欧文氏杆菌CXJZ95-198非纤维素降解特性及manA基因的克隆研究

发布时间：2024-05-28 21:55

　　生物法提取草本纤维能有效降低化学方法对环境造成的严重污染,降低生产成本,提高产品质量,是草本纤维利用的发展方向。甘露聚糖酶在非纤维素降解中具有重要作用,在造纸、纺织、食品、医药、石油等领域具有广阔的应用前景。 E.carotovora CXJZ95—198是迄今报道草本纤维提取效率最高的菌种。本文对该菌种的单糖利用、草本纤维提取过程中非纤维素物质脱除规律与方式等进行了深入研究;并对其manA基因进行了克隆、生物信息学分析与表达研究。结果如下: 该菌株嗜好甘露糖,使精制苎麻纤维中不含甘露糖,甘露聚糖酶在该菌株的草本纤维原料生物提取过程中发挥了重要的作用。草本纤维原料接种该菌种后,通过“非纤维素物质培养菌-菌分泌酶-酶降解非纤维素物质”的螺旋式生化反应,降解非纤维素物质。草类原料发酵液糖类、不溶性有机物等在发酵6—8hr达到最高,发酵液中大分子和不溶性物质占有机质总量的90%以上,发酵过程可以脱除草本纤维原料重量8%—11%的非纤维素物,能使原料中的非纤维素物质发生块状崩溃而脱落。进一步证实了刘正初先生提出的“块状崩溃”假说。 采用优化的Sau3AI部分酶切条件,获...

【文章页数】：90 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图2.1菌种CXJZ95一198具有甘露聚糖酶活性(图左)和果胶酶活性(图右)

嗜好甘露糖、半乳糖。该菌种在果胶、甘露聚糖、木聚糖等筛选培养基上都能出现很明显的透明圈，证明该菌种具有较强的相关酶活性(见图2.1)。谭秀山、李宝坤对该菌株胞外果胶酶、木聚糖酶和甘露聚糖酶活性检验与这一结果一致(谭秀山，2004;李宝坤，2005)。表2.1菌种cxjz95一19....

图3.1基因组文库的构建Fig.3.1Theeonstruetionofgeno皿ielibraryNote:ThesizesofthereeombinedPlasmidsvariedwiththesizesoftheinsertedfra卿ents.

中国农业科学院博士论文第三章Cxzj95一198甘露聚糖酶基因的克隆与表达研究种引物的解链温度(Tnl)为56一58℃。考虑到高保真DNA聚合酶刀几2的DNA聚合速度以及保真性的要求，我们在亚克隆时适当增加了代R的延长时间滚3.2)。反应体系为4u0l。扩增完成以后进行琼脂糖凝胶....

图3.2表达载体的构建Fig.3.2TheeonstuetionofexPerssingvectosrNote:Thesizesofthereeombinedplasmidsvaried贾iththesizesoftheinsertedfra卿ents.酸脂酶消化3n0如，然后采用琼脂糖凝胶回收试剂盒回收

otvoarCXJZ95一198基因组NDA不同限制性内切酶198genomieDNAdigestedwithdieffrentendoerstri:geno而eDNAof.Eacorotvoar，3ands:geno而eeaorotvoradigestedwithSau3AI分....

图3.5.EeaorotvoraCXJZ95一198基因组DNA部分酶切凝胶电泳(0.8%agarose)

CXJZ95一198基因组NDA不同限制性内切nomieDNAdigestedwithdieffrentendoersteDNAof.Eacorotvoar，3ands:geno而evoradigestedwithSau3AI露聚糖酶基因的核营酸序列长度分子量也在25一55KD之....

本文编号：3983781