基于信号放大策略的免标记多功能核酸适配体传感体系构筑及其分析应用

发布时间：2024-02-24 19:54

　　本论文以核酸适配体为识别元件,以小檗碱为荧光探针,引入核酸工具酶、纳米材料、杂交链反应等信号放大技术及分子逻辑门技术,构建了免标记的生物传感体系并将其应用于环境中多种物质的分析检测,其主要研究内容如下:1.概述了核酸适配体的特征、筛选(SELEX)及其传感技术,并着重介绍了近年来基于信号放大策略的适配体传感体系检测技术及研究进展,在此基础上提出本论文的立题背景,研究内容和创新之处。2.以小檗碱为荧光探针构建了基于酶辅助放大策略免标记的核酸适配体荧光传感体系并用于河豚毒素的分析检测,河豚毒素(TTX)可与其核酸适配体特异性结合,并引起其构型由单链转换成颈环结构,基于小檗碱与单链寡核苷酸和颈环结构之间的作用差异可引起体系荧光强度的变化,加入核酸外切酶Ⅰ后,由于核酸外切酶Ⅰ可特异性剪切单链DNA,明显减小了检测体系的背景信号从而实现高选择性、高灵敏检测河豚毒素,在最佳的实验条件下,得到河豚毒素的检测线性范围为0.03nM⁶000 nM,方法的检出限为11.0 pM,远低于目前已报道的方法。与此同时我们对酶辅助方法与免酶方法进行了比较,在免酶体系中,小檗碱/TTX-适配体...

【文章页数】：191 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1.1核酸适配体筛选示意图[22]

基于信号放大策略的免标记多功能核酸适配体传感体系构筑及其分析应用4定的分离技术，分离出可以与靶分子特异性结合的核酸适配体，通过PCR扩增后分离，对得到的序列再次筛选，并使其以指数形式富集，经过9-11轮的筛选富集，获得与靶标分子特异性结合的核酸适配体[22]，见图1.1。图1.1....

图1.2单克隆表面显示-SELEX技术的工作原理[24]

第一章绪论5图1.2单克隆表面显示-SELEX技术的工作原理[24]。Fig.1.2MonoclonalsurfaceshowingSELEXtechnology[24].首先，将具有正向引物功能化珠子(F-Primer珠子)经统计学稀释的ssDNA文库分隔为单分子水平的油包水小....

图1.3核酸适配体与目标物的结合模式：(A)包埋型；(B)单位点结合型；(C)双位点结合型；(D)

一对适配体，一个捕获靶标的探针和另一个指示信号功能的探针夹在中间，捕获探针通常固定在固体支持物(例如电极，玻璃片，纳米材料)的表面上，而信号探针通常与信号传导部分(例如荧光团，酶或纳米颗粒)结合，一般来说，捕获探针和信号探针具有不同的核酸序列，如果靶标(例如二聚体)含有两个....

图1.4采用末端带有MB标记的适配体修饰金电极和互补DNA(cDNA)构建

第一章绪论9图1.4采用末端带有MB标记的适配体修饰金电极和互补DNA(cDNA)构建检测AFB1的电化学适配体传感器示意图[44]。Fig.1.4SchematicdiagramoftheelectrochemicalaptasensorforAFB1detectionbyus....

本文编号：3909539