MDCK细胞基质流感疫苗纯化工艺研究

发布时间：2023-04-06 22:28

　　【目的】流感每年给人类的健康和经济造成巨大损害,而接种流感疫苗是预防流感行之有效的方法。在短期内快速高效的生产疫苗,对生产制造商来说是一个挑战。因此,需要一套经济高效的流感疫苗生产工艺来支撑庞大的疫苗需求。传统流感疫苗主要借助于鸡胚生产,具有多种局限性,例如鸡胚供应可能受到流感大流行的影响。细胞基质流感疫苗逐渐成为近些年的研发热点,国外已有部分企业上市了此种疫苗。本研究通过对比不同的细胞基质流感疫苗的纯化工艺以及对纯化工艺进行优化,进而获得纯度较高的细胞基质疫苗原液。【方法】BV69流感病毒经过深层过滤、核酸酶处理和超滤后,经过一步层析,对Sepharose 4FF、Capto core 700以及Cellufine sulfate的纯化条件进行优化,对收获的病毒液进行灭活以及灭活验证,将灭活后的病毒液进行二步层析,包括Capto Q和Q Sepharose xl的纯化条件优化。鉴于考虑实际生产的成本和效率问题,在保证病毒回收率的前提下,最终初步选择Capto core 700和Capto Q相结合的两步层析法作为BV69、H1N1、BY、H3N2的纯化选择。【结果】以BY病毒的纯化为...

【文章页数】：87 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
英文缩略词表
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 研究背景
        1.1.1 流感病毒的结构及其生物学特性
        1.1.2 流感病毒的流行病学和临床表现
        1.1.3 流感疫苗的研发现状
    1.2 研究目的及意义
    1.3 技术路线
第二章 MDCK细胞基质流感病毒的纯化
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞、毒株和标准品
        2.1.2 主要实验设备和仪器
        2.1.3 主要实验试剂
    2.2 基本实验操作与溶液配制
        2.2.1 主要实验溶液的配制
        2.2.2 基本实验操作
            2.2.2.1 血凝实验
            2.2.2.2 Lowry法测总蛋白
            2.2.2.3 单向扩散免疫法测HA
            2.2.2.4 MDCK宿主蛋白检测试剂盒测残余MDCK蛋白含量
            2.2.2.5 MDCK宿主DNA检测试剂盒测残余DNA含量
    2.3 实验方法
        2.3.1 病毒收获液初步澄清的方式选择
        2.3.2 Benzonse核酸酶处理条件优化
        2.3.3 超滤膜包的孔径选择(缓冲液为0.01MPB+0.1M NaCl)
        2.3.4 超滤的缓冲盐浓度的选择(300KD膜包)
        2.3.5 层析条件的摸索
            2.3.5.1 装柱
            2.3.5.2 分子筛填料(Sepharose4FF、6FF)使用条件摸索
            2.3.5.3 复合填料Capto Core700 使用条件的摸索
            2.3.5.4 亲和层析填料Cellufine Sulfate使用条件摸索
        2.3.6 流感病毒的灭活
            2.3.6.1 初次接种
            2.3.6.2 初次接种24小时检胚
            2.3.6.3 冷胚处理
            2.3.6.4 盲传一代
            2.3.6.5 盲传一代24小时检胚
            2.3.6.6 血凝试验
            2.3.6.7 结果判定
        2.3.7 二步层析Capto Q、Q Sepharose xl使用条件摸索
            2.3.7.1 BV69 流感病毒样在Capto Q、Q Sepharose xl进行层析
            2.3.7.2 H1N1 流感病毒样在Capto Q上进行层析
            2.3.7.3 BY流感病毒样在Capto Q上进行层析
            2.3.7.4 H3N2 流感病毒样在Capto Q上进行层析
    2.4 实验结果
        2.4.1 病毒收获液初步澄清的方式选择
        2.4.2 核酸酶处理的条件
        2.4.3 超滤膜包的孔径选择
        2.4.4 超滤的缓冲盐浓度的选择
        2.4.5 一步层析条件的摸索
            2.4.5.1 分子筛填料(Sepharose4FF、6FF)使用条件摸索
            2.4.5.2 复合填料Capto Core700 使用条件摸索
            2.4.5.3 亲和层析填料Cellufine Sulfate使用条件摸索
            2.4.5.4 灭活及灭活验证
            2.4.5.5 一步层析小结
        2.4.6 二步层次使用条件摸索
    2.5 总结与讨论
        2.5.1 总结
        2.5.2 讨论
        2.5.3 展望
参考文献
综述
    参考文献
致谢



本文编号：3784533