四种重金属离子对曲壳藻生长情况和抗氧化酶活性的影响
本文关键词:四种重金属离子对曲壳藻生长情况和抗氧化酶活性的影响,,由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】:重金属来源广泛,具有较强的富集性,对环境以及生命机体造成严重的损害,是当今社会普遍关注的重点环境问题。硅藻对环境变化敏感,可以指示水体重金属污染。以往研究主要集中在浮游藻类上,底栖硅藻生境与浮游藻类不同,要更全面的了解重金属对水生生态系统的影响,就需要对底栖硅藻进行研究。本文通过纯化培养淡水底栖硅藻曲壳藻(Achnanthes kryophila),使用重金属进行单一和复合急性毒性实验,并测量A.kryophila的生长量、SOD活性、CAT活性及MDA含量并计算96h EC50值,通过分析,为A.kryophila作为工具对四种重金属Cd~(2+)、Cu~(2+)、Hg~(2+)和Pb~(2+)的生物毒性进行评价提供基础数据和依据。本研究得出3项重要结果:1.单一重金属Cd~(2+)、Cu~(2+)、Hg~(2+)和Pb~(2+)对A.kryophila生长及抗氧化酶活性的影响在Cd~(2+)、Cu~(2+)、Hg~(2+)和Pb~(2+)胁迫下,A.kryophila的96h EC50值分别为:0.984 mg×L 1、1.589 mg×L 1、0.747 mg×L 1、12.916 mg×L 1,Cd~(2+)和Hg~(2+)对A.kryophila的毒性为极高毒,Cu~(2+)对A.kryophila的毒性为高毒,Pb~(2+)对A.kryophila的毒性为中毒,毒性大小依次排列为Hg2Cd~(2+)Cu~(2+)Pb~(2+);四种重金属对A.kryophila细胞生长起着低促高抑的作用,Cd~(2+)、Cu~(2+)、Hg~(2+)和Pb~(2+)浓度分别为0.1 mg×L 1、0.02 mg×L 1、0.05 mg×L 1和0.5 mg×L 1时,细胞生长量达到最大值,出现显著的毒性兴奋效应,在Cd~(2+)、Cu~(2+)、Hg~(2+)和Pb~(2+)浓度分别为大于0.15 mg×L 1、0.08 mg×L 1、0.1 mg×L 1和1.0 mg×L 1时,对藻类生长呈抑制作用;A.kryophila可溶性蛋白质含量随着胁迫浓度增大先升高后下降,Cd~(2+)、Cu~(2+)、Hg~(2+)和Pb~(2+)胁迫下最大值分别为4.6 mg×(5×105 cells) 1、6.0 mg×(5×105 cells) 1、4.5 mg×(5×105cells) 1、6.6 mg×(5×105 cells) 1;超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(cat)活性在四种单一重金属胁迫下,低浓度时变化幅度缓慢,之后随着胁迫浓度的增大呈上升-下降的趋势,cd~(2+)、cu~(2+)、hg~(2+)和pb~(2+)胁迫下sod活性最高值分别为807.8u×mg 1、1027.6u×mg 1、1081.3u×mg 1、1193.9u×mg 1,cat活性最高值分别为1.3u×mg 1、2.1u×mg 1、1.4u×mg 1、3.0u×mg 1;丙二醛(mda)含量随着胁迫浓度增高逐渐增大,四种重金属的变化趋势大体相同,cd~(2+)、cu~(2+)、hg~(2+)和pb~(2+)浓度分别为9.6mg×l 1、9.6mg×l 1、20mg×l 1和100mg×l 1时,mda含量最大分别为8.33nmol×mg 1、12.56nmol×mg 1、7.76nmol×mg 1、15.87nmol×mg 1。2.复合重金属cd~(2+)、cu~(2+)、hg~(2+)和pb~(2+)对a.kryophila生长及抗氧化酶活性的影响复合重金属cd~(2+)、cu~(2+)、hg~(2+)和pb~(2+)联合作用下,对a.kryophila表现为协同作用,在胁迫浓度为4tu时,最大抑制率为91.8%;复合重金属对a.kryophila细胞生长起着低促高抑的作用,连续暴露4天后,复合污染浓度为0.25tu时,达到最大生长量101×104cells×ml 1;a.kryophila藻细胞的可溶性蛋白质含量、sod、cat、跟单一重金属胁迫趋势线基本相同,范围值稍小,随着胁迫浓度的增加先升高后下降,可以看出重金属cd~(2+)、cu~(2+)、hg~(2+)和pb~(2+)无论是单一还是复合作用于a.kryophila,其毒性机制体现为藻细胞内大分子物质蛋白质和抗氧化系统遭受不同程度的破坏;mda的含量随胁迫浓度增加而增大,藻细胞受到严重的破损。