几种邻苯二甲酸酯对蚯蚓（Eisenia fetida）的分子毒性机理研究
发布时间：2024-03-18 18:45
邻苯二甲酸酯类(PAEs)的污染对生态系统形成了严重威胁,蚯蚓是土壤生态系统的重要组成部分和类群最大的一类生物,利用蚯蚓作为指示生物来反映土壤污染状况,为合理评价土壤生态安全提供科学依据。本研究选择3种邻苯二甲酸酯类物质(DMP、DEP、DBP),以赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)为研究对象,从个体水平,细胞水平和大分子水平研究其毒性效应。同时还以人乳腺癌雌激素受体阳性细胞株MCF-7采用体外试验方法研究了DMP、DEP和DBP的类雌激素效应,弥补了当前关于PAEs的内分泌干扰性能方面资料的不足,为全面评价PAEs化合物的毒性作用提供了科学依据。 主要研究结果如下： (1)采用滤纸接触法,研究DMP、DEP对赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)的急性毒性效应,实验结果表明：蚯蚓对DMP、DEP两者表现出相似的中毒症状,染毒48h时,DMP的LD5o为129、603μg/cm2, DEP的LD50为145.336μg/cm2。采用自然土壤法研究DMP、DEP对蚯蚓的急性毒性效应,实验结果表明：染毒14d时,DMP的LD5o为1560.120mg/kg, DEP的LD5...
【文章页数】：87 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 PAEs简介
1.1.1 PAEs的性质和危害
1.1.2 PAEs的污染现状
1.1.3 PAEs的雌激素效应
1.2 蚯蚓在分子生态毒理学评价中的应用简介
1.2.1 蚯蚓在生态毒理学评价中的意义和测试方法
1.2.2 蚯蚓在生态毒理学评价中的生物标记物
1.3 体外实验模型
1.4 分子生物学技术在毒理机制研究中的应用
1.4.1 核酸定量技术简介
1.4.2 实时荧光定量PCR技术的原理及方法
1.4.3 实时荧光定量PCR几个重要参数
1.4.4 实时荧光定量PCR的种类
1.5 研究背景及意义
1.6 研究内容、创新点、技术路线
1.6.1 研究内容
1.6.2 创新点
1.6.3 技术路线
参考文献
第二章 DMP、DEP和DBP的急性毒性效应
2.1 试验材料
2.1.1 受试生物
2.1.2 主要试剂
2.1.3 供试土壤
2.2 试验方法
2.2.1 滤纸法测定DMP和DEP的急性毒性效应
2.2.1.1 滤纸法试验浓度设计
2.2.1.2 实验方法
2.2.2 土壤法测定DMP和DEP的急性毒性效应
2.2.2.1 土壤法试验浓度设计
2.2.2.2 实验方法
2.3 数据分析
2.4 结果
2.4.1 滤纸法测定DMP和DEP对蚯蚓的急性毒性
2.4.2 土壤法测定DMP和DEP对蚯蚓的急性毒性
2.5 分析讨论
2.6 小结
参考文献
第三章 DMP、DEP和DBP污染胁迫对蚯蚓生长发育和组织酶活性的影响
3.1 试验材料
3.1.1 受试生物
3.1.2 供试土壤
3.1.3 主要化学药品
3.1.4 实验仪器
3.2 试验方法
3.2.1 DMP、DEP和DBP单一污染对蚯蚓生长发育的影响
3.2.1.1 浓度设计
3.2.1.2 蚯蚓染毒
3.2.2 DMP、DEP和DBP单一污染对蚯蚓组织酶活性的影响
3.2.2.1 浓度设计
3.2.2.2 蚯蚓污染暴露
3.2.2.3 制备匀浆缓冲液样品
3.2.3 蛋白标准曲线的制作
3.2.3.1 蛋白含量测定的原理
3.2.3.2 蛋白含量测定的溶液配制
3.2.3.3 标准曲线的制作
3.2.4 样品提取液中蛋白浓度的测定
3.2.5 酶活的测定
3.3 数据分析
3.4 结果
3.4.1 DMP、DEP和DBP单一污染情况下蚯蚓的体重变化
3.4.2 蛋白质测定的标准曲线
3.4.3 DMP、DEP和DBP单一污染对蚯蚓体内SOD、CAT、AChE活性影响
3.5 分析与讨论
3.6 小结
参考文献
第四章 DMP、DEP和DBP对蚯蚓体腔细胞溶酶体膜稳定性的影响
4.1 试验材料
4.1.1 受试生物
4.1.2 主要试剂
4.1.3 主要实验仪器
4.2 试验方法
4.2.1 试验浓度设计
4.2.2 实验方法
4.2.3 中性红试验
4.2.3.1 配制实验溶液
4.2.3.2 提取蚯蚓体腔液
4.2.3.3 中性红染色和记录中性保留时间
4.3 数据分析
4.4 结果
4.4.1 DMP单一污染对蚯蚓体腔细胞溶酶体膜稳定性的影响
4.4.2 DEP单一污染对蚯蚓体腔细胞溶酶体膜稳定性的影响
4.4.3 DBP单一污染对蚯蚓体腔细胞溶酶体膜稳定性的影响
4.5 分析讨论
4.6 小结
参考文献
第五章 DMP、DEP、DBP的雌激素样作用研究
5.1 实验材料
5.1.1 实验细胞
5.1.2 主要药品与试剂
5.1.3 实验材料与仪器
5.2 实验方法
5.2.1 实验分组
5.2.2 细胞培养、传代、冻存和复苏
5.2.3 细胞计数
5.2.4 MTT比色法
5.2.4.1 溶液和药物配制
5.2.4.2 接种细胞和暴露处理
