珍珠贝外套膜酶解产物促进小鼠皮肤软组织创伤愈合作用研究

发布时间：2023-02-06 12:08

　　马氏珠母贝(Pinctada martensii),因盛产优质珍珠而闻名于世,是中国南方沿海地区培育珍珠的主要贝类。珍珠主要通过外套膜包裹珠核进行人工“插核手术”后培育,整个过程会伴随着贝体的炎症及免疫反应。因此,珍珠贝的外套膜在珍珠形成中起着重要的作用。目前,珍珠贝在采珠后的贝肉多被废弃,其外套膜主要营养成分是蛋白质,所以,充分开发利用外套膜的功能价值是非常必要的。本文采用酶法制备马氏珠母贝外套膜酶解产物,通过体外、体内实验进行皮肤创伤愈合功能作用的研究,为进行深入研究提供理论基础和方向。本研究主要内容和结果如下:(1)通过酶法制备马氏珠母贝外套膜酶解物(EHMPM),建立小鼠皮肤全皮层创伤模型,以涂抹和灌胃给药两种方式评价其促愈合活性。EHMPM蛋白质含量为55.66 g/100g,其中,肽含量占蛋白含量的21.56%;必需氨基酸占总氨基酸的63.02%;支链氨基酸分别占总氨基酸的32.92%;疏水性氨基酸占总氨基酸的59.75%。与阴性对照组相比,涂抹给药EHMPM能显著缩短止血时间,无毒性;两种方式给药EHMPM均显著缩短上皮化时间,提高伤口愈合率。第7天,与两个对照组相比,涂...

【文章页数】：108 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
1 绪论
    1.1 皮肤创伤愈合概况
    1.2 天然促愈活性物质研究进展
        1.2.1 陆生植物来源的活性物质
        1.2.2 陆生动物来源的活性物质
        1.2.3 海洋来源的活性物质
    1.3 海洋贝类创伤愈合研究进展及存在问题
        1.3.1 海洋贝类在炎症和创伤愈合的的传统使用
        1.3.2 海洋贝类的抗炎作用及促愈活性研究进展
    1.4 珍珠贝活性物质研究进展
        1.4.1 解酒护肝
        1.4.2 改善记忆
        1.4.3 抗氧化作用
        1.4.4 保湿作用
        1.4.5 其他活性发现
    1.5 本课题研究的目的意义和主要内容
        1.5.1 研究目的及意义
        1.5.2 研究内容
2 马氏珠母贝外套膜酶解物促进小鼠皮肤创伤修复研究
    2.1 材料与仪器
        2.1.1 材料与试剂
        2.1.2 仪器与设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 EHMPM制备及主要成分分析
        2.2.2 EHMPM游离氨基酸组成分析
        2.2.3 EHMPM急性皮肤毒性试验
        2.2.4 EHMPM体外抗菌实验
        2.2.5 EHMPM体表促凝血实验
        2.2.6 动物分组及创伤模型建立
        2.2.7 愈合率及瘢痕残留率
        2.2.8 创面组织中生化指标测定
        2.2.9 数据统计分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 EHMPM的主要成分分析
        2.3.2 涂抹给药酶解物对创伤修复的影响
        2.3.3 灌胃给药酶解物对创伤修复的影响
    2.4 讨论
        2.4.1 EHMPM对抗菌的影响
        2.4.2 EHMPM对止血的影响
        2.4.3 EHMPM对创面愈合的影响
        2.4.4 EHMPM对炎症细胞因子的影响
        2.4.5 EHMPM对增殖期生长因子的影响
        2.4.6 EHMPM对组织重塑的影响
    2.5 本章小结
3 马氏珠母贝外套膜酶解超滤组分促进小鼠皮肤创伤修复研究
    3.1 材料与仪器
        3.1.1 材料与试剂
        3.1.2 仪器与设备
    3.2 实验方法
        3.2.1 UCEHMPM制备
        3.2.2 UCEHMPM主要营养成分分析
        3.2.3 UCEHMPM游离氨基酸组成分析
        3.2.4 UCEHMPM急性皮肤毒性试验
        3.2.5 UCEHMPM体外抗菌实验
        3.2.6 UCEHMPM体外促凝血实验
        3.2.7 动物分组及创伤模型建立
        3.2.8 愈合率及瘢痕残留率
        3.2.9 ELISA分析
        3.2.10 组织学评估的组织准备
        3.2.11 H&E和 Masson染色
        3.2.12 免疫组织化学
        3.2.13 天狼星红苦味酸染色
        3.2.14 数据分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 UCEHMPM的主要成分分析
        3.3.2 体外抗菌实验
        3.3.3 体外促凝血实验
        3.3.4 涂抹给药超滤组分对创伤修复的影响
        3.3.5 灌胃给药超滤组分对创伤修复的影响
    3.4 讨论
        3.4.1 UCEHMPM营养成分对创伤愈合的影响
        3.4.2 UCEHMPM对止血及抗菌的影响
        3.4.3 UCEHMPM对创面愈合的影响
        3.4.4 UCEHMPM对炎症细胞因子的影响
        3.4.5 UCEHMPM对细胞增殖期上皮化的影响
        3.4.6 UCEHMPM对组织重塑的影响
    3.5 本章小结
4 马氏珠母贝外套膜生物活性肽分离纯化及机制初步探讨
    4.1 材料与仪器
        4.1.1 材料与试剂
        4.1.2 仪器与设备
    4.2 实验方法
        4.2.1 马氏珠母贝外套膜<3 KDa超滤组分的制备
        4.2.2 <3 KDa超滤组分的主要肽序列分析
        4.2.3 Sephadex G-25 凝胶过滤层析
        4.2.4 HaCaT和 HSF增殖实验
        4.2.5 数据分析
    4.3 结果与分析
        4.3.1 <3 KDa超滤组分分子量分布的质谱分析
        4.3.2 <3 KDa超滤组分的特征肽序列分析
        4.3.3 <3 KDa超滤组分对细胞增殖的影响
        4.3.4 Sephadex G-25 分离纯化及对细胞增殖的影响
    4.4 讨论
    4.5 本章小结
5 马氏珠母贝外套膜活性肽软膏制备及促愈修复探讨
    5.1 材料与仪器
        5.1.1 材料与试剂
        5.1.2 仪器与设备
    5.2 实验方法
        5.2.1 马氏珠母贝外套膜< 3KDa超滤组分的制备
        5.2.2 马氏珠母贝外套膜活性肽的软膏制备
        5.2.3 软膏急性皮肤毒性试验
        5.2.4 动物分组及创伤模型建立
        5.2.5 愈合率及瘢痕残留率
        5.2.6 ELISA分析
        5.2.7 组织学评估的组织准备
        5.2.8 H&E染色
        5.2.9 免疫组织学
        5.2.10 天狼星红苦味酸染色
        5.2.11 数据分析
    5.3 结果与分析
        5.3.1 软膏外观及形状
        5.3.2 急性皮肤毒性实验结果
        5.3.3 创面形态变化观察
        5.3.4 愈合率及愈合时间
        5.3.5 炎症因子测定
        5.3.6 生长因子测定
        5.3.7 软膏给药小鼠创伤的组织学评价
        5.3.8 软膏给药小鼠创伤免疫组学分析
        5.3.9 软膏对TGF-β/Smad信号通路的影响
        5.3.10 软膏对胶原蛋白和瘢痕形成的影响
    5.4 讨论
    5.5 本章小结
6 结论与展望
    6.1 研究结论
    6.2 研究创新点
    6.3 展望
参考文献
致谢
作者简介
导师简介



本文编号：3735972