通过遗传转化技术提高酵母生防效力的方法研究
发布时间：2023-11-04 11:30
拮抗酵母作为果实采后重要的生物防治拮抗微生物,在取代或降低化学杀菌剂使用量,保证人体及动物健康、减小对环境污染等方面具有广阔的前景。但目前普通的拮抗菌很难达到甚至接近化学杀菌剂的抑菌效果,利用遗传转化技术定向改造拮抗酵母可有效提高其生防效力。本论文以Rho1蛋白和Ace-AMP1、AC-AMP2和MiAMP1三种抗菌肽为研究对象,通过其分别在酿酒酵母和毕赤酵母GS115菌株中的稳定遗传及表达;探究重组酿酒酵母rho1基因的过表达对CWI信号通路的影响以及对梨果实病害的防治效果,并揭示相关的抑菌机理;初步研究Ace-AMP1、AC-AMP2和MiAMP1三种抗菌肽重组毕赤酵母菌株的抑菌效果,同时对抗菌肽等外源基因转化非常规酵母(罗伦隐球酵母)的可能性进行探究。主要研究结论如下:1、重组酿酒酵母SC/rho1经过半乳糖诱导培养后rho1基因能实现稳定高效表达,同时对重组酵母细胞壁多糖组分分析显示:半乳糖诱导后重组酵母葡聚糖和几丁质在细胞壁中含量较野生型酵母显著上升,说明Rho1作为主调节因子,能显著激活CWI信号通路中参与细胞壁合成和肌动蛋白重排相关的基因(Pkc1、Fks1、Fks2、C...
【文章页数】：119 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
简写词对照表(Abbreviatiolls)
第一章 文献综述
1.1 前言
1.2 微生物防治
1.2.1 营养与空间竞争
1.2.2 诱导果实产生抗性
1.2.3 重寄生作用
1.2.4 分泌胞外水解酶等活性物质
1.3 遗传转化技术定向改造酵母
1.4 抗菌肽的研究进展及概述
1.4.1 抗菌肽的作用机理
1.4.2 抗菌肽在病害防治中的应用前景
1.5 细胞壁完整性信号通路(CWI)和Rho1蛋白概述
1.5.1 细胞壁完整性信号通路(CWI)
1.5.2 Rho1蛋白功能
1.6 本课题的研究意义及主要内容
第二章 重组酿酒酵母rho1基因表达及其对CWI信号通路的影响
2.1 前言
2.2 材料和方法
2.2.1 实验仪器
2.2.2 培养基与酵母菌株
2.2.3 试验试剂
2.2.4 实验方法
2.3 结果与分析
2.3.1 重组酵母SC/rho1诱导表达
2.3.2 CWI信号通路相关基因检测
2.3.3 重组酵母细胞壁多糖组分分析
2.4 讨论
第三章 重组酿酒酵母SC/rho1的生防效力分析和抑菌机理初探
3.1 前言
3.2 材料与方法
3.2.1 试验仪器
3.2.2 培养基与果实
3.2.3 酵母菌株和病原真菌
3.2.4 酵母细胞壁的制取
3.2.5 试验方法
3.3 结果与分析
3.3.1 活体重组酵母和灭活重组酵母对梨果实青霉病的直接抑制作用
3.3.2 活体重组酵母和灭活重组酵母对梨果实青霉病的诱导抗性作用
3.3.3 酵母果实伤口生长动态
3.3.4 酵母代谢产物对梨果实青霉病的抑制作用
3.3.5 酵母细胞壁浓度对梨果实青霉病抗性的影响
3.3.6 野生型与重组型酵母细胞壁诱导梨果实抗性的作用比较
3.3.7 重组酵母对梨果实抗性相关基因表达的影响
3.4 讨论
第四章 Ace-AMP1、AC-AMP2和MiAMP1表达载体构建及转化
4.1 前言
4.2 材料和方法
4.2.1 试验仪器
4.2.2 培养基
4.2.3 菌株和质粒
4.2.4 试验试剂
4.2.5 试验方法
4.3 实验结果与分析
4.3.1 Ace-AMP1、AC-AMP2和MiAMP1目的基因的优化和合成
4.3.2 Ace-AMP1、AC-AMP2和MiAMP1目的基因检测
4.3.3 目的基因与pPICZα A表达载体的构建
4.3.4 重组表达载体向毕赤酵母GS115的转化
4.4 小结
第五章 重组毕赤酵母GS115/Ace-AMP1、GS115/Ac-AMP2和GS115/MiAMP1抗菌肽的表达及抑菌效力评价
5.1 前言
5.2 材料和方法
5.2.1 试验仪器
5.2.2 培养基与果实
5.2.3 酵母菌株和病原菌
5.2.4 试验方法
5.3 实验结果
5.3.1 重组酵母抗菌肽基因检测
5.3.2 重组酵母抗菌肽Western-blot检测
5.3.3 重组酵母蛋白含量检测
5.3.4 抗菌肽对扩展青霉体外抑制影响
5.3.5 抗菌肽对梨果实青霉病的抑制作用
5.3.6 抗菌肽重组酵母对梨果实青霉病的抑制作用
5.4 讨论
第六章 罗伦隐球酵母表达系统初探
6.1 前言
6.2 材料和方法
