北海红树林根际土壤放线菌及一株微小杆菌的分离与鉴定

发布时间：2020-05-24 05:04

【摘要】：红树林所处的环境具有地域特异性。环境的特殊性为微生物多样性和生物活性的研究提供了优良平台。本论文以北海红树林根际土壤样品为研究对象，从两个方面进行研究。其一，通过对样品处理方法的探索，采用分散与差速离心的方法进行前处理，同时结合使用不同类型的放线菌分离培养基，如ISP系列培养基、脯氨酸培养基、M系列培养基、改良高氏一号和二号培养基等18种培养基，共分离得到42株放线菌，其中尤以高氏培养基、ISP系列的培养基分离的菌种为多；对不同样品处理方法进行评价，结果表明，DDC处理法分离得到的菌株最多；对分离得到的放线菌进行生物学形态观察；对其中一株可能有淀粉酶活性的放线菌，采用分子生物学手段提取基因组DNA进行16S rDNA序列分析，并进行生理生化、肽聚糖型、磷酸类脂及全细胞糖和氨基酸分析，结果表明：这株菌属于链霉菌属；有淀粉酶活性；无纤维素酶活性；其肽聚糖型为羟基乙酰基型；通过薄层层析，显示为PⅣ型磷酸类脂；全细胞糖分析为C类糖型；全细胞氨基酸分析为I型胞壁。其二，分离放线菌的过程中，于ISP5培养基上偶然分离出一株微小杆菌属菌，生物信息学结果表明该菌株16S rDNA序列与亲缘关系较近的Exiguobacteriumarabatum strain APT13a （登录号KC519397.1）菌株比对后，相似性为96%，构建该菌株的系统进化树，对这株菌进行生理生化、肽聚糖型、磷酸类脂及全细胞糖和氨基酸分析，结果表明：这一菌株无淀粉酶活性；无纤维素酶活性；其肽聚糖型为羟基乙酰基型；通过薄层层析，，显示为PⅤ型磷酸类脂；全细胞糖分析为D类糖型；全细胞氨基酸分析结果有待进一步确定。本研究为红树林地区微生物资源的研究提供了实验依据。
【图文】：

菌落形态,培养基,菌落形态,放线菌

D M6 培养基 E M10 培养基 F M13 培养基J ISP4 培养基 K 改良高氏一号 L 无机盐琼脂G M2 培养基 H M4 培养基 I M5 培养基

菌落形态,菌落形态,菌落,放线菌

图 2.3 显微镜下观察的菌落形态Fig 2.3 Microscope photo of typical strain结果显示放线菌菌落一般为圆形、表面平滑或者中部有褶皱，干燥坚实难挑取，菌落颜色以白色、淡黄色、灰色为主，镜检显示菌落周围呈辐射状。革兰氏染色镜检结果显示为紫色，属于革兰氏阳性菌。2.4.3 DDC 法与传统法在分离红树林土壤放线菌中的差异性实验同时对其他样品预处理方法包括传统稀释法和干热处理法与 DDC 法进行对比，对比结果如图所示：
【学位授予单位】：广西民族大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：S714.3

【参考文献】