芸香柚皮苷酶解辅助提取工艺优化及其对OVA诱导口服耐受的影响

发布时间：2020-06-03 17:58

【摘要】：鸡蛋含有丰富的优质蛋白,是婴幼儿早期的膳食蛋白主要来源,然而蛋清中有多种过敏原,诱导婴幼儿食物过敏,严重影响过敏患儿的生活质量。卵白蛋白(OVA)作为蛋清中含量最多的蛋白质,是引起鸡蛋过敏的关键过敏原。口服耐受是指口服无害抗原(如食物蛋白)而引起机体产生局部或全身免疫无反应状态。文献表明,口服耐受建立失败,会发生食物过敏反应,如何成功建立口服耐受是防治食物过敏的主要途径。柑橘属植物果皮含有黄酮类化合物等多种生物活性物质,但常作为废弃物被浪费。芸香柚皮苷是果皮中含有的主要的黄酮类化合物,具有抗氧化、抗癌、抗病毒和抗炎等方面的生物活性,但其对口服耐受的影响尚未报道。本实验对芸香柚皮苷的提取工艺进行优化,采用OVA诱导BALB/C小鼠口服耐受模型考察其对口服耐受的影响。具体研究内容如下:1.芸香柚皮苷提取工艺优化,采用酶解辅助乙醇回流法提取(以本课题组前期建立的提取工艺为基础),乙醇提取条件:8倍量的60%乙醇回流提取3次,每次时间分别为1.5、1.0和0.5 h;酶解辅助条件:通过考察酶的种类及浓度、酶解温度、酶解时间和酶解pH对芸香柚皮苷提取率的影响,获得最优单因素,分别是0.2 mg/mL果胶酶、45℃、120 min和pH 4.5,芸香柚皮苷的提取率达到5.31 mg/g,在此基础上,采用L_9(3~4)正交实验,最终确定最佳提取工艺:0.3 mg/mL果胶酶、45℃、120 min和pH 5.0,芸香柚皮苷的提取率达到5.83 mg/g。2.芸香柚皮苷对口服耐受的影响,建立OVA诱导BALB/c小鼠口服耐受模型,利用小鼠体重、体温、粪便评分、血清中抗体水平和肠道内容物中IgA水平,以及结肠组织中的GATA3、Foxp3、STAT5、MHCⅡ、CXCR1和CCR7的蛋白表达情况,考察芸香柚皮苷对OVA口服耐受的影响。结果表明,与致敏模型组相比,口服耐受组和芸香柚皮苷联合作用耐受组能够抑制由过敏导致的小鼠体温降低;减轻其腹泻症状;使血清中OVA特异性IgE、IgA和IgG1水平降低;血清MCP-1水平升高;肠道内容物OVA特异性IgA水平降低;小鼠结肠组织GATA3、MHCⅡ、CXCR1和CCR7表达水平降低及Foxp3和STAT5表达水平升高。由上述可知,与口服耐受组相比,不同浓度的芸香柚皮苷耐受组可以更好的促进口服耐受的形成。
【图文】：

标准曲线,芸香,柚皮苷,标准品

图 2.1 芸香柚皮苷标准品液相色谱分析图Figure 2.1 High performance liquid Chromatography of narirutin standard2.3.4 线性关系取标准品储备液 0.50 mL，依次稀释成 0.50、0.25、0.125、0.0625 和 0.0312mg/mL 不同浓度的标准溶液待测。以标准品峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，，绘制标准曲线。如图 2.2，得到芸香柚皮苷浓度与峰面积标准曲线回归方程为：y=2.55×107x+1.02×106，相关系数 R2为 0.9916，在 0.03125 -0.5 mg/mL 相关性良好。y = 2.55x107x+ 1.02x106R2= 0.9916800000010000000120000001400000016000000积（mAUs）芸香柚皮苷

小鼠,芸香,柚皮苷,致敏

第三章芸香柚皮苷对 OVA 口服免疫耐受的影响（5）30 mg/kg 芸香柚皮苷耐受组（以下简称 30 mg/kg 耐受组）：第 0 天至第 4 天通过灌胃的方式给予 1 mg/只的 OVA 和 30 mg/kg 的芸香柚皮苷，致敏方式和激发方式均同致敏模型组。（6）50 mg/kg 芸香柚皮苷耐受组（以下简称 50 mg/kg 耐受组）：第 0 天至第 4 天通过灌胃的方式给予 1 mg/只的 OVA 和 50 mg/kg 的芸香柚皮苷，致敏方式和激发方式均同致敏模型组。每次激发后 1h 后对小鼠进行腹泻评分及体温测量。1μgOVA/Alum(i.P.)30mgOVAorPBS(P.O.)1mgOVAorPBS(P.O.)
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：TQ460.6

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