6.2.1 试验仪器
6.2.2 培养基
6.2.3 菌株与质粒
6.2.4 试验试剂
6.2.5 试验方法
6.3 实验结果
6.3.1 GAP启动子和罗伦隐球酵母25S rDNA获取
6.3.2 GAP启动子和罗伦隐球酵母25S rDNA与载体构建
6.3.3 GAP启动子和罗伦隐球酵母25S rDNA表达载体的验证
6.4 讨论
第七章 结论与展望
7.1 主要研究结论
7.2 主要创新点
7.3 后续研究展望
参考文献
作者简介
本文编号：3860219
【文章页数】：119 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
简写词对照表(Abbreviatiolls)
第一章 文献综述
1.1 前言
1.2 微生物防治
1.2.1 营养与空间竞争
1.2.2 诱导果实产生抗性
1.2.3 重寄生作用
1.2.4 分泌胞外水解酶等活性物质
1.3 遗传转化技术定向改造酵母
1.4 抗菌肽的研究进展及概述
1.4.1 抗菌肽的作用机理
1.4.2 抗菌肽在病害防治中的应用前景
1.5 细胞壁完整性信号通路(CWI)和Rho1蛋白概述
1.5.1 细胞壁完整性信号通路(CWI)
1.5.2 Rho1蛋白功能
1.6 本课题的研究意义及主要内容
第二章 重组酿酒酵母rho1基因表达及其对CWI信号通路的影响
2.1 前言
2.2 材料和方法
2.2.1 实验仪器
2.2.2 培养基与酵母菌株
2.2.3 试验试剂
2.2.4 实验方法
2.3 结果与分析
2.3.1 重组酵母SC/rho1诱导表达
2.3.2 CWI信号通路相关基因检测
2.3.3 重组酵母细胞壁多糖组分分析
2.4 讨论
第三章 重组酿酒酵母SC/rho1的生防效力分析和抑菌机理初探
3.1 前言
3.2 材料与方法
3.2.1 试验仪器
3.2.2 培养基与果实
3.2.3 酵母菌株和病原真菌
3.2.4 酵母细胞壁的制取
3.2.5 试验方法
3.3 结果与分析
3.3.1 活体重组酵母和灭活重组酵母对梨果实青霉病的直接抑制作用
3.3.2 活体重组酵母和灭活重组酵母对梨果实青霉病的诱导抗性作用
3.3.3 酵母果实伤口生长动态
3.3.4 酵母代谢产物对梨果实青霉病的抑制作用
3.3.5 酵母细胞壁浓度对梨果实青霉病抗性的影响
3.3.6 野生型与重组型酵母细胞壁诱导梨果实抗性的作用比较
3.3.7 重组酵母对梨果实抗性相关基因表达的影响
3.4 讨论
第四章 Ace-AMP1、AC-AMP2和MiAMP1表达载体构建及转化
4.1 前言
4.2 材料和方法
4.2.1 试验仪器
4.2.2 培养基
4.2.3 菌株和质粒
4.2.4 试验试剂
4.2.5 试验方法
4.3 实验结果与分析
4.3.1 Ace-AMP1、AC-AMP2和MiAMP1目的基因的优化和合成
4.3.2 Ace-AMP1、AC-AMP2和MiAMP1目的基因检测
4.3.3 目的基因与pPICZα A表达载体的构建
4.3.4 重组表达载体向毕赤酵母GS115的转化
4.4 小结
第五章 重组毕赤酵母GS115/Ace-AMP1、GS115/Ac-AMP2和GS115/MiAMP1抗菌肽的表达及抑菌效力评价
5.1 前言
5.2 材料和方法
5.2.1 试验仪器
5.2.2 培养基与果实
5.2.3 酵母菌株和病原菌
5.2.4 试验方法
5.3 实验结果
5.3.1 重组酵母抗菌肽基因检测
5.3.2 重组酵母抗菌肽Western-blot检测
5.3.3 重组酵母蛋白含量检测
5.3.4 抗菌肽对扩展青霉体外抑制影响
5.3.5 抗菌肽对梨果实青霉病的抑制作用
5.3.6 抗菌肽重组酵母对梨果实青霉病的抑制作用
5.4 讨论
第六章 罗伦隐球酵母表达系统初探
6.1 前言
6.2 材料和方法
6.2.1 试验仪器
6.2.2 培养基
6.2.3 菌株与质粒
6.2.4 试验试剂
6.2.5 试验方法
6.3 实验结果
6.3.1 GAP启动子和罗伦隐球酵母25S rDNA获取
6.3.2 GAP启动子和罗伦隐球酵母25S rDNA与载体构建
6.3.3 GAP启动子和罗伦隐球酵母25S rDNA表达载体的验证
6.4 讨论
第七章 结论与展望
7.1 主要研究结论
7.2 主要创新点
7.3 后续研究展望
参考文献
作者简介
本文编号：3860219
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/hxgylw/3860219.html
