FMLP对电离辐射的防护作用及其机制研究
发布时间：2021-04-18 21:39
研究背景近年,随着核技术发展,电离辐射成为社会发展过程中的污染因素之一,而人体暴露于大剂量的电离辐射后会引发各种不良生物学效应,因此研制针对电离辐射损伤的辐射防护药物便显得十分重要。近来研究发现,细菌自身的结构成分（如脂多糖,鞭毛蛋白等）能够抑制辐射导致的细胞凋亡,增强机体对辐射的抵抗力。我们实验室前期研究发现给予野生型小鼠TLR4配体细菌脂多糖（lipopolysaccharide,简称LPS）刺激后能提高小鼠对辐射的耐受。LPS是革兰氏阴性杆菌细胞壁的主要成分之一,它能激活机体的免疫反应。LPS虽有较好的抗辐射效应,但LPS会使感染的机体产生毒性反应。我们通过预实验筛选了大量LPS类似物,发现白细胞趋化肽N-甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸（N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine,简称FMLP）可以诱导机体产生与LPS刺激类似的炎症反应。有文献报道FMLP对中性粒细胞、单核细胞等细胞有重要作用,包括粘附,趋化和超氧化物阴离子释放等。这提示FMLP可能通过影响细胞功能、调节机体免疫功能,从而具有潜在的辐射防护作用。基于以上研究背景,我们开展了FM...
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
FMLP作用于体外细胞的毒性和活力检测
海军军医大学硕士学位论文-20-和活力测试结果。B.小鼠体外BMC细胞毒性和活力测试结果。C.小鼠体外Spleencell细胞毒性和活力测试结果。*为P<0.05。2.FMLP与已知2种防护剂的毒性作用对比由于未能检索到小鼠体内FMLP毒性生存期实验的相关报道，为评估FMLP的防护效价，进行小鼠体内急性毒性实验。在本次实验中我们将FMLP与已被FDA批准用于临床的辐射防护剂WR-2721和本课题组前期发现的强效辐射防护剂LPS作对照研究，选用C57BL/6雄性小鼠（n=6）随机分为NS对照组、FMLP给药组、LPS给药组和WR-2721给药组（图2），采取腹腔注射方式给予小鼠不同剂量梯度药物，腹腔注射同等剂量的NS作为阴性对照组，观察并记录小鼠用药后10天的生存状况。实验结果显示FMLP毒性低于LPS，FMLP在用药100mg/kg后，生存率达到100%，P<0.0001。FMLP毒性略高于WR-2721，但P=0.2836，无统计学差异。通过计算得出FMLP的半致死剂量约在200-400mg/kg左右。图2：LPS、WR-2721、NS与FMLP在小鼠体内急性毒性对照实验。C57BL/6雄性小鼠经不同试剂处理后记录其10天生存期。（二）FMLP体外细胞效应研究1.FMLP促进辐照后HIEC、BMC、Spleencell三种细胞的细胞活力为评价FMLP对体外细胞的辐射防护作用，我们采取HIEC细胞系、小鼠BMC和小鼠Spleencell三种细胞，通过CCK-8实验评价FMLP对辐照后细胞的辐射防护作用。将HIEC、BMC、Spleencell三种细胞分为给药照射组和单纯照射组，给药照
FMLP电离辐射防护作用及其机制研究-21-射组于照射前12小时和2小时分别给予FMLP刺激细胞，随后给予细胞照射，照射剂量为6.0Gy，12.0Gy，照后24小时通过CCK-8实验检测细胞活力。根据HIEC、BMC、Spleencell细胞活力统计图可以看出照射后各组细胞活力均有下降。但给药照射组细胞活力均明显高于单纯照射组，说明FMLP可以增进辐照后HIEC、BMC、Spleencell三种细胞的细胞活力。（图3）。图3.FMLP对照射后体外细胞的细胞活力检测。在照前12小时和2小时用FMLP刺激给药组细胞，随后采用不同剂量（6.0Gy和12.0Gy）照射，照后24小时检测给药组和对照组细胞活力的变化。A.HIEC在不同剂量γ射线照射细胞活力的变化。B.BMC在不同剂量γ射线照射下细胞活力的变化。C.Spleencell在不同剂量γ射线照射下细胞活力的变化。*为P<0.052.FMLP体外辐射防护效果优于同批次其它几种辐射防护剂为比较FMLP体外辐射防护效果是否优于其它辐射防护剂，选取多种常用的辐射防护剂（WR2721、IFN-α、GM-CSF、DMOG、LPS、PAM3、CPG-ODN、FMLP）作用于HIEC细胞系，其中生理盐水作为阴性对照；WR2721、IFN-α、GM-SCF、DMOG都是国际上报道过的有效辐射防护剂，而LPS、PAM3、CPG-ODN是选自本教研室前期发现的辐射防护效果较好的防护剂。在试验中，于照前12小时和2小时分两次用相应药物分别刺激HIEC，以12.0Gy剂量照射细胞，照后24小时采用CCK-8实验对细胞活力情况进行检测。以未照射细胞系的细胞活力为100%，结果显示FMLP对HIEC细胞系防护效果最好，相对细胞活力达到80%以上，该结果甚至优于国际上已有报道和课题组前期研究的其它辐射防护剂（图4）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Inhibitory Effects of AURKB Gene on Apoptosis and Cancer Cell Growth in HCT 116 Cells[J]. Wangyuan ZENG,Wenxin DAI. Medicinal Plant. 2019(06)
[2]甲酰肽受体2研究进展[J]. 陈晓芳,乐颖影. 生命的化学. 2016(06)
