青霉纤维素酶组份分离与纤维素生物质预处理研究

发布时间：2020-09-03 14:02

　　纤维素生物质是地球上最丰富的可再生资源,其资源化或能源化利用是目前国内外研究的热点。蔗渣作为一种大宗糖业固体废弃物,其开发利用正受到越来越多的关注。 Penicillium sp.T24-2是一株降解蔗渣能力较强的丝状真菌,其固态发酵所产粗酶液,经阴离子交换柱DEAE-Sepharose Fast Flow层析后,分离出两种β-葡萄糖苷酶。通过SDS-PAGE凝胶电泳分析,确定其分子质量约分别为20 kDa、35 kDa。已纯化的两种β-葡萄糖苷酶均为单亚基蛋白,其酶促最适反应温度分别为60℃、45℃;最适酶促反应pH值分别为pH4.5、pH5.0。对3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂测定还原糖方法的研究表明:酸、铵盐、镁盐等均对DNS法测定还原糖有严重的干扰作用,酸与OH~-结合生成水,铵盐易形成挥发性气体(如氨气等),镁盐可形成不溶性物质。对纤维素酶CMC酶活力测定方法进行研究,结果表明,酶稀释度、酶促反应温度、pH、反应时间、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)浓度等对CMC酶活力测定有重要影响。对碱处理蔗渣成分的研究表明,碱处理主要除去了蔗渣中的大部分中性洗涤剂溶出物以及一部分的半纤维素和木质素。采用稀碱对蔗渣进行预处理,研究发现:处理温度与时间,碱液的种类、浓度与添加量、以及某些盐类(如亚硫酸钠等)对处理后蔗渣的酶解效果有明显影响。选用强碱,在较高的处理温度、较长的处理时间、较高的浓度下,或在碱液中添加适当浓度的亚硫酸钠,可以大大提高处理后蔗渣的酶解效果。然而,碱处理蔗渣不适合Penicillium sp.T24-2固态发酵制备纤维素酶。
【学位单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2009
【中图分类】：S216.2
【部分图文】：

还原糖测定,CMC酶活,原酶,酶液

20406080100RelativeE陀扒1祀Dilution(ti眼)图2一10相对稀释度对CMC酶活测定的影响 F19.2一 10EffectoftheRelativeEmzymedilutiononCMCaseaetivitydetermination将原酶液稀释不同倍数，得到不同浓度的稀释酶液，测定各稀释酶液的CMC酶活力值，并根据相应的稀释度，计算原酶液的表观CMC酶活力，其计算公式如下:原酶液CMC酶活=稀释酶液CMC酶活x稀释倍数。

葡萄糖,图谱,粗酶液,分离纯化

馨馨鬓瓢瓢撇撇撇蒸蒸矍矍瓢瓢暴暴暴翌溺忿定资燕澎澎纂纂纂纂纂纂纂纂纂纂翼翼黝黝黝薰薰薰薰薰薰薰纂纂黝黝黝黝{蘸黝鬃鬓鬓图2一 16p一葡萄糖普酶 1505一PAGE电泳图谱 F19.2一 16SDS一 pAGEanalysisofp一glueosidasel (A:ProteinmarkB:p一 glucosidase1fromtube7lC:eellobiohydrolaseandp一 9lucosidasel)由图2一16可见，取第71号管样品进行505一聚丙烯酞胺凝胶电泳，对比 Profeinmaker，分离纯化所得p一葡萄糖营酶蛋白分子质量约为 20koa。由表2--4结果可见，分离纯化所得p一葡萄糖营酶相对于粗酶液纯化了2.76倍，酶的比活力由粗酶液的0.68!U/mg提高到 1.88!U/mg。另外，对第三个峰尾段分离液进行505一队GE电泳，发现除 20koa的p-葡萄糖昔酶外

电泳图谱,葡萄糖,粗酶液,分离纯化

2.76 3.24由图2一18结果可见，取第33管的样品进行505一聚丙烯酞胺凝胶电泳，对比 proteinmaker，分离纯化所得p一葡萄糖昔酶蛋白分子质量约为 35koa。由表2一结果可见，分离纯化所得p一葡萄糖营酶相对于粗酶液纯化了3.24倍，酶的比活力由粗酶液的 0.68IU/mg提高到 2.3IU/mg。2.2.4卜葡萄糖昔酶理化性质研究 (1)pH对p一葡萄糖昔酶酶活力及稳定性的影响如图2一19，pH对p一葡萄糖昔酶的酶活和稳定性的影响较大。p一葡萄糖昔酶I、11的最适酶促反应p日值分别为p日4.5、p日5.0;在p日5.0

【引证文献】