3.a.kryophila分离纯化通过4种分离方法对比分析,水滴分离法和平板画线法相结合容易分离得到纯种藻,此方法虽然复杂,但可靠性高,在本实验中使用水滴平板画线法分离两次就能得到纯种的a.kryophila,再进行扩大培养得到试验藻种。本研究所得出的结论:1.不同重金属对A.kryophila的毒性不同,但是低浓度均表现出毒性兴奋效应。2.在四种重金属联合胁迫下,呈协同抑制作用。3.A.kryophila对水体重金属含量变化反映灵敏,可利用A.kryophila对四种重金属Cd~(2+)、Cu~(2+)、Hg~(2+)、Pb~(2+)的生物毒性进行评价。4.经过多次A.kryophila分离纯化培养实验对比,发现利用改良后的水滴平板画线法分离纯化出纯藻种A.kryophila效果较好。
【关键词】:重金属 胁迫 生长 抗氧化酶 A.kryophila 纯化
【学位授予单位】:贵州师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:X173
【目录】:
- 摘要5-8
- ABSTRACT8-12
- 1. 绪论12-23
- 1.1 硅藻的概述12-13
- 1.2 硅藻的分离和纯化培养13-15
- 1.2.1 硅藻的分离13-14
- 1.2.2 硅藻的纯化培养14-15
- 1.3 重金属概述及水体重金属污染概述15-19
- 1.3.1 重金属概述15-16
- 1.3.2 水体重金属污染现状16-19
- 1.4 硅藻与重金属19-21
- 1.4.1 硅藻对水体重金属指示作用19-20
- 1.4.2 重金属对硅藻的毒理效应20-21
- 1.5 研究目的及意义21-22
- 1.6 本文的创新点22-23
- 2. A.kryophila的分离和纯化23-29
- 2.1 实验材料23-24
- 2.1.1 样品采集23
- 2.1.2 实验仪器23
- 2.1.3 培养基制备23-24
- 2.2 实验方法24-25
- 2.2.1 硅藻的分离纯化24-25
- 2.2.2 硅藻的扩大培养25
- 2.3 结果与分析25-27
- 2.3.1 四种分离方法分离A.kryophila25-27
- 2.3.2 A.kryophila的生长曲线27
- 2.4 讨论27-28
- 2.5 结论28-29
- 3. 单一重金属对A.kryophila的急性毒性实验29-39
- 3.1 实验材料29-30
- 3.1.1 试验藻种29
- 3.1.2 实验仪器29-30
- 3.1.3 实验试剂30
- 3.2 实验方法30-31
- 3.2.1 藻类单一急性毒性实验30
- 3.2.2 抗氧化酶活性的测定30-31
- 3.2.3 数据分析31
- 3.3 结果与分析31-36
- 3.3.1 单一重金属Cd~(2+)、Cu~(2+)、Hg~(2+)和Pb~(2+)胁 迫条件下A.kryophila的细胞生长31-32
- 3.3.2 单一重金属Cd~(2+)、Cu~(2+)、Hg~(2+)和Pb~(2+)胁迫下A.kryophila抗氧化酶活性的影响32-35
- 3.3.3 单一重金属Cd~(2+)、Cu~(2+)、Hg~(2+)和Pb~(2+)胁迫下A.kryophila丙二醛MDA含量35-36
- 3.4 讨论36-38
- 3.5 结论38-39
- 4. 复合重金属对A.kryophila的急性毒性实验39-47
- 4.1 实验材料39-40
- 4.1.1 试验藻种39
- 4.1.2 实验仪器39-40
- 4.1.3 实验试剂40
- 4.2 实验方法40-42
- 4.2.1 藻类复合急性毒性实验40-41
- 4.2.2 抗氧化酶活性的测定41
- 4.2.3 数据分析41-42
- 4.3 结果与分析42-46
- 4.3.1 复合重金属Cd~(2+)、Cu~(2+)、Hg~(2+)和Pb~(2+)胁 迫条件下A.kryophila的细胞生长42-43
- 4.3.2 复合重金属Cd~(2+)、Cu~(2+)、Hg~(2+)和Pb~(2+)胁迫下A.kryophila抗氧化酶活性的影响43-45
- 4.3.3 复合重金属Cd~(2+)、Cu~(2+)、Hg~(2+)和Pb~(2+)胁迫下A.kryophila丙二醛MDA含量45-46
- 4.4 讨论46-47
- 4.5 结论47
- 5. 结论和展望47-49
- 5.1 主要结论47-48
- 5.2 研究展望48-49
- 参考文献49-56
- 硕士学习期间发表论文及参加课题一览表56-58
- 致谢58-59
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