鹿茸多肽对骨关节炎软骨细胞的保护作用

发布时间：2023-03-04 03:18

　　骨性关节炎(Osteoarthritis,OA)是一种退行性关节疾病,其特征在于关节的慢性疼痛和运动障碍。尽管目前对OA的潜在机制仍知之甚少,但已提出炎症反应和氧化应激在OA的发生和发展中起重要作用。在炎性刺激中,促炎细胞因子白介素-1β(IL-1β)通过刺激促成软骨降解的多种介质在OA的发病过程中发挥关键作用。关节软骨细胞在维持正常组织合成和胞外基质(ECM)的动态平衡中起重要作用。IL-1β可上调软骨细胞中主要蛋白酶(如MMP)的表达诱导软骨降解,造成活性氧(ROS)的产生和炎症介质例如一氧化氮(NO)释放及一氧化氮合酶的表达增加等,也可以通过损伤线粒体DNA、抑制转录等方式促进软骨细胞凋亡。因此,能够针对IL-1β诱导炎症的药物有望成为有效治疗OA的新策略。鹿茸多肽(VAP)是从鹿茸中分离提取的多肽类活性单体,具有重要的研究价值,已有研究表明其在抑制炎症过程中的重要作用。因此,本课题以提取的兔原代软骨细胞为研究对象,旨在探究VAP对IL-1β诱导的软骨细胞的氧化应激、细胞凋亡和炎症反应的作用及其潜在的分子作用机制。实验所用的鹿茸多肽为本实验室前期提取获得的 32 肽,其氨基酸序列...

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 绪论
    1.1 骨关节炎
    1.2 OA生物学标志
        1.2.1 IL
        1.2.2 ROS
        1.2.3 NO
        1.2.4 MMPS
        1.2.5 软骨细胞凋亡
    1.3 鹿茸
        1.3.1 鹿茸多肽
        1.3.2 鹿茸多肽与OA
        1.3.3 鹿茸补肾汤
    1.4 骨关节炎相关信号通路
        1.4.1 Notch信号通路与OA
        1.4.2 MAPKs信号通路与OA
        1.4.3 Wnt信号通路与OA
        1.4.4 NF-κB信号通路与OA
        1.4.5 TGF-β信号通路与OA
    1.5 本研究的内容及意义
2 软骨细胞培养及鹿茸多肽活性验证
    2.1 实验材料
    2.2 实验方法
        2.2.1 溶液配置
        2.2.2 软骨细胞分离
        2.2.3 软骨细胞培养
        2.2.4 细胞计数
        2.2.5 软骨细胞鉴定
        2.2.6 药物MTT实验
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 原代软骨细胞的分离与培养
        2.3.2 软骨细胞表型鉴定
        2.3.3 鹿茸多肽对软骨细胞毒性作用
    2.4 本章小结
3 VAP对IL-1β诱导的软骨细胞的作用效果
    3.1 实验材料
    3.2 实验方法
        3.2.1 溶液配置
        3.2.2 活性氧检测实验
        3.2.3 一氧化氮检测实验
        3.2.4 蛋白免疫印迹分析
        3.2.5 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)
        3.2.6 统计学处理
    3.3 结果及讨论
        3.3.1 VAP对IL-1β诱导的软骨细胞的活性影响
        3.3.2 VAP抑制IL-1β诱导的软骨细胞中ROS的产生
        3.3.3 VAP抑制IL-1β诱导的软骨细胞基质金属蛋白酶表达水平
        3.3.4 VAP减少IL-1β诱导的NO的产生
        3.3.5 VAP抑制IL-1β诱导的软骨细胞iNOS的表达
        3.3.6 VAP调节IL-1β诱导的凋亡相关蛋白的表达
        3.3.7 VAP调节IL-1β诱导的TGF-β/Smad信号通路
    3.4 本章小结
4 鹿茸补肾汤对兔骨关节炎模型的影响
    4.1 实验材料
    4.2 实验方法
        4.2.1 溶液配制
        4.2.2 动物分组及处理
        4.2.3 血常规检测
        4.2.4 统计学处理
    4.3 结果及讨论
        4.3.1 鹿茸补肾汤对骨关节炎新西兰大耳白兔体重影响
        4.3.2 20项血液参数测定结果
        4.3.3 白细胞系统测定结果
    4.4 本章小结
5 结论
参考文献
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢



本文编号：3753626