin的鉴定、分类以及结构分析
1.1.2 Latrophilin的功能研究
1.2 昆虫杀虫剂抗性代谢的研究进展
1.2.1 杀虫剂抗药性及其抗性机制的研究
1.2.2 昆虫OBPs和CSPs的研究进展
1.2.3 昆虫CYP450s的研究进展
1.3 模式生物-赤拟谷盗简介
1.4 本研究的目的及意义
第2章 赤拟谷盗Latrophilin下游抗性基因的筛选及其调控关系
2.1 引言
2.2 实验仪器、材料和试剂
2.2.1 实验仪器
2.2.2 实验材料
2.2.3 实验药品与试剂
2.3 实验方法
2.3.1 缓冲液的配制
2.3.2 Tclph的双链RNA(double-strand RNA,dsRNA)的合成
2.3.3 Tclph的dsRNA的注射
2.3.4 总RNA抽提
2.3.5 cDNA的合成
2.3.6 qRT-PCR检测基因表达水平
2.3.7 杀虫剂处理实验
2.3.8 数据处理
2.4 结果
2.4.1 干扰Tclph影响杀虫剂转运以及杀虫剂代谢相关基因的表达
2.4.2 Tclph通过平衡调控TcCSP7和TcOBPC01的表达参与杀虫剂抗性
2.4.3 Tclph通过调控TcCYP4BN1和TcCYP6BQ11的表达参与杀虫剂抗性
2.5 讨论
第3章 赤拟谷盗Latrophilin下游抗性基因的功能分析
3.1 引言
3.2 实验材料、仪器及试剂
3.2.1 实验材料
3.2.2 实验仪器
3.2.3 实验药品与试剂
3.3 实验方法
3.3.1 总RNA抽提
3.3.2 cDNA的合成
3.3.3 各个基因不同发育时期、组织表达模式分析
3.3.4 杀虫剂诱导分析
3.3.5 RNAi分析
3.3.6 杀虫剂敏感性检测
3.3.7 数据处理
3.4 结果
3.4.1 TcCSP7、TcOBPC01、TcCYP4BN1和TcCYP6BQ11的时期表达模式分析
3.4.2 TcCSP7、TcOBPC01、TcCYP4BN1和TcCYP6BQ11的组织表达模式分析
3.4.3 杀虫剂对TcCSP7、TcOBPC01、TcCYP4BN1和TcCYP6BQ11的诱导模式分析
3.4.4 干扰TcCSP7、TcOBPC01、TcCYP4BN1和TcCYP6BQ11干扰效率最大时间点的探索
3.4.5 干扰TcCSP7、TcOBPC01、TcCYP4BN1和TcCYP6BQ11对杀虫剂抗性的影响
3.5 讨论
第4章 结论
参考文献
在读期间发表的学术论文及研究成果
致谢
本文编号：3922185
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
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摘要
Abstract
英文缩写词简表
第1章 绪论
1.1 蛛毒素受体Latrophilin研究现状
1.1.1 Latrophilin的鉴定、分类以及结构分析
1.1.2 Latrophilin的功能研究
1.2 昆虫杀虫剂抗性代谢的研究进展
1.2.1 杀虫剂抗药性及其抗性机制的研究
1.2.2 昆虫OBPs和CSPs的研究进展
1.2.3 昆虫CYP450s的研究进展
1.3 模式生物-赤拟谷盗简介
1.4 本研究的目的及意义
第2章 赤拟谷盗Latrophilin下游抗性基因的筛选及其调控关系
2.1 引言
2.2 实验仪器、材料和试剂
2.2.1 实验仪器
2.2.2 实验材料
2.2.3 实验药品与试剂
2.3 实验方法
2.3.1 缓冲液的配制
2.3.2 Tclph的双链RNA(double-strand RNA,dsRNA)的合成
2.3.3 Tclph的dsRNA的注射
2.3.4 总RNA抽提
2.3.5 cDNA的合成
2.3.6 qRT-PCR检测基因表达水平
2.3.7 杀虫剂处理实验
2.3.8 数据处理
2.4 结果
2.4.1 干扰Tclph影响杀虫剂转运以及杀虫剂代谢相关基因的表达
2.4.2 Tclph通过平衡调控TcCSP7和TcOBPC01的表达参与杀虫剂抗性
2.4.3 Tclph通过调控TcCYP4BN1和TcCYP6BQ11的表达参与杀虫剂抗性
2.5 讨论
第3章 赤拟谷盗Latrophilin下游抗性基因的功能分析
3.1 引言
3.2 实验材料、仪器及试剂
3.2.1 实验材料
3.2.2 实验仪器
3.2.3 实验药品与试剂
3.3 实验方法
3.3.1 总RNA抽提
3.3.2 cDNA的合成
3.3.3 各个基因不同发育时期、组织表达模式分析
3.3.4 杀虫剂诱导分析
3.3.5 RNAi分析
3.3.6 杀虫剂敏感性检测
3.3.7 数据处理
3.4 结果
3.4.1 TcCSP7、TcOBPC01、TcCYP4BN1和TcCYP6BQ11的时期表达模式分析
3.4.2 TcCSP7、TcOBPC01、TcCYP4BN1和TcCYP6BQ11的组织表达模式分析
3.4.3 杀虫剂对TcCSP7、TcOBPC01、TcCYP4BN1和TcCYP6BQ11的诱导模式分析
3.4.4 干扰TcCSP7、TcOBPC01、TcCYP4BN1和TcCYP6BQ11干扰效率最大时间点的探索
3.4.5 干扰TcCSP7、TcOBPC01、TcCYP4BN1和TcCYP6BQ11对杀虫剂抗性的影响
3.5 讨论
第4章 结论
参考文献
在读期间发表的学术论文及研究成果
致谢
本文编号：3922185
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