细菌β-淀粉酶异源表达及碳分解代谢物阻遏的研究

发布时间：2024-03-04 21:39

　　β-淀粉酶可以从淀粉和糖原的非还原性末端切断相隔的α-1,4-葡萄糖苷键,主要产物为麦芽糖。β-淀粉酶在食品和医药领域应用广泛,目前工业上使用的β-淀粉酶主要从植物中提取,生产成本较高,限制了β-淀粉酶的应用。相比之下,利用微生物生产β-淀粉酶更具优势,但由于产酶水平低下,一直未能实现工业化生产。因此,本研究分别在大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)表达系统中实现了巨大芽孢杆菌(Bacillus megatherium)来源β-淀粉酶基因amyM的高效异源表达并研究了重组酶酶学性质,定点突变amyM基因的分解代谢物响应元件(catabolite responsive element,CRE)缓解了重组β-淀粉酶表达过程中受到的碳分解代谢物阻遏效应(carbon catabolite repression,CCR),最后通过摇瓶发酵优化实现了β-淀粉酶的高产,为β-淀粉酶发酵生产的工业化提供了支撑。本论文主要内容和结果如下:1.B.megatherium 1514β-...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1-1大肠杆菌碳分解代谢物阻遏的机制[58]

江南大学硕士学位论文编码的α-葡萄糖苷酶由麦芽糖诱导表达，该酶能将麦芽菌的CCR机制菌为代表的革兰氏阴性菌株中，介导CCR效应的调控sinemonophosphate,cAMP)；环腺苷酸受体蛋白(cyc腺苷酸环化酶(adenylatecyclase,AC)；P....

图1-2枯草芽孢杆菌碳分解代谢物阻遏的机制[58]

第一章绪论杆菌的CCR效应中起关键作用的调节蛋白。研究表明保守，大部分含PTS转运系统的低GC含量革兰氏阳性[46]。NA上的顺式调控元件被称为分解代谢物响应元件(caNicholson等[63]最初在枯草芽孢杆菌α-淀粉酶基因am，将其进行定点突变后，葡萄....

图3-1片段xylR-Pxyl和amyM-6*His琼脂糖凝胶电泳分析

ilisWB600的序列信息，以其染色体如图3-1所示。经测序确认该扩增动子及其调控蛋白基因片段xylR-P公布的巨大芽孢杆菌β-淀粉酶基因CR扩增，获得大小约为1.6kb的β-淀，融合基因amyM-6*His全长165码蛋白的分子量为61kDa，肽....

图3-2(a)表达质粒pETMH0的构建和(b)pETMH0双酶切验证Fig3-2(a)ConstructionofexpressionplasmidpETMH0and(b)identificationofplasmidpETMH0注：M:DNAMarker;1:pETMH0/BglII+SalI

17(b)图3-2(a)表达质粒pETMH0的构建和(b)pETMH0双酶切验证Fig3-2(a)ConstructionofexpressionplasmidpETMH0and(b)identificationofplasmidpETMH0....

本文编号：3919215