mcrA基因的克隆及其在分析沼气池产甲烷菌多样性中的应用研究

发布时间：2020-12-08 03:31

　　产甲烷菌是严格厌氧菌,利用传统微生物学研究方法对其进行研究费时费力,而近代发展起来的现代分子生物学技术,则避免了这些缺点和不足。现代分子生物学技术以其独特的优势在环境微生物的研究中发挥着越来越重要的作用。本实验改进了沼气池微生物总DNA的提取方法,经过检验,可满足本研究的需要。本研究通过对产甲烷菌特有mcrA基因的RFLP分析、mcrA基因的荧光定量分析以及16S rDNA的DGGE分析等分子生物学方法对农村户用沼气池中的产甲烷菌群落结构和数量进行了研究。首先扩增了沼气池中产甲烷菌甲基辅酶M还原酶α亚基（mcrA）基因片段,建立产甲烷菌mcrA基因文库,对阳性克隆用限制性内切酶PstⅠ进行RFLP分析,酶切后1、2、3、4号沼气池分别得到3、4、4、2种OTU（operational taxonomic unit）,从每一类型OTU中选取1-2个单克隆测序后进行系统进化分析。结果表明,农村户用沼气池中存在不同的产甲烷菌类群,1号沼气池中主要有Methanogenium、Methanocorpusculum和Methanosarcina;2号池中有Methanogenium、Methan... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

辅酶M和甲基化合物到甲基辅酶M的转变A:辅酶M到甲基辅酶M的转变

从后续的实验分析来看可以满足实验的需求，如图3.3 所示。3.3.4 DGGE 分析回收后的 PCR 产物按照 3.2.4 的操作进行 DGGE 分析，如图 3.4 所示。图 3.3 回收后的 16S rDNA 电泳图Fig 3..3 Photograph of 16S rDNA after gel extractionM: 100bp DNA maker

.4 不同沼气池中产甲烷菌 16S rDNA 的 DGGE 图谱ngerprint of 16S rDNA of the methanogen in different biogapresent the samples of No.1-4 biogas digester respectively.

【参考文献】：
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本文编号：2904380