百草枯、胡桃醌对萼花臂尾轮虫和卜氏晶囊轮虫的毒理效应研究
发布时间：2023-06-04 04:08
以水生动物作为受试动物来评价药物的毒性效应近年来已逐步成为国际上环境科学与水域生态学领域的研究热点。轮虫是浮游动物的主要类群之一,以其繁殖速度快、生活周期短和对毒物敏感性高的优点而经常应用于生态毒理学研究中。百草枯(Paraquat)是一种有机杂环类除草剂,胡桃醌(Juglone)是一种从核桃楸(Juglans mandshurica Maxim)或者核桃(Juglans regia L)中提取出的萘醌类物质,这两种药物都能诱导机体形成过量的活性氧簇(reactive oxygen species,ROS),从而产生氧化毒性效应。本文选用两种不同特性的轮虫作为试验材料——一种是目前研究已相对比较广泛的萼花臂尾轮虫(Brachionus calyciflorus),另一种是具有特殊生活史和表型多态性的卜氏晶囊轮虫(Asplachna brightwelli)考察两者对百草枯和胡桃醌的敏感程度,并探究两种药物的作用机理。在此基础上,本文还通过cDNA末端快速克隆(RACE,rapid-amplification of cDNA ends)技术克隆出卜氏晶囊轮虫的hsp70基因全长,并在此基...
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
1.1 生态毒理学与水生态毒理学
1.1.1 概念简述
1.1.2 水生态毒理学的国内外研究概况
1.2 轮虫在生态毒理学研究中的应用
1.2.1 轮虫简述
1.2.2 萼花臂尾轮虫与卜氏晶囊轮虫基本特征的比较
1.2.3 轮虫作为毒理学受试动物的优势
1.2.4 轮虫作为毒理学受试动物的研究历史
1.2.5 轮虫应用于生态毒理学的指标参数
1.3 轮虫相关分子生物学研究进展
1.3.1 HSP70的特点和抗氧化作用研究
1.3.2 轮虫分子生物学研究概况
1.4 百草枯与胡桃醌的毒理学研究基础
1.5 本文的研究目的与意义
1.5.1 研究目的
1.5.2 研究意义
1.5.3 技术路线
第2章 百草枯、胡桃醌对萼花臂尾轮虫和卜氏晶囊轮虫的急性毒理效应研究
2.1 材料与方法
2.1.1 轮虫的采集、培养方法
2.1.2 主要试验仪器
2.1.3 试验药品的配置
2.1.4 轮虫的试验培养
2.1.5 数据分析
2.2 结果与分析
2.2.1 百草枯对萼花臂尾轮虫的急性毒性试验结果
2.2.2 百草枯对卜氏晶囊轮虫的急性毒性试验结果
2.2.3 胡桃醌对萼花臂尾轮虫的急性毒性试验结果
2.2.4 胡桃醌对卜氏晶囊轮虫的急性毒性试验结果
2.3 讨论
第3章 百草枯、胡桃醌对萼花臂尾轮虫和卜氏晶囊轮虫的生长发育各阶段历时的影响
3.1 材料与方法
3.1.1 轮虫的采集与培养
3.1.2 主要试验仪器
3.1.3 试验药品的配置
3.1.4 单“克隆”培养试验
3.1.5 试验各终点的计算方法
3.2 结果与分析
3.2.1 百草枯和胡桃醌对萼花臂尾轮虫和卜氏晶囊轮虫寿命和繁殖的影响
3.2.2 百草枯对萼花臂尾轮虫生命周期各主要发育阶段历时的影响
3.2.3 百草枯对卜氏晶囊轮虫生命周期各主要发育阶段历时的影响
3.2.4 胡桃醌对萼花臂尾轮虫生命周期各主要发育阶段历时的影响
3.2.5 胡桃醌对卜氏晶囊轮虫生命周期各主要发育阶段历时的影响
3.3 讨论
第4章 卜氏晶囊轮虫hsp70基因克隆和功能分析
4.1 材料与方法
4.1.1 主要试验仪器
4.1.2 轮虫总RNA的提取(Trizol法)
4.1.3 RNA质量测定
4.1.4 RNA逆转录
4.1.5 目的基因兼并引物设计
4.1.6 目的基因PCR扩增
4.1.7 目的基因PCR产物的割胶回收
4.1.8 连接PMDTM-19T载体
4.1.9 菌液PCR验证
4.1.10 测序比对
4.1.11 cDNA末端快速扩增技术(RACE)扩增基因全长
