牛磺酸螯合钙对皮肤屏障的功效评价

发布时间：2023-03-12 01:41

　　皮肤病已成为当今世界公认的最常见疾病及多发病之一,严重影响人类的身体健康。目前,氨基酸螯合钙经皮贴剂在临床上治疗皮炎湿疹类皮肤病,具有显著疗效,但其种类较少,亟待研发新药。牛磺酸螯合钙(Taurine chelate calcium,TCCa)是本实验室自主研发的钙制剂,其经皮吸收性能优于常用钙制剂,之前已完成制备及表征,并建立完善促透体系,但是TCCa在体内作用方式及药物修复机制尚未明确。因此,本文研究TCCa在体液中的稳定性及解离机理,并从细胞层面和基因层面阐明TCCa对皮肤屏障的修复机制,对于推动TCCa的临床应用具有重要的理论意义和实用价值。本文首先研究TCCa在体液中的稳定性及解离机理。采用分光光度法测定TCCa的稳定常数为K稳=4.08×1010,实验验证TCCa是由两个牛磺酸的氨基和磺酸基与中心钙离子结合生成的二环相连六元环状结构。采用D-Hanks平衡盐溶液模拟人体缺钙体液环境,研究解离时间、解离温度、解离pH对TCCa钙解离率的影响,测得在缺钙体液中TCCa在前2 h达到解离平衡,在人体体液环境37℃、pH=7时钙解离率达15.0±0.3%,其解离速度及钙解离率均优于...

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摘要
ABSTRACT
符号说明
第一章 绪论
    1.1 皮肤屏障功能
        1.1.1 人体皮肤结构
        1.1.2 皮肤渗透与吸收
        1.1.3 皮肤屏障功能及相关基因
    1.2 钙与人体健康
        1.2.1 钙的生理功能
        1.2.2 钙的吸收与代谢
        1.2.3 钙与皮肤
            1.2.3.1 表皮钙梯度对皮肤的影响
            1.2.3.2 钙调控表皮增殖分化
            1.2.3.3 钙促进损伤表皮修复和再上皮化
            1.2.3.4 钙影响皮肤黑色素合成
            1.2.3.5 钙在皮肤病治疗的应用
    1.3 钙制剂的发展
        1.3.1 无机钙
        1.3.2 有机酸钙
        1.3.3 氨基酸螯合钙
        1.3.4 多肽螯合钙
    1.4 螯合物稳定常数测定方法
        1.4.1 分光光度法
        1.4.2 电位法
        1.4.3 极谱法
    1.5 牛磺酸螯合钙研究的国内外概况
        1.5.1 牛磺酸对皮肤的作用
            1.5.1.1 牛磺酸在人体中的分布
            1.5.1.2 牛磺酸对钙离子的调节作用
            1.5.1.3 牛磺酸对皮肤的作用
        1.5.2 牛磺酸螯合钙制备及表征
        1.5.3 牛磺酸螯合钙经皮吸收性能
    1.6 本课题研究意义及内容
        1.6.1 本课题研究意义
        1.6.2 本课题研究内容
第二章 牛磺酸螫合钙稳定常数测定及解离机理探究
    2.1 引言
    2.2 实验材料与方法
        2.2.1 实验试剂
        2.2.2 实验设备
        2.2.3 实验方法
            2.2.3.1 测定稳定常数实验原理
            2.2.3.2 紫外吸收光谱相关溶液配制
            2.2.3.3 螯合物紫外吸收光谱的测定
            2.2.3.4 解离时间对TCCa钙解离率的影响
            2.2.3.5 解离温度对TCCa钙解离率的影响
            2.2.3.6 解离pH对TCCa钙解离率的影响
            2.2.3.7 不同氨基酸螯合钙的钙解离率比较
            2.2.3.8 TCCa钙解离率的测定
            2.2.3.9 实验数据处理
    2.3 实验结果与讨论
        2.3.1 TCCa稳定常数测定
        2.3.2 解离时间对TCCa钙解离率的影响
        2.3.3 解离温度对TCCa钙解离率的影响
        2.3.4 解离pH对TCCa钙解离率的影响
        2.3.5 不同氨基酸螯合钙的钙解离率比较
    2.4 本章小结
第三章 牛磺酸螯合钙对HaCaT细胞增殖的作用
    3.1 引言
    3.2 实验材料与方法
        3.2.1 实验试剂
        3.2.2 实验设备
        3.2.3 实验方法
            3.2.3.1 试剂配制
            3.2.3.2 HaCaT细胞复苏
            3.2.3.3 HaCaT细胞培养
            3.2.3.4 HaCaT细胞传代
            3.2.3.5 HaCaT细胞冻存
            3.2.3.6 细胞计数
            3.2.3.7 细胞处理
            3.2.3.8 细胞贴壁率测定
            3.2.3.9 克隆形成率测定
            3.2.3.10 细胞增殖活性测定
            3.2.3.11 TCCa与三代钙制剂的比较
            3.2.3.12 统计分析方法
    3.3 实验结果与讨论
        3.3.1 正常培养时TCCa对细胞增殖的作用
            3.3.1.1 TCCa对细胞增殖及分化的影响
            3.3.1.2 TCCa对细胞贴壁率的影响
            3.3.1.3 TCCa对细胞克隆形成率的影响
            3.3.1.4 TCCa对细胞增殖活性的影响
        3.3.2 缺钙环境下TCCa对细胞增殖的作用
            3.3.2.1 TCCa对细胞贴壁率的影响
            3.3.2.2 TCCa对细胞克隆形成率的影响
            3.3.2.3 TCCa对细胞增殖活性的影响
            3.3.2.4 TCCa与无机钙的作用比较
            3.3.2.5 TCCa与有机酸钙的作用比较
            3.3.2.6 TCCa与其他氨基酸螯合钙的作用比较
    3.4 本章小结
第四章 牛磺酸螯合钙对皮肤屏障相关基因的调控
    4.1 引言
    4.2 实验材料与方法
        4.2.1 实验试剂
        4.2.2 实验设备
        4.2.3 实验方法
            4.2.3.1 HaCaT细胞培养及细胞计数
            4.2.3.2 细胞处理
            4.2.3.3 RNA抽提
            4.2.3.4 RNA浓度检测
            4.2.3.5 RNA反转录
            4.2.3.6 引物设计与合成
            4.2.3.7 荧光定量PCR
            4.2.3.8 统计分析方法
    4.3 实验结果与讨论
        4.3.1 钙离子对皮肤屏障相关基因的调控作用
            4.3.1.1 钙离子对角蛋白和丝聚蛋白相关基因的调控作用
            4.3.1.2 钙离子对紧密连接相关基因的调控作用
        4.3.2 TCCa对皮肤屏障相关基因的调控作用
            4.3.2.1 TCCa对基底层角蛋白基因的调控作用
            4.3.2.2 TCCa对有棘层角蛋白基因的调控作用
            4.3.2.3 TCCa对丝聚蛋白相关基因的调控作用
            4.3.2.4 TCCa对紧密连接相关基因的调控作用
    4.4 本章小结
第五章 结论与建议
    5.1 结论
    5.2 创新点
    5.3 建议
参考文献
致谢
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