富硒灰树花多糖在Caco-2细胞模型中的吸收及在大鼠体内代谢动力学研究

发布时间：2023-02-01 10:44

　　灰树花（Grifola frondosa）富含蛋白质、膳食纤维、多糖和微量元素等多种营养成分,其中多糖是其主要活性物质,具有免疫调节、抗氧化、抗肿瘤、降血糖和降血脂等生物活性。富硒灰树花多糖是一种有机硒化合物,兼具多糖和硒的双重生物活性。本课题组前期研究发现,从富硒灰树花子实体中提取分离纯化得到的富硒灰树花多糖（Se-GFP）具有较好的体内抗肿瘤活性,可以增强免疫抑制小鼠的免疫活性和抗氧化活性,而目前对Se-GFP在体外吸收和体内代谢动力学研究尚未见报道。因此本文通过建立结肠癌细胞（Caco-2）单层培养模型,研究Se-GFP在体外的转运和摄取;采用异硫氰酸荧光素（FITC）通过还原胺化反应对Se-GFP进行荧光标记,进行大鼠体内的代谢动力学研究,本研究可为多糖类化合物的吸收和代谢动力学研究与应用提供基础,具有较重要的理论和实际意义。主要研究内容如下:（1）采用Caco-2单层细胞培养模型,从富硒灰树花中多糖和硒两个方面研究富硒灰树花多糖（Se-GFP）的转运与摄取。结果表明,富硒灰树花多糖Se-GFP在Caco-2细胞中的转运具有时间和浓度依赖型,在肠腔侧（AP侧）比基底侧（BL侧）... 

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【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 多糖的肠道上皮细胞吸收研究进展
        1.1.1 肠道概述
        1.1.2 肠道吸收屏障结构
        1.1.3 肠上皮细胞物质吸收转运途径
        1.1.4 Caco-2 细胞模型概述
        1.1.5 多糖在Caco-2 细胞模型中的吸收研究
    1.2 多糖的代谢动力学研究进展
        1.2.1 多糖的代谢动力学研究概况
        1.2.2 多糖的代谢动力学研究方法
    1.3 富硒灰树花多糖的研究进展
        1.3.1 富硒灰树花多糖的结构
        1.3.2 富硒灰树花多糖的生物活性
        1.3.3 富硒灰树花多糖的吸收和代谢动力学研究进展
    1.4 本课题的研究目的与意义
    1.5 本课题研究的主要内容
第二章 富硒灰树花多糖在Caco-2 细胞模型中转运和摄取的研究
    2.1 仪器、材料与试剂
        2.1.1 仪器
        2.1.2 材料与试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 Caco-2 细胞的培养
        2.2.2 富硒灰树花多糖对Caco-2 细胞活力的影响
        2.2.3 Caco-2 细胞吸收模型的建立
        2.2.4 Caco-2 细胞吸收模型的评估
        2.2.5 多糖和硒含量的测定
        2.2.6 Caco-2 细胞的双向跨膜转运实验
        2.2.7 Caco-2 细胞的摄取实验
        2.2.8 数据处理和分析
    2.3 结果和讨论
        2.3.1 富硒灰树花多糖对Caco-2 细胞活力的影响
        2.3.2 Caco-2 细胞吸收模型的评估
        2.3.3 转运实验结果
        2.3.4 摄取实验结果
        2.3.5 富硒灰树花多糖在转运和摄取过程中硒含量的变化
    2.4 本章小结
第三章 富硒灰树花多糖的荧光标记及在生物样品中的稳定性研究
    3.1 仪器、材料与试剂
        3.1.1 仪器
        3.1.2 材料与试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 富硒灰树花多糖荧光标记物的制备
        3.2.2 Se-GFP-FITC的分析
        3.2.3 Se-GFP-FITC的体外稳定性研究
    3.3 结果和讨论
        3.3.1 Se-GFP-FITC的荧光标记结果
        3.3.2 Se-GFP-FITC的紫外可见光谱分析
        3.3.3 Se-GFP-FITC的荧光光谱分析
        3.3.4 Se-GFP-FITC中 FITC的取代度
        3.3.5 Se-GFP-FITC的纯度分析
        3.3.6 Se-GFP-FITC的红外光谱分析
        3.3.7 Se-GFP-FITC的分子量分析
        3.3.8 Se-GFP-FITC的体外稳定性
    3.4 本章小结
第四章 富硒灰树花多糖在大鼠体内的代谢动力学研究
    4.1 仪器、材料与试剂
        4.1.1 仪器
        4.1.2 材料与试剂
    4.2 实验方法
        4.2.1 溶液的配制
        4.2.2 Se-GFP-FITC定量分析方法的研究
        4.2.3 Se-GFP-FITC在大鼠体内代谢动力学研究
    4.3 结果和讨论
        4.3.1 血浆中Se-GFP-FITC浓度的测定
        4.3.2 尿液中Se-GFP-FITC浓度的测定
        4.3.3 粪便中Se-GFP-FITC浓度的测定
        4.3.4 组织样品中Se-GFP-FITC浓度的测定
        4.3.5 体内代谢动力学研究
        4.3.6 组织分布
        4.3.7 排泄
    4.4 本章小结
第五章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
致谢
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【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3734118