[3]保障核与辐射环境安全[J]. 夏琰君. 环境保护. 2010(20)
[4]小肠电离辐射损伤研究进展[J]. 马晓飞,张红. 原子核物理评论. 2010(03)
[5]甲酰肽受体研究进展[J]. 程希远,王明伟. 生命科学. 2004(03)
[6]趋化肽fMLP增强博安霉素的抗肿瘤作用[J]. 李忠东,李毅,甄永苏. 癌症. 2002(08)
[7]核技术在国民经济中的应用及其效益分析[J]. 隗斌贤. 嘉兴高等专科学校学报. 1998(Z1)
硕士论文
[1]中药复方对急性辐射损伤小鼠睾丸的防护效应及机制研究[D]. 王磊.北京中医药大学 2018
本文编号：3146213
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
FMLP作用于体外细胞的毒性和活力检测
海军军医大学硕士学位论文-20-和活力测试结果。B.小鼠体外BMC细胞毒性和活力测试结果。C.小鼠体外Spleencell细胞毒性和活力测试结果。*为P<0.05。2.FMLP与已知2种防护剂的毒性作用对比由于未能检索到小鼠体内FMLP毒性生存期实验的相关报道，为评估FMLP的防护效价，进行小鼠体内急性毒性实验。在本次实验中我们将FMLP与已被FDA批准用于临床的辐射防护剂WR-2721和本课题组前期发现的强效辐射防护剂LPS作对照研究，选用C57BL/6雄性小鼠（n=6）随机分为NS对照组、FMLP给药组、LPS给药组和WR-2721给药组（图2），采取腹腔注射方式给予小鼠不同剂量梯度药物，腹腔注射同等剂量的NS作为阴性对照组，观察并记录小鼠用药后10天的生存状况。实验结果显示FMLP毒性低于LPS，FMLP在用药100mg/kg后，生存率达到100%，P<0.0001。FMLP毒性略高于WR-2721，但P=0.2836，无统计学差异。通过计算得出FMLP的半致死剂量约在200-400mg/kg左右。图2：LPS、WR-2721、NS与FMLP在小鼠体内急性毒性对照实验。C57BL/6雄性小鼠经不同试剂处理后记录其10天生存期。（二）FMLP体外细胞效应研究1.FMLP促进辐照后HIEC、BMC、Spleencell三种细胞的细胞活力为评价FMLP对体外细胞的辐射防护作用，我们采取HIEC细胞系、小鼠BMC和小鼠Spleencell三种细胞，通过CCK-8实验评价FMLP对辐照后细胞的辐射防护作用。将HIEC、BMC、Spleencell三种细胞分为给药照射组和单纯照射组，给药照
FMLP电离辐射防护作用及其机制研究-21-射组于照射前12小时和2小时分别给予FMLP刺激细胞，随后给予细胞照射，照射剂量为6.0Gy，12.0Gy，照后24小时通过CCK-8实验检测细胞活力。根据HIEC、BMC、Spleencell细胞活力统计图可以看出照射后各组细胞活力均有下降。但给药照射组细胞活力均明显高于单纯照射组，说明FMLP可以增进辐照后HIEC、BMC、Spleencell三种细胞的细胞活力。（图3）。图3.FMLP对照射后体外细胞的细胞活力检测。在照前12小时和2小时用FMLP刺激给药组细胞，随后采用不同剂量（6.0Gy和12.0Gy）照射，照后24小时检测给药组和对照组细胞活力的变化。A.HIEC在不同剂量γ射线照射细胞活力的变化。B.BMC在不同剂量γ射线照射下细胞活力的变化。C.Spleencell在不同剂量γ射线照射下细胞活力的变化。*为P<0.052.FMLP体外辐射防护效果优于同批次其它几种辐射防护剂为比较FMLP体外辐射防护效果是否优于其它辐射防护剂，选取多种常用的辐射防护剂（WR2721、IFN-α、GM-CSF、DMOG、LPS、PAM3、CPG-ODN、FMLP）作用于HIEC细胞系，其中生理盐水作为阴性对照；WR2721、IFN-α、GM-SCF、DMOG都是国际上报道过的有效辐射防护剂，而LPS、PAM3、CPG-ODN是选自本教研室前期发现的辐射防护效果较好的防护剂。在试验中，于照前12小时和2小时分两次用相应药物分别刺激HIEC，以12.0Gy剂量照射细胞，照后24小时采用CCK-8实验对细胞活力情况进行检测。以未照射细胞系的细胞活力为100%，结果显示FMLP对HIEC细胞系防护效果最好，相对细胞活力达到80%以上，该结果甚至优于国际上已有报道和课题组前期研究的其它辐射防护剂（图4）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Inhibitory Effects of AURKB Gene on Apoptosis and Cancer Cell Growth in HCT 116 Cells[J]. Wangyuan ZENG,Wenxin DAI. Medicinal Plant. 2019(06)
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[4]小肠电离辐射损伤研究进展[J]. 马晓飞,张红. 原子核物理评论. 2010(03)
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[6]趋化肽fMLP增强博安霉素的抗肿瘤作用[J]. 李忠东,李毅,甄永苏. 癌症. 2002(08)
[7]核技术在国民经济中的应用及其效益分析[J]. 隗斌贤. 嘉兴高等专科学校学报. 1998(Z1)
硕士论文
[1]中药复方对急性辐射损伤小鼠睾丸的防护效应及机制研究[D]. 王磊.北京中医药大学 2018
本文编号：3146213
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