漂移除草剂高效降解菌群筛选及性质的研究

发布时间：2024-03-14 03:36

　　北五味子是东北地区重要的地道药材之一。五味子人工园和人工抚育半野生园受到周边地块喷施除草剂漂移造成的危害已日趋严重。其中,影响最大的两种农药为大豆田喷施广灭灵封闭药、玉米田喷施2,4-D丁酯农药。本研究分别以两种农药为唯一碳源,培养及筛选这两种农药的高效降解菌株,并分析菌的生物学特点及降解酶分布特点。 1.分别从长期遭受广灭灵、2,4-D丁酯农药漂移危害的土壤中分离纯化出对相应农药具有降解作用的细菌,根据土壤中农药浓度和筛选时以相应农药为唯一碳源时农药浓度的不同,分离、筛选出广灭灵、2,4-D丁酯降解菌株各九株。基于生物测定法测定农药含量,对各菌株的降解率进行了分析,其中广灭灵高效降解菌株G8的降解率为55.6%,2,4-D丁酯高效降解菌株D8的降解率为53.2%。多种菌混合可明显促进广灭灵或2,4-D丁酯降解。 2.对菌株G8、D8进行了常规形态学观察及电镜观察。在此基础上,进一步利用CTAB法提取降解菌株的总DNA,利用细菌16SrDNA通用引物扩增出了细菌核糖体区特异片段,并进行了克隆测序。经序列分析,结合形态学特点,鉴定广灭灵降解菌菌株G8为甲基菌属细菌,2,4-D丁酯降解菌菌...

【文章页数】：46 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
目录
1 绪论
    1.1 主要漂移除草剂的研究概况
        1.1.1 异恶草酮的研究概况
        1.1.2 2,4-D丁酯的研究概况
    1.2 漂移除草剂的生物测定法
    1.3 变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术
    1.4 本研究的意义
2 材料与方法
    2.1 实验试剂与设备
        2.1.1 取材
        2.1.2 实验所需的药品及试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 农药降解菌的筛选、富集及纯化
        2.2.2 除草剂广灭灵、2,4-D丁酯降解菌降解性质的研究
        2.2.3 用丙酮法测五味子植株叶绿素含量
        2.2.4 五味子植株喷洒漂移除草剂前后叶绿素的测定比较
        2.2.5 改进CTAB法提取细菌总DNA及其检测
        2.2.6 PCR扩增及检测
        2.2.7 PCR特异DNA片段的回收及检测
        2.2.8 土壤细菌总DNA的提取
        2.2.9 土壤细菌总RNA的PCR扩增
        2.2.10 漂移除草剂广灭灵、2,4-D丁酯高效降解菌适宜条件的研究
        2.2.11 广灭灵、2,4-D丁酯降解菌酶的性质研究
3 结果与分析
    3.1 广灭灵、2,4-D丁酯抗性菌株的形态特征观察
    3.2 广灭灵、2,4-D丁酯抗性菌株降解性质的研究
        3.2.1 广灭灵农药标准曲线的绘制
        3.2.2 2,4-D丁酯标准曲线的绘制
        3.2.3 广灭灵抗性菌株降解率
        3.2.4 2,4-D丁酯抗性菌株降解率
        3.2.5 混合菌株降解率测定
    3.3 五味了植株叶绿素的测定
    3.4 CTAB法提取细菌DNA
    3.5 PCR扩增结果
    3.6 降解细菌DNA测序结果分析
    3.7 广灭灵、2,4-D丁酯高效降解菌适宜条件
        3.7.1 pH对广灭灵、2,4-D丁酯高效降解菌生长的影响
        3.7.2 温度对广灭灵、2,4-D丁酯高效降解菌生长的影响
        3.7.3 转速对广灭灵、2,4-D丁酯高效降解菌生长的影响
        3.7.4 通气量对广灭灵、2,4-D丁酯高效降解菌生长的影响
        3.7.5 农药浓度对广灭灵、2,4-D丁酯高效降解菌生长的影响
    3.8 土壤菌群总DNA提取及扩增
    3.9 降解菌酶分析
结论
参考文献
附录
攻读学位期间发表的学术论文
致谢



本文编号：3928001