5.2.4.3 检测细胞活力
5.2.5 RT-qPCR检测基因表达
5.2.5.1 接种细胞和暴露处理
5.2.5.2 细胞的总RNA提取
5.2.5.3 细胞RNA浓度测定
5.2.5.4 反转录制备细胞cDNA
5.2.5.5 PCR扩增反应
5.3 数据处理
5.4 结果
5.4.1 DMP、DEP、DBP对MCF-7细胞活力的影响
5.4.2 DMP、DEP、DBP对MCF-7细胞雌激素受体基因表达的影响
5.5 分析讨论
5.6 小结
参考文献
第六章 结论与展望
6.1 结论
6.2 展望
致谢
攻读硕士期间发表论文的情况
本文编号：3931653
【文章页数】：87 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 PAEs简介
1.1.1 PAEs的性质和危害
1.1.2 PAEs的污染现状
1.1.3 PAEs的雌激素效应
1.2 蚯蚓在分子生态毒理学评价中的应用简介
1.2.1 蚯蚓在生态毒理学评价中的意义和测试方法
1.2.2 蚯蚓在生态毒理学评价中的生物标记物
1.3 体外实验模型
1.4 分子生物学技术在毒理机制研究中的应用
1.4.1 核酸定量技术简介
1.4.2 实时荧光定量PCR技术的原理及方法
1.4.3 实时荧光定量PCR几个重要参数
1.4.4 实时荧光定量PCR的种类
1.5 研究背景及意义
1.6 研究内容、创新点、技术路线
1.6.1 研究内容
1.6.2 创新点
1.6.3 技术路线
参考文献
第二章 DMP、DEP和DBP的急性毒性效应
2.1 试验材料
2.1.1 受试生物
2.1.2 主要试剂
2.1.3 供试土壤
2.2 试验方法
2.2.1 滤纸法测定DMP和DEP的急性毒性效应
2.2.1.1 滤纸法试验浓度设计
2.2.1.2 实验方法
2.2.2 土壤法测定DMP和DEP的急性毒性效应
2.2.2.1 土壤法试验浓度设计
2.2.2.2 实验方法
2.3 数据分析
2.4 结果
2.4.1 滤纸法测定DMP和DEP对蚯蚓的急性毒性
2.4.2 土壤法测定DMP和DEP对蚯蚓的急性毒性
2.5 分析讨论
2.6 小结
参考文献
第三章 DMP、DEP和DBP污染胁迫对蚯蚓生长发育和组织酶活性的影响
3.1 试验材料
3.1.1 受试生物
3.1.2 供试土壤
3.1.3 主要化学药品
3.1.4 实验仪器
3.2 试验方法
3.2.1 DMP、DEP和DBP单一污染对蚯蚓生长发育的影响
3.2.1.1 浓度设计
3.2.1.2 蚯蚓染毒
3.2.2 DMP、DEP和DBP单一污染对蚯蚓组织酶活性的影响
3.2.2.1 浓度设计
3.2.2.2 蚯蚓污染暴露
3.2.2.3 制备匀浆缓冲液样品
3.2.3 蛋白标准曲线的制作
3.2.3.1 蛋白含量测定的原理
3.2.3.2 蛋白含量测定的溶液配制
3.2.3.3 标准曲线的制作
3.2.4 样品提取液中蛋白浓度的测定
3.2.5 酶活的测定
3.3 数据分析
3.4 结果
3.4.1 DMP、DEP和DBP单一污染情况下蚯蚓的体重变化
3.4.2 蛋白质测定的标准曲线
3.4.3 DMP、DEP和DBP单一污染对蚯蚓体内SOD、CAT、AChE活性影响
3.5 分析与讨论
3.6 小结
参考文献
第四章 DMP、DEP和DBP对蚯蚓体腔细胞溶酶体膜稳定性的影响
4.1 试验材料
4.1.1 受试生物
4.1.2 主要试剂
4.1.3 主要实验仪器
4.2 试验方法
4.2.1 试验浓度设计
4.2.2 实验方法
4.2.3 中性红试验
4.2.3.1 配制实验溶液
4.2.3.2 提取蚯蚓体腔液
4.2.3.3 中性红染色和记录中性保留时间
4.3 数据分析
4.4 结果
4.4.1 DMP单一污染对蚯蚓体腔细胞溶酶体膜稳定性的影响
4.4.2 DEP单一污染对蚯蚓体腔细胞溶酶体膜稳定性的影响
4.4.3 DBP单一污染对蚯蚓体腔细胞溶酶体膜稳定性的影响
4.5 分析讨论
4.6 小结
参考文献
第五章 DMP、DEP、DBP的雌激素样作用研究
5.1 实验材料
5.1.1 实验细胞
5.1.2 主要药品与试剂
5.1.3 实验材料与仪器
5.2 实验方法
5.2.1 实验分组
5.2.2 细胞培养、传代、冻存和复苏
5.2.3 细胞计数
5.2.4 MTT比色法
5.2.4.1 溶液和药物配制
5.2.4.2 接种细胞和暴露处理
5.2.4.3 检测细胞活力
5.2.5 RT-qPCR检测基因表达
5.2.5.1 接种细胞和暴露处理
5.2.5.2 细胞的总RNA提取
5.2.5.3 细胞RNA浓度测定
5.2.5.4 反转录制备细胞cDNA
5.2.5.5 PCR扩增反应
5.3 数据处理
5.4 结果
5.4.1 DMP、DEP、DBP对MCF-7细胞活力的影响
5.4.2 DMP、DEP、DBP对MCF-7细胞雌激素受体基因表达的影响
5.5 分析讨论
5.6 小结
参考文献
第六章 结论与展望
6.1 结论
6.2 展望
致谢
攻读硕士期间发表论文的情况
本文编号：3931653
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