维吉尼亚链霉菌诱变育种及发酵工艺优化的研究

发布时间：2024-06-12 02:31

　　维吉尼亚霉素(virginiamycin,简称VGM)是一种由维吉尼亚链霉菌(Streptomyces virginiae)经发酵产生的内脂环肽类的链阳性抗生素,由多种组分组成的化合物,主要是由巨环内脂类的M1因子和环状多肽类的S1因子构成。VGM因具有结构新颖、安全无毒,不易产生耐药突变株等特点,是一种不可多得的应用前景良好的动物饲料添加剂。目前我国每年大量进口该产品,使用成本较高,因此对维吉尼亚链霉菌进行诱变选育以及开展发酵工艺优化研究具有十分重要的社会效益与经济效益。本课题首先建立了一种高通量筛选方法,即利用24孔板作为诱变菌株的微型培养平台,再结合管碟法和高效液相色谱法(HPLC)作为维吉尼亚霉素检测和筛选方法,以期筛选高产VGM的突变株。管碟法简单方便易于观察,主要用于大量诱变菌株的初筛,可以快速提高筛选效率。HPLC检测方法准确灵敏,因此将其作为VGM的定量检测方法。其次,利用单因素实验确定24微孔板培养体系最佳发酵培养基装液量为1.25mL,最佳接种量为5%,最佳发酵时间为30h,最佳转速为240rpm,通过相关实验发现,采用24孔板的微量培养体系用于大量菌株的快速筛选是...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图３．１维吉尼亚霉素液相色谱图??

为８．５ｍｉｎ和１４．４ｍｉｎ，发酵液样品中的和ＳＷ呆留时间分别为，二者基本一致，??且没有明显的干扰峰，由此可以说明，以上方法可以用来检测ＶＧＭ含量。标准??品的分离色谱图（图３．１）与发酵液样品的分离色谱图（图３．２）如下。??ｔ：＼ｒｎ?以化牝?ｚｕ?ｍｕ／ｚｕｗｉｔｓｕｃ....

图３．?３维吉尼亚霉素含量的标准曲线??

?Ｔｉｍｅ?１１．６１９?ｈｔｅｎ．０２２］?＞??ＩＺＺ．??ｏ＇Ｔ－１?￣＇￣＇￣?２：５?￣＇￣＇￣?ｓ！〇?？?￣＇￣￣＇ｉｓ，?￣＇￣￣?１＾．０?￣＇￣?ｌｉｓ?￣＇￣＇￣?ｌｉｏ?￣￣＇￣?ｉｆｓ?￣＇￣＇￣?ｍｉｎ??图３．?２发酵样品液相色谱图??Ｆｉｇ３．２?....

图３．?２发酵样品液相色谱图??

３．?１．３维吉尼亚霉素ＨＰＬＣ检测的标准曲线??每次吸取ｌ〇ｕｌ不同浓度的标准溶液，用ＨＰＬＣ检测。以峰面积和ＶＧＭ质??量浓度（ｍｇ／Ｌ）分别作为横坐标，纵坐标，绘制标准曲线，如图３．３，在５？５０?ｍｇ／Ｌ??时，峰面积与维吉尼亚霉素组分含量呈现良好的线性关系，其回归方程为....

图３．?５藤黄微球菌抑菌圈??

将敏感菌在３７?＂Ｃ培养１６?ｈ，以１．５％接种量加入敏感菌培养基中，制备双碟。??以抑菌圈直径为纵坐标，ＶＧＭ标准品效价的对数为横坐标（Ｕ／ｍＬ）作标准曲线，??如图３．４，在１０￣６０Ｕ／ｍＬ?（４￣２５ｍｇ／Ｌ）时，抑菌圈与ＶＧＭ含量呈现良好的线??性关系，其回归方程为｝＾....

本文编号：3993089