沼气发酵复合菌系及其在牛粪厌氧发酵中的应用

发布时间：2020-10-23 03:57

　　 以自然沼液为接种物,利用限制性培养技术,构建得到1组35℃下遗传稳定、产甲烷量高的沼气发酵复合菌系。利用16S rDNA克隆文库技术研究了该复合菌系的菌种组成多样性,并通过单因素试验和正交试验获得了该复合菌系的最佳培养条件。以该沼气发酵复合菌系为接种物,研究了在20L发酵体系中不同的接种量、物料浓度对沼气发酵的影响。同时,还对牛粪中不同N、P、K浓度对厌氧发酵产气的影响进行了研究。 1、继代培养结果表明,该复合菌系经过26代的培养能够稳定产气,各代间的产气情况和产气量差别不大。以该复合菌系作为接种物,10%的接种量接种于TS为5%的100mL沼气培养装置中,最高日产气量为1.6m3·m-3·d-1,最高日产甲烷量可达1.5 m3·m-3·d-1。通过单因素试验和正交试验得出该复合菌系以牛粪为底物最佳的发酵条件为接种量5%,TS为10%,培养温度35℃,pH自然。 2、利用16S rDNA克隆文库技术对复合菌系菌种组成多样性分析可知,该复合菌系中产甲烷古菌主要由甲烷袋状菌属(Methanoculleus sp.)、甲烷八叠球菌属(Methanosarcina mazeii)、产甲烷古菌(methanogenic archaeon)、广域古菌(Euryarchaeote)组成;细菌主要由消化球菌(Peptococcaceae bacterium)、拟杆菌属(Bacteroides sp.)、真杆菌(eubacterium)、纤维杆菌(Fibrobacteres bacterium)、假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、梭菌属(Clostridium sp.)、氨基杆菌(Aminobacterium colombiense)、月形单胞菌属(Selenomonas sp.)及未培养细菌(Uncultured bacterium)组成,说明该复合菌系是由多种功能不同的微生物类群组成且具有很高的多样性。 3、沼气发酵复合菌系在20L发酵体系中的试验结果表明,15%的接种量处理组总产气量最高,且总产甲烷量分别比5%、10%的处理组高37.4%和34.5%。5%的接种处理组的总产气量、总产甲烷量比对照提高3.1%和11.8%。综合考虑甲烷产生的时间、最高含量和总产甲烷量,放大培养的适宜接种量范围为15%。底物不同浓度试验表明TS为10%的底物浓度产气效果最好。 4、初始发酵料液中氮、磷、钾含量对沼气发酵产气影响较大,在底物氮、磷、钾浓度的基础上提高1倍的处理总产气量分别比基础试验组、二倍添加量试验组、三倍添加量试验组高2.4%、78.2%、78.7%,总产甲烷量分别比基础试验组、二倍添加量试验组、三倍添加量试验组高7.3%、96.4%、99.6%,提高2倍和3倍的处理接种后12h后产气,但3d后产气停止,气体中甲烷含量极低。
【学位单位】：黑龙江八一农垦大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2010
【中图分类】：S216.4
【部分图文】：

图 3-1 沼气复合菌系总 DNA 电泳图：Marker；1，2：沼气复合菌系总 DNophoretic analysis of total DNA of microrker; 1, 2: DNA products of microbial com烷古细菌 16S rDNA PCR 扩增引物扩增沼气复合菌系 16S rDNA小在 1500bp 左右，见图 3-2。古菌理想。

的环境中分别分离得到了若干不同的产甲烷古菌[133-135]。张翔、陆清忠等利用驯化的菌群入沼气池内增加池内微生物菌群的数量来提高产气率[136]。越来越多的研究结果表明，在发酵过程中沼气发酵微生物的重要作用，初始阶段加入一定量的微生物作为接种物，对提产气量有重要的作用[137-139]。但是，以往的关于沼气发酵接种物的研究，都是直接把沼液化后作为接种物接种到发酵体系中，接种物的微生物组成不清楚，接种物不能稳定遗传的研究对象进行机理性研究。如果能够得到遗传稳定、高效产甲烷的复合菌系，既可以解究问题，又可以用于沼气的生产实践。本文就是按照上述思路，在实验室条件下利用限制构建了 1 组 35℃条件下遗传稳定的、产甲烷量高的沼气发酵复合菌系，并对其培养条件料与方法验装置验所用的沼气发酵复合菌系装置和集气装置由两部分组成，如图 2-1 所示。反应器置于恒温控制，选用 250 mL 培养瓶作为发酵装置，瓶口用适当大小的不透气橡皮塞塞紧，在用点滴管导气连接到一个量筒中，将集气量筒倒扣于盛满水的容器内，采用排水集气法收

图 3-1 沼气复合菌系总 DNA 电泳图M：Marker；1，2：沼气复合菌系总 DNAectrophoretic analysis of total DNA of microbialMarker; 1, 2: DNA products of microbial comm甲烷古细菌 16S rDNA PCR 扩增结用引物扩增沼气复合菌系 16S rDNA，大小在 1500bp 左右，见图 3-2。古菌 1为理想。
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本文编号：2852521