脱氧雪腐镰刀菌烯醇降解菌及降解酶的研究
发布时间：2024-03-26 20:07
镰刀菌产生的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)是粮食中最常见的一类真菌毒素。它们及其产生的真菌毒素导致粮食和饲料污染腐烂、真菌毒素的污染给全世界造成了巨大的经济损失。本研究旨在利用生物技术降解DON,削减其危害,保障粮油及食品质量安全,主要开展了DON降解菌的筛选、鉴定、降解产物的结构推测、降解酶的初步研究等工作,主要归结如下： 以DON为唯一碳源,通过平板分离纯化,经高效液相色谱(HPLC)检测,对降解效果较高的菌株进行分子鉴定。最终筛选得到的菌株对DON的降解率达56.61%,通过16S rDNA序列分析,鉴定为假单胞杆菌。筛选出的菌株对DON有较好的降解效果。 通过Q-TOF质谱分析,发现降解菌降解DON产生了新的降解产物,碎片离子为m/z265.1345,可能失去CH2O,通过结构分析,推测出了降解产物的可能结构。 酒糟蛋白(DDG)中加入降解酶3h后,降解率达53.71%。处理12h后,降解率达88.66%,说明该降解酶对糖化醪中的DON有明显的降解效果。DDG经过乳化后,能提高降解效果,但加酶后的乳化产生的高剪切力会略微影响酶活。酸性条件下会严重影响...
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
1.1 DON的基本性质
1.1.1 理化性质
1.1.2 DON的产生
1.2 DON的危害
1.2.1 DON对人的影响
1.2.2 DON对细胞的影响
1.2.3 DON对动物的影响
1.3 DON的污染状况
1.3.1 粮食中DON的污染状况
1.3.2 食品中DON的污染状况
1.3.3 饲料中DON的污染状况
1.4 DON的检测方法
1.4.1 免疫学检测
1.4.2 物理化学检测
1.5 DON的削减方法
1.5.1 物理方法
1.5.2 化学方法
1.5.3 生物方法
1.6 生物降解途径
1.6.1 3C—OH氧化作用
1.6.2 环氧键开环
1.6.3 水合作用
1.6.4 糖苷化作用
1.6.5 3C-异构化作用
1.7 研究目的和意义
第二章 脱氧雪腐镰刀菌烯醇降解菌的筛选与鉴定
2.1 试验材料
2.1.1 菌种与培养基
2.1.2 试剂
2.1.3 主要仪器设备
2.2 试验方法
2.2.1 样品的采集
2.2.2 菌株的分离和纯化
2.2.3 降解菌株的筛选
2.2.4 DON的检测
2.2.5 标准曲线的建立
2.2.6 形态鉴定
2.2.7 生长曲线
2.2.8 分子鉴定
2.2.9 序列的数据处理
2.2.10 Q-TOF系统参数
2.3 结果与分析
2.3.1 采样
2.3.2 降解菌的筛选
2.3.3 降解菌的鉴定
2.3.4 16S rDNA序列系统发育分析
2.3.5 降解产物Q-TOF分析
2.4 讨论
2.5 本章小结
第三章 大肠杆菌表达降解酶的初步研究
3.1 试验材料
3.1.1 供试菌株
3.1.2 培养基
3.1.3 试剂
3.1.4 仪器设备
3.2 试验方法
3.2.1 降解酶的诱导表达
3.2.2 降解酶降解DDG中的DON
3.2.3 降解酶降解DDGS中的DON
3.2.4 样品的处理
3.2.5 降解效果的检测
3.3 结果与分析
3.3.1 降解酶的诱导表达
3.3.2 HPLC标准曲线
3.3.3 降解酶降解DDG中的DON
3.3.4 降解酶降解DDGS中的DON
3.4 讨论
3.5 本章小结
第四章 毕赤酵母表达降解酶的初步研究
4.1 试验材料
4.1.1 供试菌株
4.1.2 培养基