4.1.12 目的基因生物信息学分析
4.1.13 构建系统进化树
4.2 结果与分析
4.2.1 Asphsp70核苷酸序列分析
4.2.2 HSP70多重序列比对
4.2.3 Asphsp70系统进化树
4.3 讨论
第5章 百草枯、胡桃醌对萼花臂尾轮虫和卜氏晶囊轮虫hsp70表达的影响研究
5.1 材料与方法
5.1.1 主要试验仪器
5.1.2 荧光定量PCR
5.1.3 数据分析
5.2 结果与分析
5.3 讨论
小结与展望
参考文献
在读期间发表的学术论文及研究成果
致谢
本文编号：3830659
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
1.1 生态毒理学与水生态毒理学
1.1.1 概念简述
1.1.2 水生态毒理学的国内外研究概况
1.2 轮虫在生态毒理学研究中的应用
1.2.1 轮虫简述
1.2.2 萼花臂尾轮虫与卜氏晶囊轮虫基本特征的比较
1.2.3 轮虫作为毒理学受试动物的优势
1.2.4 轮虫作为毒理学受试动物的研究历史
1.2.5 轮虫应用于生态毒理学的指标参数
1.3 轮虫相关分子生物学研究进展
1.3.1 HSP70的特点和抗氧化作用研究
1.3.2 轮虫分子生物学研究概况
1.4 百草枯与胡桃醌的毒理学研究基础
1.5 本文的研究目的与意义
1.5.1 研究目的
1.5.2 研究意义
1.5.3 技术路线
第2章 百草枯、胡桃醌对萼花臂尾轮虫和卜氏晶囊轮虫的急性毒理效应研究
2.1 材料与方法
2.1.1 轮虫的采集、培养方法
2.1.2 主要试验仪器
2.1.3 试验药品的配置
2.1.4 轮虫的试验培养
2.1.5 数据分析
2.2 结果与分析
2.2.1 百草枯对萼花臂尾轮虫的急性毒性试验结果
2.2.2 百草枯对卜氏晶囊轮虫的急性毒性试验结果
2.2.3 胡桃醌对萼花臂尾轮虫的急性毒性试验结果
2.2.4 胡桃醌对卜氏晶囊轮虫的急性毒性试验结果
2.3 讨论
第3章 百草枯、胡桃醌对萼花臂尾轮虫和卜氏晶囊轮虫的生长发育各阶段历时的影响
3.1 材料与方法
3.1.1 轮虫的采集与培养
3.1.2 主要试验仪器
3.1.3 试验药品的配置
3.1.4 单“克隆”培养试验
3.1.5 试验各终点的计算方法
3.2 结果与分析
3.2.1 百草枯和胡桃醌对萼花臂尾轮虫和卜氏晶囊轮虫寿命和繁殖的影响
3.2.2 百草枯对萼花臂尾轮虫生命周期各主要发育阶段历时的影响
3.2.3 百草枯对卜氏晶囊轮虫生命周期各主要发育阶段历时的影响
3.2.4 胡桃醌对萼花臂尾轮虫生命周期各主要发育阶段历时的影响
3.2.5 胡桃醌对卜氏晶囊轮虫生命周期各主要发育阶段历时的影响
3.3 讨论
第4章 卜氏晶囊轮虫hsp70基因克隆和功能分析
4.1 材料与方法
4.1.1 主要试验仪器
4.1.2 轮虫总RNA的提取(Trizol法)
4.1.3 RNA质量测定
4.1.4 RNA逆转录
4.1.5 目的基因兼并引物设计
4.1.6 目的基因PCR扩增
4.1.7 目的基因PCR产物的割胶回收
4.1.8 连接PMDTM-19T载体
4.1.9 菌液PCR验证
4.1.10 测序比对
4.1.11 cDNA末端快速扩增技术(RACE)扩增基因全长
4.1.12 目的基因生物信息学分析
4.1.13 构建系统进化树
4.2 结果与分析
4.2.1 Asphsp70核苷酸序列分析
4.2.2 HSP70多重序列比对
4.2.3 Asphsp70系统进化树
4.3 讨论
第5章 百草枯、胡桃醌对萼花臂尾轮虫和卜氏晶囊轮虫hsp70表达的影响研究
5.1 材料与方法
5.1.1 主要试验仪器
5.1.2 荧光定量PCR
5.1.3 数据分析
5.2 结果与分析
5.3 讨论
小结与展望
参考文献
在读期间发表的学术论文及研究成果
致谢
本文编号：3830659
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