4.1.3 试剂
4.1.4 仪器设备
4.2 试验方法
4.2.1 工程菌的诱导表达
4.2.2 温度对酶活的影响
4.2.3 pH对酶活的影响
4.2.4 降解酶降解PBS中的DON
4.2.5 降解酶降解DDGS中的DON
4.3 结果与分析
4.3.1 降解酶的表达
4.3.2 温度对酶活的影响
4.3.3 pH对酶活的影响
4.3.4 降解酶降解PBS中的DON
4.3.5 降解酶降解DDGS中的DON
4.4 讨论
4.5 本章小结
全文总结
参考文献
致谢
个人简历
本文编号：3939616
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
1.1 DON的基本性质
1.1.1 理化性质
1.1.2 DON的产生
1.2 DON的危害
1.2.1 DON对人的影响
1.2.2 DON对细胞的影响
1.2.3 DON对动物的影响
1.3 DON的污染状况
1.3.1 粮食中DON的污染状况
1.3.2 食品中DON的污染状况
1.3.3 饲料中DON的污染状况
1.4 DON的检测方法
1.4.1 免疫学检测
1.4.2 物理化学检测
1.5 DON的削减方法
1.5.1 物理方法
1.5.2 化学方法
1.5.3 生物方法
1.6 生物降解途径
1.6.1 3C—OH氧化作用
1.6.2 环氧键开环
1.6.3 水合作用
1.6.4 糖苷化作用
1.6.5 3C-异构化作用
1.7 研究目的和意义
第二章 脱氧雪腐镰刀菌烯醇降解菌的筛选与鉴定
2.1 试验材料
2.1.1 菌种与培养基
2.1.2 试剂
2.1.3 主要仪器设备
2.2 试验方法
2.2.1 样品的采集
2.2.2 菌株的分离和纯化
2.2.3 降解菌株的筛选
2.2.4 DON的检测
2.2.5 标准曲线的建立
2.2.6 形态鉴定
2.2.7 生长曲线
2.2.8 分子鉴定
2.2.9 序列的数据处理
2.2.10 Q-TOF系统参数
2.3 结果与分析
2.3.1 采样
2.3.2 降解菌的筛选
2.3.3 降解菌的鉴定
2.3.4 16S rDNA序列系统发育分析
2.3.5 降解产物Q-TOF分析
2.4 讨论
2.5 本章小结
第三章 大肠杆菌表达降解酶的初步研究
3.1 试验材料
3.1.1 供试菌株
3.1.2 培养基
3.1.3 试剂
3.1.4 仪器设备
3.2 试验方法
3.2.1 降解酶的诱导表达
3.2.2 降解酶降解DDG中的DON
3.2.3 降解酶降解DDGS中的DON
3.2.4 样品的处理
3.2.5 降解效果的检测
3.3 结果与分析
3.3.1 降解酶的诱导表达
3.3.2 HPLC标准曲线
3.3.3 降解酶降解DDG中的DON
3.3.4 降解酶降解DDGS中的DON
3.4 讨论
3.5 本章小结
第四章 毕赤酵母表达降解酶的初步研究
4.1 试验材料
4.1.1 供试菌株
4.1.2 培养基
4.1.3 试剂
4.1.4 仪器设备
4.2 试验方法
4.2.1 工程菌的诱导表达
4.2.2 温度对酶活的影响
4.2.3 pH对酶活的影响
4.2.4 降解酶降解PBS中的DON
4.2.5 降解酶降解DDGS中的DON
4.3 结果与分析
4.3.1 降解酶的表达
4.3.2 温度对酶活的影响
4.3.3 pH对酶活的影响
4.3.4 降解酶降解PBS中的DON
4.3.5 降解酶降解DDGS中的DON
4.4 讨论
4.5 本章小结
全文总结
参考文献
致谢
个人简历
本文编号：3939616
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